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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王贵玲庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊...

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊膜上皮细胞融合度达90％时,换新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,培养24h 后收集培养液,离心后取上清分装冻存,与新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基1：1 混合后作为条件培养基(conditioned medium,CM),即50％CM.应用孔径为8.0um 的24 孔板transwell 检测细胞迁移,实验组下室放600ml50％HAEC-CM,对照组下室放600ml 新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,上室接种100ul 无血清DMEM/F12 的人成骨细胞hOB1.19 悬液,接种细胞数为1x105,培养2h 后HE 染色,显微镜下拍照计数.

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lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张涛庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、...

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、甚至作为小RNA 的前体等众多生命活动中发挥重要作用.虽然关于lncRNA 的研究进展迅猛,但是绝大部分的lncRNA 的功能仍是不清楚的.目前为止对长链非编码RNA 在表皮分化方面的研究还比较有限.我们通过基因芯片检测了分化前后角质形成细胞中lncRNA 的表达情况,发现6750 个差异表达 lncRNA,其中3217 个 lncRNA 差异表达上调,这些lncRNA 的分类如下：natural antisense lncRNA 占15％,intronic antisense lncRNA 占17％,intron sense-overlapping lncRNA 占3％,intergenic lncRNA 占46％,exon sense-overlapping lncRNA 占11％,bidirectional lncRNA 占8％;3533 个 lncRNA 差异表达下调,这些lncRNA的分类如下：natural antisense lncRNA 占17％,intronic antisense lncRNA 占14％,intron sense-overlapping lncRNA 占5％,intergenic lncRNA 占44％,exon sense-overlapping lncRNA 占13％,bidirectional lncRNA 占7％.我们通过生物信息学初步筛选与分化有关的基因及可能与其互做的lncRNA.对这些lncRNA 进行功能学分析发现,它们参与对角质形成细胞分化的调控.下一步的工作我们将对这些分化相关lncRNA进行细致全面的研究,探索分化的分子机制,这些全新的发现将极大地丰富表皮细胞分化调控的机制,带来对表皮创伤修复的新的治疗策略.

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microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：郎宏鑫庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p...

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p 显著差异表达,并通过qRT-PCR 的方法对胚胎早中期和晚期的皮肤样本进行验证.并且通过双荧光素酶报告基因的方法验证microRNA-149-5p 的靶基因.将外源性microRNA-149-5p 的mimics 转染人永生化表皮细胞系(HaCaT),观察其对HaCaT的生物学作用.以及通过与人真皮成纤维细胞共培养检测其对成纤维细胞增殖、迁移以及无瘢痕修复相关基因的表达的情况.结果：人胚胎早中期的皮肤样本中microRNA-149-5p 的表达为晚期的1.8 倍(p＜0.05),并且qRT-PCR 验证此结果.将microRNA-149-5p 与含有IL-1β 3'UTR 的重组质粒报告载体共转染HaCaT,结果显示microRNA-149-5p 可以下调IL-1β 的表达.并且,过表达microRNA-149-5p 可以促进HaCaT 迁移,将转染microRNA-149-5p mimics 的HaCaT 通过与人真皮成纤维细胞共培养后,划痕实验证实且转染mimics 组可以促进成纤维细胞迁移;同时,qRT-PCR 检测到共培养后成纤维细胞中促进皮肤无瘢痕修复的TGFβ-3 和Collagen3表达量升高约1.5 倍(p＜0.05),α-SMA 表达量下降.结论：microRNA-149-5p 可以通过调控其靶基因IL-1β 的表达,而调控成纤维细胞无瘢痕修复相关因子的表达,从而参与皮肤创伤修复的过程.

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PAK4激酶介导的SCG10磷酸化参与胃癌细胞转移

PAK4激酶介导的SCG10磷酸化参与胃癌细胞转移

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中国细胞生物学学会2013年全国学术大会

作者：郭启强苏楠张健李想苗智峰王桂玲程卯生徐惠绵曹流李丰中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤外科沈阳110001 沈阳药科大学教育部基于靶点的药物设计与研究重点实验室沈阳110016 中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室转化医学研究所沈阳110001

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新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作用研究

新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：李莹张殿宝庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可...

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可明显缩短创面愈合时间.MMP14 是一种细胞内激活的膜锚定蛋白，主要成分PEX 与CD44 相互作用形成异二聚体，并引起胞内细胞骨架重排，促进细胞的迁移.MMP14 还可以激活pro-MMP2 增加细胞外基质的降解，引导细胞迁移.

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微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创伤无瘢痕愈合

微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：赵峰庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR...

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR 检测人孕中期(孕28 周前)及孕晚期(孕28 周后)胎儿皮肤KCs 中microRNAs 的表达差异。通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因检测分析及Western blot 探讨seq-915_x4024 的靶基因。通过体外增殖及迁移试验检测过表达seq-915_x4024 后人表皮细胞系HaCaT 及与之共培养的人真皮成纤维细胞(fibroblasts,FBs)增殖及迁移能力的变化。通过实时定量PCR 及Western blot 检测过表达seq-915_x4024 的HaCaT 细胞及与之共培养FBs 分泌细胞外基质能力的变化。

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PAK5介导的E47磷酸化促进上皮间质转化和结肠癌转移

PAK5介导的E47磷酸化促进上皮间质转化和结肠癌转移

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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：朱戈李晓东郭冰玉柯强董明李丰中国医科大学细胞生物学系卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳市沈北新区蒲河路77号110122

PAK5在进展期肿瘤中高表达,转录因子E47能够直接抑制E钙黏素表达并引起上皮间质转化,但是PAK5与E47直接的关系尚不清楚.本研究发现,在进展期结肠癌中,PAK5介导的E47磷酸化促进结肠癌细胞上皮间质转化.PAK5能够与E47相互作用.在肝细胞生...

