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作者：赵峰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究...

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究重点.表皮角质形成细胞在胎儿皮肤再生过程中起到了一定的作用.妊娠早期,皮肤创伤后再上皮化过程迅速,角质形成细胞的增殖及迁移能力显著高于妊娠晚期.并且,角质形成细胞能够通过对成纤维细胞的作用进而调控瘢痕形成过程.我们通过本研究检测人孕中、晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达差异并探讨表皮角质形成细胞中差异表达的miRNAs对皮肤创伤无瘢痕愈合的作用.方法：我们应用Solexa二代测序分别检测3例孕中期及3例孕晚期胎儿表皮角质形成细胞中miRNAs的表达.在去除低质量序列并与人类基因组数据库及已知非编码RNA数据库比对后,应用mirTools 2.0网站运行miRDeep 2.0在测序结果原始数据中预测候选新miRNAs.实时定量PCR技术验证测序得到的miRNAs相对表达结果.RNAfold及UCSC预测候选新miRNAs的二级结构及其在基因组中的定位.将候选新miRNAs与已知miRNA数据库比对预测候选新miRNAs的保守性.生物信息学分析方法预测候选新miRNAs的靶基因及靶向传导通路.结果：我们检测出106个高度可能成为新miRNA的候选新miRNAs.将测序与实时定量PCR的检测结果进行相关性分析得出测序结果具有很高的可重复性,可以代表不同胎龄的人角质形成细胞中miRNAs的基本相对表达情况.通过RNAfold,我们获得候选新miRNAs前体序列的二级结构等相关信息.我们预测出25个与已知各物种miRNAs具有相同种子序列的候选新miRNAs.其中,获得了19个保守性高的候选新miRNAs,8个是与已知人miRNAs有高度保守性的.孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.不同胎龄的表皮角质形成细胞中,6对miRNAs存在成簇表达的现象.生物信息学预测差异表达的miRNAs能够广泛调控TGF-β/Smads传导通路.结论：与孕中期相比,孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.孕中期角质形成细胞中高表达的miRNAs通过显著抑制TGF-β/Smads传导通路促进胎儿无瘢痕愈合.

关键词：

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Cornelia de Lange综合征致病基因突变分析

Cornelia de Lange综合征致病基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的:Cornelia de Lange综合征(Cornelia de Lange Syndrome)是一类罕见的累及多器官系统的遗传异质性疾病,该病有65%的患者由NIPBL,SMC1A和SMC3这三个基因突变所导致,其中NIPBL基因突变占50-60%。主要临床表现为特殊面容,上睑下垂,近... 详细信息

目的:Cornelia de Lange综合征(Cornelia de Lange Syndrome)是一类罕见的累及多器官系统的遗传异质性疾病,该病有65%的患者由NIPBL,SMC1A和SMC3这三个基因突变所导致,其中NIPBL基因突变占50-60%。主要临床表现为特殊面容,上睑下垂,近视、胎儿宫内及出生后生长迟滞,多器官发育异常,癫痫并常伴有严重的智力障碍。本实验室收集到临床诊断为Cornelia de Lange综合征的患儿9例,对致病基因NIPBL进行突变分析,旨在为患儿基因诊断和遗传学咨询提供依据。方法:经知情同意后采集患儿外周血并提取基因组DNA,Trizol法提取总RNA,利用聚合酶链式反应(PCR)、反转录PCR、DNA测序对NIPBL基因编码序列进行突变分析,并应用限制性内切酶片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)对100名正常人进行该突变位点的检测。结果:在9名患儿中发现4种NIPBL基因突变,分别为三个国际尚未报道的突变IVS13-3C>G,c.1639C>T(***547*),c.6621G>A(***2207lle)和一个已知突变c.1644dupA(***549Argfs*20。且IVS13-3C>G突变导致NIPBL基因在转录过程中出现外显子跳跃,使基因第1 4外显子缺失,形成新的转录本。结论:在9名Cornelia de Lange综合征患儿中,NIPBL基因突变的阳性率为44%,3种NIPBL基因新突变的发现丰富了突变数据库,为临床诊断提供依据。

