检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2012年第2期32卷 226-232页

作者：王淳方文刚李波辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组... 详细信息

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架重组;将重组子转染HEK 293细胞,经过3轮病毒包装,收获病毒颗粒并测定滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞(NCI-H 250和NCI-H 209),通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应,并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果成功构建带有靶基因干扰序列及scramble、空载体的3种腺病毒重组子(AD-shuttle-shPLGF、AD-shuttle-scramble和AD-shuttle)。经过HEK 293细胞包装,最终获得3株病毒颗粒,病毒滴度分别为1.5×1011、1.6×1011和1.6×1011。NCI-H 250和NCI-H 209细胞感染腺病毒颗粒48 h后,大部分细胞表达GFP,感染率接近100%;且两株细胞感染AD-shuttle-shPLGF病毒48 h后,PLGF mRNA表达水平降低(P<0.01),肿瘤细胞侵袭能力明显下降(P<0.01)。结论携带shRNA的腺病毒表达载体可以代替电转、脂质体介导等方法,使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。

关键词： RNA干扰 shRNA 腺病毒载体悬浮细胞

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基于亚硫酸氢盐-微流控温度梯度毛细管电泳的高灵敏度基因甲基化检测平台的建立

基于亚硫酸氢盐-微流控温度梯度毛细管电泳的高灵敏度基因甲基化...

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2012年全国微纳尺度生物分离分析学术会议、第七届全国微全分析系统学术会议暨第三届国际微流控分析(西湖)学术论坛

作者：张惠丹单连峰王晓楠马倩方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001

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PI3K和ROCK信号通路在MSC穿过人脑微血管内皮细胞单层中发挥作用

PI3K和ROCK信号通路在MSC穿过人脑微血管内皮细胞单层中发挥作用

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细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉

作者：尚德淑蔺美娜孙伟李波许欣方文刚赵伟东陈誉华中国医科大学细胞生物学系发育细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室

骨髓间充质干细胞(MSC)不仅能分化成中胚层来源的细胞,而且还能跨胚层分化为内胚层来源的肝细胞、肺泡上皮细胞和外胚层的神经细胞。MSC代表了一种非常有前景的细胞治疗手段。在糖尿病、肝损伤、心肌梗死等疾病动物模型中,以MSC介导的... 详细信息

骨髓间充质干细胞(MSC)不仅能分化成中胚层来源的细胞,而且还能跨胚层分化为内胚层来源的肝细胞、肺泡上皮细胞和外胚层的神经细胞。MSC代表了一种非常有前景的细胞治疗手段。在糖尿病、肝损伤、心肌梗死等疾病动物模型中,以MSC介导的细胞治疗取得了显著的

关键词： MSC P13K ROCK 人脑微血管内皮细胞

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α-2，3-唾液酸糖基转移酶ST3家族分子序列生物信息学分析

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 497-500,511页

作者：马汝海钟连生潘忠诚王天骄何群中国医科大学基础医学院化学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院教育部细胞生物学重点实验室生物芯片中心沈阳110001

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族... 详细信息

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化分析显示其各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化,家族中各亚型底物特异性可能与其糖基化位点相关。

关键词： α-2,3-唾液酸糖基转移酶同源性分析结构域系统进化树

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PAK4负调控胃癌细胞TGF-β1/Smads信号通路

PAK4负调控胃癌细胞TGF-β1/Smads信号通路

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：王春玉李彦姝张红艳李丰中国医科大学细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室

PAK4是一种丝苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、迁移及侵袭等过程中起作用。我们发现了三个新的PAK4互作蛋白:Smad2、Smad3及Smad4。首先,利用体内体外试验证实了它们的相互作用,并确定了其互作的关键结构域。进一步,我们发现过表达PAK4能够... 详细信息