PAK5在进展期肿瘤中高表达,转录因子E47能够直接抑制E钙黏素表达并引起上皮间质转化,但是PAK5与E47直接的关系尚不清楚.本研究发现,在进展期结肠癌中,PAK5介导的E47磷酸化促进结肠癌细胞上皮间质转化.PAK5能够与E47相互作用.在肝细胞生长因子刺激下,PAK5磷酸化E47的第39位丝氨酸,削弱细胞间的黏着,增强细胞的迁移和侵袭,并在小鼠转移模型中能够促进结肠癌转移.而且,E47的磷酸化促进E47以依赖于入核因子α的方式在细胞核内聚集,增加E47与E钙黏素启动子的直接结合,导致E钙黏素的转录抑制.反之,敲除PAK5阻滞了肝细胞生长因子引发的E47磷酸化,削弱E47与入核因子α的结合,减少了E47与E钙黏素启动子的直接结合.此外,本研究证实了PAK5和E47在结肠癌中密切相关.更重要的是,磷酸化的E47高表达与侵袭表型的结肠癌相关,并且在发生转移的结肠癌中发现了细胞核分布的磷酸化E47.综上结果提示,47是新发现的PAK5底物,PAK5介导的E47磷酸化促进了结肠癌的上皮间质转化和转移,E47第39位丝氨酸可能是进展期结肠癌潜在的治疗靶点.

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微流控芯片在肿瘤微环境研究中的应用

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解剖科学进展 2019年第4期25卷 491-494,496页

作者：王笛于敏陈炳南刘昊玥王洁方瑾中国医科大学附属盛京医院沈阳110004 中国医科大学生命科学学院分子细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110122 中国医科大学中英联合学院沈阳110122

肿瘤微环境是由肿瘤细胞、间质细胞、细胞外基质及多种因子构成的局部微环境,在肿瘤生存、生长、侵袭、转移等过程中发挥重要作用,目前已成为肿瘤治疗的新靶点。微流控芯片具有微型化、设计灵活、易于集成、便于实时观察及高通量、低成... 详细信息

肿瘤微环境是由肿瘤细胞、间质细胞、细胞外基质及多种因子构成的局部微环境,在肿瘤生存、生长、侵袭、转移等过程中发挥重要作用,目前已成为肿瘤治疗的新靶点。微流控芯片具有微型化、设计灵活、易于集成、便于实时观察及高通量、低成本等优势,因而更易于建立接近体内真实肿瘤微环境的体外模型,包括模拟肿瘤血管生成、肿瘤侵袭和转移,建立药物筛选及分析模型和肿瘤芯片,为深入研究肿瘤微环境的相关分子机制及开发新药提供有效途径。

关键词：肿瘤微环境成纤维细胞高通量空间排布肿瘤细胞微流控芯片

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人羊膜间充质干细胞的超微结构观察

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1371-1376页

作者：庞希宁王竟施萍孟涛霍双枝张殿宝谭丽萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院产科辽宁沈阳110001

目的观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。... 详细信息

目的观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。结果人AMSC呈梭形和多角形;高表达表面标志CD44,CD90,CD105和波形蛋白,不表达CD34和CD45。扫描电镜下可见细胞表面有大量小泡和微绒毛突起;透射电镜下见到胞核较大,呈圆形或椭圆形;胞质内线粒体、粗面内质网和高尔基体等细胞器数量丰富,有较多小泡。结论从羊膜中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性的超微结构。丰富的粗面内质网和高尔基体,提示,AMSC具有产生大量分泌蛋白的功能,可能是羊膜间充质干细胞旁分泌作用的基础。

关键词：间充质干细胞羊膜超微结构

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X连锁先天性视网膜劈裂症家系的RS1基因变异分析

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中华医学遗传学杂志 2022年第4期39卷 378-382页

作者：罗萍刘艳秋邢雪莎刘琦罗阳中国医科大学生命科学学院医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122 鞍山市中心医院立山院区眼科鞍山114000

目的探讨一个X连锁先天性视网膜劈裂症家系的遗传学病因。方法收集X连锁先天性视网膜劈裂症家系临床资料,采用聚合酶链式反应和Sanger测序法筛查先证者RS1基因外显子及其侧翼序列的变异位点,采用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应分... 详细信息

目的探讨一个X连锁先天性视网膜劈裂症家系的遗传学病因。方法收集X连锁先天性视网膜劈裂症家系临床资料,采用聚合酶链式反应和Sanger测序法筛查先证者RS1基因外显子及其侧翼序列的变异位点,采用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应分析家系成员和100名无关正常人的相应位点,应用生物信息学方法预测该变异位点致病性。结果该家系中的患者均有RS1基因c.458T>G(***153Gly)变异,家系内正常人及无关正常对照者不含该变异,携带者存在杂合变异,生物信息学分析表明该变异具有致病性。结论RS1基因c.458T>G(***153Gly)变异可导致X连锁先天性视网膜劈裂症。

关键词： X连锁先天性视网膜劈裂症基因变异 RS1基因限制性片段长度多态性聚合酶链式反应

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