关键词： Cornelia de Lange综合征 NIPBL基因突变分析

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hLMO3基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 347-350页

作者：顾卉佟宇鑫刘彤李妍李丹妮袁正伟中国医科大学附属盛京医院实验研究中心辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室细胞生物学教育部卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学临床医学系辽宁沈阳110001

目的构建hLMO3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO3基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞HEK293细胞中,提取细胞蛋白进... 详细信息

目的构建hLMO3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO3基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO3在HEK293细胞内的定位。结果 hLMO3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为440bp;Western blot检测到融合蛋白在HEK293细胞表达,分子量约为42kDa,pEGFP-LMO3在人HEK293细胞中主要定位于细胞核内。结论成功构建了hLMO3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO3蛋白在HEK293细胞中主要定位于细胞核内。

关键词： hLMO3基因质粒构建基因表达与定位人HEK293细胞

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壳聚糖多孔明胶微球温敏凝胶载药体的建立与评价

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解剖科学进展 2016年第5期22卷 490-492页

作者：于湛于敏贾宏光顾湘张丽川黄小兵刘娅孙建军魏永祥首都医科大学附属北京安贞医院耳鼻咽喉头颈外科北京100029 海军总医院全军耳鼻咽喉中心北京100048 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110122

目的寻找有效的跨圆窗膜载药体,制备多孔明胶微球结合壳聚糖/β-GP溶液的温敏特点,制备新型可注射、可降解、无毒副作用并具有缓释效应的药物载体,为后续动物实验提供研究基础。方法利用化学反应合成碳酸钙（CaCO_3）模板,采用W/O型乳... 详细信息

目的寻找有效的跨圆窗膜载药体,制备多孔明胶微球结合壳聚糖/β-GP溶液的温敏特点,制备新型可注射、可降解、无毒副作用并具有缓释效应的药物载体,为后续动物实验提供研究基础。方法利用化学反应合成碳酸钙（CaCO_3）模板,采用W/O型乳化-固化法制备了明胶-碳酸钙复合微球,用EDTA处理除去碳酸钙,得到多孔的明胶微球。并以环境扫描电子显微镜对多孔明胶微球进行表征。利用壳聚糖与β-GP合成溶液物理混合形成壳聚糖多孔明胶微球温敏凝胶载药体。结果扫描电镜显示,明胶微球表面呈多孔结构,粒径在2~4um之间。壳聚糖/β-GP冻干后呈多孔网络状。壳聚糖/β-GP具有温敏性,且两者共混后温敏性不变。结论壳聚糖/β-GP溶液共混可制备成具有温敏效果的凝胶载药体,为跨膜药物转运的研究提供基础。

关键词：壳聚糖明胶微球碳酸钙温敏凝胶

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的:观察用聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)包被的SPIO(PEI-SPIO)作为基因载体时对细胞的毒性以及将REST-siRNA、SHH-siRNA共转染hADSCs后其分化为胰岛前体细胞的能力.方法:台盼蓝染色、MTT、免疫荧光、Real-time PCR、Western-blot、普鲁士蓝染色实验结果一、hADSCs的分离和培养原代培养hADSCs 24小时后,少量细胞贴壁.传代细胞很快贴壁,细胞形态较均匀一致,呈长梭形均匀贴壁分布.二、hADSCs细胞表面抗原标志物流式细胞学鉴定流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测结果显示,hADSCs不表达CD34,主要表达CD105和CD90.表明所分离的hADSCs不包含造血干细胞及成熟的造血细胞,是一群高表达间质细胞表面分子的细胞..

