检索结果-内蒙古大学图书馆

东南大学学报（医学版） 2011年第6期30卷 869-873页

作者：张红艳王春玉李彦姝王迪李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001

目的:构建3*Flag-hPAK4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内的表达与定位,并纯化PAK4蛋白。方法:提取人乳腺癌细胞MCF-7 mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有3*Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并... 详细信息

目的:构建3*Flag-hPAK4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内的表达与定位,并纯化PAK4蛋白。方法:提取人乳腺癌细胞MCF-7 mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有3*Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到非洲绿猴肾成纤维细胞COS7中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测,同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察3*Flag-hPAK4在COS7细胞内定位。使用免疫沉淀的方法纯化PAK4蛋白。结果:hPAK4全长基因序列克隆到了真核表达载体3*Flag中,酶切鉴定片段为1 800 bp。Western blotting检测到了融合蛋白3*Flag-hPAK4的表达,分子质量约为68 kDa,3*Flag-hPAK4在COS7细胞中表达定位在细胞浆中,成功纯化了PAK4蛋白。结论:成功地构建了3*Flag-hPAK4真核表达质粒,同时鉴定了3*Flag-hPAK4融合蛋白的表达,并纯化了PAK4蛋白。3*Flag-hPAK4蛋白主要定位在细胞浆中。

关键词：人P21活化激酶4 蛋白质印记免疫沉淀

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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌表达

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 375-377页

作者：王桂玲王孝会都田赵陈薇姜佩家中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法利用Kpn1和Xho1位点酶切pcDNA3.1-RUNX3质粒,将获得的1300bpRUNX3编码序列插入到pGEX-4T-2中,构建pGEX-4T-2-RUNX3质粒,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,酶切鉴... 详细信息

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法利用Kpn1和Xho1位点酶切pcDNA3.1-RUNX3质粒,将获得的1300bpRUNX3编码序列插入到pGEX-4T-2中,构建pGEX-4T-2-RUNX3质粒,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入BL21中,经IPTG诱导表达后SDS-PAGE电泳鉴定。结果酶切pGEX-4T-2-RUNX3质粒获得1300bpRUNX3片段,经测序后获得的DNA序列与GenBank进行同源性比对,证实pGEX-4T-2-RUNX3构建成功。在*** BL21用IPTG进行诱导表达后,SDS-PAGE电泳方法证实了GST-RUNX3融合蛋白表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,其融合蛋白在大肠埃希菌表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。

关键词： pGEX-4T-2-RUNX3质粒原核表达融合蛋白大肠埃希菌

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野生型和突变型GDF5蛋白表达及亚细胞定位的研究

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解剖科学进展 2012年第6期18卷 530-533页

作者：刘杏王述森刘琦高锦兰罗阳中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的研究人生长分化因子5基因(GDF5)c.1118T>G(p.L373R)突变对GDF5蛋白在HEK-293细胞系表达及其亚细胞定位的影响。方法构建pDsRed1-N1-GDF5-WT和pDsRed1-N1-GDF5-L373R载体,分别转染HEK-293细胞,细胞培养72h后通过荧光显微镜观察比较野生型和突变型GDF5蛋白荧光分布情况。结果 GDF5蛋白在HEK-293细胞中成功表达,在荧光显微镜下观察到转染野生型和突变型GDF5的细胞胞浆均匀发出红色荧光,而空载体组的红色荧光则弥散于全细胞,荧光强度均匀一致。结论野生型和突变型GDF5蛋白均定位于HEK-293细胞质。

关键词：生长分化因子5 基因突变蛋白表达 HEK-293细胞系

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Chmp3在MLE12细胞分化调控中功能的初步分析

Chmp3在MLE12细胞分化调控中功能的初步分析

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中国细胞生物学学会2013年全国学术大会

作者：陈澄刘忱陈晔拜海涛陈誉华中国医科大学细胞生物学系发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国沈阳

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小鼠肝癌及肝正常组织B4GalT糖基转移酶家族mRNA表达差异及其对细胞膜相关糖链的影响

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生命科学研究 2012年第1期16卷 48-53页

作者：马汝海王冬青潘忠诚王天骄何群赵雨杰中国医科大学基础医学院化学教研室中国辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院教育部细胞生物学重点实验室生物芯片中心中国辽宁沈阳110001

探讨肝癌模型鼠与正常小鼠肝组织B4GalT(β-1,4-半乳糖转移酶)家族mRNA表达差异以及对细胞膜相关糖链的影响.采用RT-PCR方法检测肝癌模型鼠和正常对照小鼠肝癌组织中B4GalT家族7个成员以及唾液酸α-2,3转移酶ST3GalⅢ、ST3GalⅣ、ST3Ga... 详细信息

探讨肝癌模型鼠与正常小鼠肝组织B4GalT(β-1,4-半乳糖转移酶)家族mRNA表达差异以及对细胞膜相关糖链的影响.采用RT-PCR方法检测肝癌模型鼠和正常对照小鼠肝癌组织中B4GalT家族7个成员以及唾液酸α-2,3转移酶ST3GalⅢ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ、α-1,6-岩藻糖转移酶FUT8 mRNA表达差异,应用凝集素芯片检测细胞膜表面半乳糖、岩藻糖、唾液酸表达情况.结果显示:与正常对照组相比,肝癌模型鼠肝组织中B4GalT-1和B4GalT-3、ST3GalⅣ和ST3GalⅥ、FUT8呈现高表达,肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加,提示B4GalT-1和B4GalT-3与肝癌细胞膜半乳糖链增加相关.由于细胞Galβ-1,4-GlcNAc糖表位在ST3GalⅢ、ST3GalⅣ或ST3GalⅥ催化下与唾液酸α-2,3连接生成s-lewis x抗原前体,本实验中B4GalT-1和B4GalT-3与ST3GalⅣ、ST3GalⅤ、FUT8 mRNA表达具有相关性,提示B4GalT-1和B4GalT-3可能与ST3GalⅣ、ST3GalⅥ以及FUT4协同作用,导致肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加.