PAK4是一种丝苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、迁移及侵袭等过程中起作用。我们发现了三个新的PAK4互作蛋白:Smad2、Smad3及Smad4。首先,利用体内体外试验证实了它们的相互作用,并确定了其互作的关键结构域。进一步,我们发现过表达PAK4能够抑制TGFβ1刺激引起的Smad2/3的磷酸化改变、Smad2/3/4转录复合体的形成及C末端磷酸化的Smad2/3的核转位;利用RNA干涉技术沉默PAK4能够增强TGFβ1刺激引起的Smad2/3的磷酸化改变。进而,我们利用荧光素酶双报告基因检测系统证实过表达PAK4能够抑制Smad2/3反应元件的转录活性,利用RT-PCR证实过表达PAK4能够抑制TGFβ1下游基因PAI1的mRNA水平,并证实沉默PAK4能够增强TGFβ1刺激引起的细胞周期相关蛋白的改变及过表达PAK4能够抑制TGFβ1刺激引起的细胞周期相关蛋白的改变。综上,我们证实了PAK4通过与Smads直接相互作用抑制TGFβ1/Smads通路对细胞周期进程的阻滞作用,从而帮助胃癌细胞逃避TGFβ1/Smads引起的生长抑制。

关键词： PAK4 Smad2/3/4 TGF-β1 胃癌

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医学院校开设研究生流式细胞术实验课的探索与实践

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基础医学教育 2017年第12期19卷 962-964页

作者：李婉明刘芙蓉程雅洁张莹于淼方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110122 中国医科大学科学实验中心三部

流式细胞术是一门具有广泛科研以及临床应用价值的技术。在研究生教学中开设针对性的流式细胞术实验课,对研究生加深该技术的理解和掌握并有效用于课题研究具有重要意义。为此中国医科大学细胞生物学教研室在研究生细胞生物学实验课教... 详细信息

流式细胞术是一门具有广泛科研以及临床应用价值的技术。在研究生教学中开设针对性的流式细胞术实验课,对研究生加深该技术的理解和掌握并有效用于课题研究具有重要意义。为此中国医科大学细胞生物学教研室在研究生细胞生物学实验课教学中设置了流式细胞术检测5-FU对大肠癌细胞系HCT116的细胞周期抑制作用和流式细胞术检测CD44在大肠癌细胞系HCT116中的表达情况两个教学范例。研究生通过亲自参与细胞的收集,荧光的标记,样本的上机操作以及数据的分析等,不仅提高了研究生的动手操作能力,还培养了研究生的科研分析能力,为研究生在未来的科研和医疗工作中利用该技术奠定了基础。

关键词：流式细胞术实验教学研究生教育

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PAK6通过磷酸化依赖的泛素化负向调节前列腺癌细胞雄激素受体信号通路

PAK6通过磷酸化依赖的泛素化负向调节前列腺癌细胞雄激素受体信号...

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：刘彤李洋顾卉朱戈李丰中国医科大学细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室

雄激素受体在前列腺癌细胞的生长和转移中具有重要的生物学功能,已报道P21活化激酶6(PAK6)能够下调雄激素受体的转录活性,但具体的分子机制目前尚不清楚。Mdm2是一个含有RING结构域的泛素化E3连接酶,它能够结合并诱导底物雄激素受体的... 详细信息

雄激素受体在前列腺癌细胞的生长和转移中具有重要的生物学功能,已报道P21活化激酶6(PAK6)能够下调雄激素受体的转录活性,但具体的分子机制目前尚不清楚。Mdm2是一个含有RING结构域的泛素化E3连接酶,它能够结合并诱导底物雄激素受体的泛素化降解。在本研究中我们首次发现了PAK6可以通过结合并磷酸化Mdm2,影响雄激素受体的泛素化降解。我们进一步发现PAK6在雄激素刺激的情况下可通过直接磷酸化雄激素受体,延迟其转位进核,促进其在胞质溶胶中的泛素化降解,从而下调雄激素受体的转录活性,抑制细胞的生长及迁移。本研究首次报道了PAK6通过磷酸化依赖的泛素化降解雄激素受体,阐明了PAK6作为抑制因子负向调节前列腺癌细胞雄激素受体信号通路的功能及其机制,因此在体外设计并采用PAK6激酶活性的激动剂可为前列腺癌的治疗提供新的靶点和思路。