关键词：

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一例多种羧化酶缺乏症的基因变异分析

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中华医学遗传学杂志 2020年第4期37卷 419-420-421-422页

作者：邢雪莎刘双罗萍黎芳吴雨虹王述森麻宏伟罗阳中国医科大学生命科学学院医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的对1例临床诊断为多种羧化酶缺乏症(multiple carboxylase deficiency, MCD)的患儿及其父母进行相关致病基因的变异分析,为临床诊断及遗传咨询提供依据。方法应用PCR技术和DNA测序技术对患儿的MCD致病基因BT和HLCS编码区进行变异检... 详细信息

目的对1例临床诊断为多种羧化酶缺乏症(multiple carboxylase deficiency, MCD)的患儿及其父母进行相关致病基因的变异分析,为临床诊断及遗传咨询提供依据。方法应用PCR技术和DNA测序技术对患儿的MCD致病基因BT和HLCS编码区进行变异检测,并对患儿父母进行相应基因变异分析。在80名正常人中对未报道过的基因变异进行PCR-限制性片段长度多态性分析。结果患儿的BT基因编码区未发现碱基改变,HLCS基因存在c.286delG (***96Leufs*162)和c.1648G>A (***550Met)复合杂合变异,其中c.286delG (***96Leufs*162)经PCR-限制性片段长度多态性分析验证为新变异。结论 HLCS基因c.286delG (***96Leufs*162)和c.1648G>A (***550Met)变异可能为患儿的致病原因,致病基因的检出为临床诊断及遗传咨询提供了依据,同时丰富了HLCS基因变异谱。

关键词：多种羧化酶缺乏症 HLCS基因基因变异

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mcroiRNA-149通过调控人角质形成细胞中IL-6的表达而促进皮肤无瘢痕愈合

mcroiRNA-149通过调控人角质形成细胞中IL-6的表达而促进皮肤无瘢...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：郎宏鑫施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室千细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过...

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过对孕中期和孕晚期胎儿皮肤角质形成细胞总RNA进行mRNAs和microRNAs第二代测序分析,得到孕中期胎儿皮肤中呈现高表达的microRNAs,我们发现microRNA-149在孕中期呈高表达,并通过实时荧光定量PCR对其相对表达情况进行验证.通过生物信息学分析与双荧光素酶报告基因验证mcroiRNA-149的靶基因.用Lipo2000将microRNA-149的mimic转染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),设置阴性对照组和空白对照组,通过Elisa检测细胞培养液中IL-6的表达改变.并通过Transwell实验和MTS实验检测microRNA-149mimic对HaCaT的迁移和增殖情况.并且通过Transwell将转染microRNA-149mimic的HaCaT与人真皮成纤维细胞进行共培养,检测转染microRNA-149mimic的HaCaT对人真皮成纤维细胞的迁移影响,并检测人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况.结果：实时荧光定量PCR检测到mcroiRNA-149在孕中期的表达高于孕晚期,提示可能参与胎儿皮肤无瘢痕愈合过程.通过***和TargetScan分析确定microRNA-149的靶基因为IL-6,并经过双荧光素酶报告基因实验进行验证.将microRNA-149的mimic转染HaCaT后,Elisa检测到转染后的培养液中IL-6表达明显下调,结果有统计学意义(P＜0.05).microRNA-149mimic对HaCaT的增殖无明显影响;而可以促进HaCaT的迁移,差异有统计学意义(P＜0.05).转染microRNA-149mimic的HaCaT对与其共培养的人真皮成纤维细胞的影响以及人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况结果还有待于进一步探讨研究.

关键词：

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基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳系统对大肠癌中K-ras基因点突变的检测

基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳系统对大肠癌中K-ras基因点...