关键词： B4GalT 肝癌细胞膜糖基化

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胃癌SGC-7901细胞中人RIPX—GFP融合蛋白载体构建及表达定位

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医学分子生物学杂志 2011年第1期8卷 36-39页

作者：王桂玲王孝会周颖陈薇姜佩佳中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX，并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位，并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板，采用PCR法进行人RIPX编码序列（CDS）的扩增，并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒... 详细信息

目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX，并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位，并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板，采用PCR法进行人RIPX编码序列（CDS）的扩增，并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中，用Western印迹方法检测GFP—RIPX融合蛋白的表达；用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位。结果人的RIPX编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP—C1中；证实了GFP—RIPX融合蛋白的表达；转染***后，在胃癌SGC-7901细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-RIPX载体，鉴定了外源性RIPX的表达；同时证实在胃癌SGC-7901细胞中RIPX主要定位于细胞质，为进一步研究RIPX的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。

关键词： RIPX 绿色荧光蛋白蛋白表达及定位胃癌SGC-7901细胞

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PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：李波王淳张一赵晓云刘永烁曹立业方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM... 详细信息

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM分期、淋巴结转移及生存与否相关(P<0.05);发生脑转移患者的肺部癌组织中PLGF的表达高于未发生脑转移的患者(P<0.05);在发生脑转移的小细胞肺癌患者的血清及脑转移癌组织中PLGF的表达明显高于未发生脑转移的患者(P<0.01),这提示PLGF与小细胞肺癌脑转移有关。利用体外血脑屏障模型研究发现,PLGF通过结合脑微血管内皮细胞上VEGFR-1受体,激活细胞内Rho/ROCK及下游的MAPK/ERK1/2信号,使内皮细胞间紧密连接结构蛋白occludin和claudin-5的丝氨酸/苏氨酸磷酸化水平增加,改变紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过体外血脑屏障模型。进一步利用RNAi、构建激酶表达缺陷的脑内皮细胞及激酶抑制剂抑制试验验证了上述实验结果。这表明,小细胞肺癌细胞表达的PLGF与人脑微血管内皮细胞上VEGFR-1相互作用,激活内皮细胞中RhoA/ROCK-MAPK/ERK1/2信号,影响了细胞间紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障迁移入脑。

关键词： PLGF VEGFR-1 小细胞肺癌血脑屏障脑转移

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Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：杨一鸣赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2... 详细信息

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2)培养上清液,作用于血脑屏障的体外模型人脑微血管内皮细胞(HBMEC),可以使HBMEC的MHC-I表达明显升高。细胞迁移实验表明Aβ刺激BV2的培养上清液可以促进T细胞穿过HBMEC单层,而这种促进作用可以被MHC-I的中和抗体所阻断。细胞粘附实验显示上清液促进了T细胞对HBMEC的粘附,MHC-I中和抗体可以阻断这种粘附作用。RNA干扰HBMEC的MHC-I后得到相同的结论。为了进一步研究HBMEC中高表达MHC-I促进T细胞跨内皮迁移的机制,我们采用TNF-α中和抗体预处理经过Aβ作用的BV2上清液后,再使之作用于HBMEC,发现可以阻断MHC-I的表达上调。细胞迁移和粘附实验也表明TNF-α中和抗体抑制了T细胞迁移和粘附的增多。结论:AD脑内沉积的Aβ刺激小胶质细胞分泌TNF-α,诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子,从而促进外周血T细胞粘附于脑微血管内皮并迁移进入脑实质。

关键词：阿尔茨海默病 Aβ TNF-α MHC-I T细胞

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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌中的表达

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解剖科学进展 2011年第3期17卷 284-286页

作者：王桂玲王孝会都田赵陈薇姜佩家中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切... 详细信息

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入***21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果双酶切获得1300bp片段,证明RUNX3片段被成功导入pGEX-4T-2,并在测序后与GenBank进行同源性比对,比对进一步证实原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3构建成功,并用IPTG诱导,SDS-PAGE方法证实了GST/RUNX3融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。

关键词：质粒原核表达融合蛋白

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褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：韦佳祎张海波何威中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三... 详细信息

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三型组蛋白的高乙酰化表达,提示组蛋白乙酰化修饰途径可能是褪黑素对可卡因抑制作用的机制之一。本研究应用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)和共聚焦激光扫描显微镜技术等检测了褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的作用并初步探索了其DNA甲基化修饰机制。结果显示:褪黑素的小剂量、慢性给药可抑制可卡因奖赏效应的表达强度;可卡因诱导海马神经元5-甲基胞嘧啶的高表达,而褪黑素抑制这种高表达。海马是中枢奖赏通路中的重要结构,其不但向前额叶皮层有直接或间接的纤维投射,还通过谷氨酸能神经元和伏核有直接联系,在药物成瘾记忆和突触可塑性变化中发挥重要作用。我们的实验结果提示,DNA甲基化修饰机制可能是精神活性药物引起精神和行为变化的一个重要的调节机制。

关键词：褪黑素可卡因条件性位置偏爱 DNA甲基化

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