关键词： PAK6 雄激素受体磷酸化泛素化迁移

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丝裂霉素C与C_2-神经酰胺联合应用治疗膀胱癌

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中华实验外科杂志 2006年第10期23卷 1162-1164,i0001页

作者：时京孔垂泽孙志熙王侠罗阳刘奔张莹刘博中国医科大学附属第一医院泌尿外科沈阳110001 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室医学基因组学教研室中国医科大学实验技术中心

目的观察丝裂霉素C(MMC)与C2-神经酰胺(C_2-cer)联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果,并探讨其机制。方法不同浓度MMC与C_2-cer单独及联合作用于人膀胱癌BIU-87细胞后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞... 详细信息

目的观察丝裂霉素C(MMC)与C2-神经酰胺(C_2-cer)联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果,并探讨其机制。方法不同浓度MMC与C_2-cer单独及联合作用于人膀胱癌BIU-87细胞后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测BIU-87细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色观察凋亡形态学变化,Western blot检测细胞色素C在细胞内分布变化,并检测Caspase-3活性改变。结果单独应用时MMC与C_2-cer的中效浓度分别是159和28μmol/L,联合用药时下降为55和11μmol/L,CI=0．74。MMC与G_2-cer单独及联合应用均可导致BIU-87细胞出现凋亡的形态学变化。两种药物联合应用时的凋亡率高于各自单用(P＜0．05)。线粒体细胞色素C含量在MMC与C_2-cer单独及联合应用时均较对照组减少,联合用药时减少最为明显,细胞质内细胞色素C含量在联合用药时增加也最为明显(P＜0．05)。Caspase-3活性在MMC与C_2-cer单独及联合应用时均较对照组升高,联合用药时升高最为明显(P＜0．05)。结论MMC与C_2-cer联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制膀胱癌细胞生长。线粒体细胞色素C释放和Caspase-3活性变化可能发挥重要作用。

关键词：膀胱肿瘤丝裂霉素C 神经酰胺脱噬作用

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CUEDC2介导肿瘤发生相关机制的研究进展

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生命科学 2015年第9期27卷 1168-1173页

作者：于灏婷李彦姝中国医科大学临床医学系沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

CUEDC2是一种普遍存在于许多肿瘤中的蛋白质,与肿瘤的发生以及预后治疗存在着紧密关系,近年来越来越受到广泛的关注和重视。现从CUEDC2在乳腺癌中的作用,对有丝分裂细胞周期、炎症反应的信号通路和巨噬细胞的调节,以及CUEDC2与一些新兴... 详细信息

CUEDC2是一种普遍存在于许多肿瘤中的蛋白质,与肿瘤的发生以及预后治疗存在着紧密关系,近年来越来越受到广泛的关注和重视。现从CUEDC2在乳腺癌中的作用,对有丝分裂细胞周期、炎症反应的信号通路和巨噬细胞的调节,以及CUEDC2与一些新兴领域如褪黑素以及热休克蛋白的关系入手,对CUEDC2介导肿瘤发生相关机制的研究进展进行综述。

关键词： CUEDC2 肿瘤乳腺癌 APC/C NF-κB信号通路 JAK1/STAT3信号通路

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应用二维电泳和质谱技术鉴定乳腺癌相关蛋白

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中国现代医学杂志 2011年第1期21卷 23-27页

作者：蔡鑫泽乔莹陈洋于爽李丰姜奕中国医科大学附属一院中心实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室(卫生部细胞生物学重点实验室) 辽宁沈阳110001

目的通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7... 详细信息

目的通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7中明显差异表达的蛋白点,进行质谱和生物信息学分析。结果建立了MCF7和MCF10A两种细胞系的二维凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为(960±44)和(1 128±29);对选择的35个差异表达蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中16个点,包括过氧化氢酶-6(PRDX6)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)、60 kD热休克蛋白(CH60)、谷氨酰胺转移酶-2(TGM2)等。结论乳腺癌细胞MCF7相对于乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白可能作为乳腺癌早期诊断和预后评价的候选肿瘤标志物。

关键词：蛋白质组学乳腺癌肿瘤标志物二维凝胶电泳

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