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第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议

作者：张惠丹宋瑾王晓楠徐章润戴敬方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室东北大学分析科学研究中心沈阳建筑大学信息与控制工程学院

K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因。微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点。本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将温度梯... 详细信息

K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因。微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点。本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将温度梯度毛细管电泳(TGCE)系统

关键词：微流控芯片温度梯度毛细管电泳大肠癌K-ras 基因点突变

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DMT1小分子抑制物ebselen对铁诱导tau蛋白磷酸化的拮抗作用

DMT1小分子抑制物ebselen对铁诱导tau蛋白磷酸化的拮抗作用

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中国解剖学会2013年年会

作者：解玲郑炜王占友中国医科大学病理生理学教研室和教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁医学院人体解剖学教研室

阿尔茨海默病是一种以进行性痴呆为主要特征的神经系统退行性疾病,tau蛋白异常磷酸化是其主要病理变化之一。目前研究显示tau蛋白与铁离子的聚集及转运体DMT1具有密切相关性。为了探讨小分子ebselen是否能通过抑制DMT1对二价铁离子的转... 详细信息

阿尔茨海默病是一种以进行性痴呆为主要特征的神经系统退行性疾病,tau蛋白异常磷酸化是其主要病理变化之一。目前研究显示tau蛋白与铁离子的聚集及转运体DMT1具有密切相关性。为了探讨小分子ebselen是否能通过抑制DMT1对二价铁离子的转运,从而拮抗铁诱导的SH-SY5Y细胞内tau蛋白磷酸化。本实验以SH-SY5Y细胞作为体内研究模型,采用MTT法分析细胞活力;Western Blot法进行半定量分析tau蛋白及磷酸化

关键词： tau ebselen 磷酸化抑制物拮抗作用

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前列地尔对SUMO介导的2型糖尿病大鼠脑组织病变的作用

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心血管康复医学杂志 2013年第6期22卷 583-586页

作者：杨红艳徐锦春陈思娇郭英华张怡舜梁怡凡贺诗元董思雨何欢宋今丹中国医科大学附属第一医院老年病教研室辽宁沈阳110001 本溪市铁路医院内科中国医科大学中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室

目的:探讨小泛素样修饰蛋白(SUMO)化修饰对核因子(NF)-κB通路激活的负性调控在2型糖尿病大鼠脑部病变中的干预作用,为前列地尔对其病变的早期干预提供依据。方法:随机抽取40周龄的10只GK大鼠为前列地尔组(前列地尔2.5μg/g,尾尖静脉注... 详细信息

目的:探讨小泛素样修饰蛋白(SUMO)化修饰对核因子(NF)-κB通路激活的负性调控在2型糖尿病大鼠脑部病变中的干预作用,为前列地尔对其病变的早期干预提供依据。方法:随机抽取40周龄的10只GK大鼠为前列地尔组(前列地尔2.5μg/g,尾尖静脉注射给药,1次/d,共10d)、10只为糖尿病对照组,另取10只Wistar雄性大鼠作为正常对照组。正常对照组和糖尿病对照组给予等剂量生理盐水,均为尾尖静脉注射给药。三组均给予普通饲料。测定和观察血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)变化及NF-κB抑制因子(IκB)、NF-κB、SUMO1的水平变化。结果:(1)糖尿病对照组、前列地尔组大鼠的血糖、TG、TC均显著高于正常对照组(P均<0.05);(2)HE染色观察:正常对照组脑组织细胞形态正常,糖尿病对照组、前列地尔组脑组织可见细胞肥大,疏松样改变,前列地尔组病变较轻;(3)免疫组化测定的IκB、NF-κB、SUMO1:正常对照组少许阳性表达,糖尿病对照组、前列地尔组表达均显著增加(P<0.05或<0.01),但前列地尔组较糖尿病对照组IκB[(0.242±0.034)比(0.268±0.017)]、NF-κB[(0.373±0.015)比(0.486±0.013)]表达显著减少,SUMO1[(0.463±0.015)比(0.343±0.018)]表达显著增加(P均<0.05)。结论:小泛素样修饰蛋白在糖尿病大鼠脑组织表达增多,在前列地尔组表达更多,前列地尔对糖尿病大鼠脑组织病变有一定改善作用。

关键词：糖尿病 2型 NF—κB 小泛素相关修饰蛋白质类前列地尔

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