检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2012年第3期28卷 237-239页

作者：沈涛李妍杨礼庆梁爽巴根付勤中国医科大学附属盛京医院骨科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 明尼苏达大学实验病理系美国艾波利斯55455

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉... 详细信息

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。

关键词： ArgBP2 Western blot 免疫沉淀

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

过表达ESCRT系统成员提升细胞应对U18666A诱发胆固醇积聚的能力

引用

中国细胞生物学学报 2019年第5期41卷 883-891页

作者：贾志娟谭伟王亚茹蔡莹陈澄中国医科大学生命科学学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室

U18666A是一种细胞通透性的两亲性氨基类固醇,能够抑制胆固醇的转运与多泡体的生成,导致细胞内胆固醇的积聚,造成细胞凋亡。该研究发现, U18666A处理MLE12细胞后转运必需的内体分选复合体(endosomal sorting complexes required for tra... 详细信息

U18666A是一种细胞通透性的两亲性氨基类固醇,能够抑制胆固醇的转运与多泡体的生成,导致细胞内胆固醇的积聚,造成细胞凋亡。该研究发现, U18666A处理MLE12细胞后转运必需的内体分选复合体(endosomal sorting complexes required for transport, ESCRT)系统相关蛋白表达降低。该实验构建了过表达ESCRT-III系统成员Vps24以及Chmp1b的转基因细胞系,发现与转空载体的细胞相比,转基因细胞对抗U18666A引发的胆固醇积聚以及后续生理效应的能力有所增强。以上结果提示U18666A可以干扰ESCRT系统的一部分功能诱发细胞内胆固醇积聚,为人类与胆固醇积聚相关疾病的防治提供了新的思路。

关键词： U18666A ESCRT系统胆固醇积聚

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

脂质运载蛋白2在乳腺癌侵袭转移中的作用机制

引用

中国医科大学学报 2022年第2期51卷 111-114,120页

作者：叶芸李彦姝张红艳李丰中国医科大学生命科学学院分子细胞生物学教研室国家卫生健康委员会细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122

目的探讨脂质运载蛋白2(LCN2)在乳腺癌细胞和组织中的表达、定位,及对乳腺癌细胞侵袭转移的影响。方法采用Western blotting检测LCN2在乳腺癌细胞系中的蛋白质表达情况,免疫组织化学检测人乳腺癌组织中LCN2的表达及定位,激光共聚焦扫描... 详细信息

目的探讨脂质运载蛋白2(LCN2)在乳腺癌细胞和组织中的表达、定位,及对乳腺癌细胞侵袭转移的影响。方法采用Western blotting检测LCN2在乳腺癌细胞系中的蛋白质表达情况,免疫组织化学检测人乳腺癌组织中LCN2的表达及定位,激光共聚焦扫描显微镜检测内源LCN2在乳腺癌细胞中的表达及定位。构建过表达LCN2的MCF-7、T47D细胞系,采用Western blotting检测与上皮间质转化(EMT)发生相关的标志物E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(Claudin-1)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Slug)的蛋白表达情况。Transwell检测LCN2对乳腺癌细胞T47D迁移能力的影响。结果LCN2在MCF-7,T47D及ZR-75-30乳腺癌细胞系中低表达,在MDA-MB-231中中等表达,在ZR-75-1细胞系中高表达;免疫组织化学以及激光共聚焦扫描显微镜证实LCN2主要定位于细胞质;成功构建了过表达LCN2的乳腺癌细胞系MCF-7和T47D,Western blotting检测发现在过表达LCN2的T47D细胞系中E-cadherin和Claudin-1蛋白表达明显降低,而Slug以及Vimentin表达明显增高。过表达LCN2的T47D细胞系迁移能力增强。结论LCN2在不同乳腺癌细胞系中表达水平不同,主要定位于乳腺癌细胞质,LCN2能促进乳腺癌细胞的迁移,可能通过诱发EMT促进乳腺癌细胞的侵袭转移。

关键词：脂质运载蛋白2 乳腺癌表达定位上皮间质转化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表皮生长因子影响人羊膜间充质干细胞迁移的机制

引用

中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 606-610页

作者：李彩虹施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAM... 详细信息

目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAMSCs的迁移能力,W estern blot检测各组磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化AKT(P-AKT)和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)及金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达情况,RNA-Seq技术对EGF组和对照组细胞中差异表达基因进行分析。结果 EGF组细胞的迁移能力明显高于对照组(P=0.0361),抑制剂AG1478+EGF组(P=0.0113)、抑制剂LY294002+EGF组(P=0.0169)和抑制剂U0126+EGF组(P=0.0293)明显低于EGF组。EGF可增加hAMSCs的P-EGFR、P-AKT和P-ERK1/2及MMP-2的表达,但P-AKT和P-ERK表达的增加可被AG1478和LY294002抑制。对EGF组和对照组细胞中差异表达基因的GO功能富集分析和KEGG代谢途径分析结果表明,EGF组细胞中发生转录上调的基因主要参与转录调节、蛋白质修饰、凋亡抑制等生命过程,其中与MAPK信号通路有关的基因为DUSP5、IL1B、DUSP6、NGF和HSPA2。结论 EGF引起的hAMSCs迁移可能是通过PI3K/AKT、ERK信号通路介导的,需要MMP-2的表达,及其参与转录调节、蛋白质修饰和凋亡抑制等基因的协同表达。

关键词：人羊膜间充质干细胞表皮生长因子磷脂酰肌醇激酶-3 细胞外调节蛋白激酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质

引用

中国医科大学学报 2009年第1期38卷 8-10,14页

作者：李彦姝李晓东吴怡李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 沈阳医学院病原生物学教研室沈阳110034 中国医科大学临床医学系沈阳110001

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化... 详细信息

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。

关键词： Pak4 酵母双杂交信号转导

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

引用

中国医科大学学报 2010年第12期39卷 995-997页

作者：李洋刘彤李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学沈阳110001

目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并... 详细信息

目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。

关键词：环指蛋白6 基因克隆融合蛋白转染胃癌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

引用

中国医科大学学报 2010年第2期39卷 84-86,94页

作者：张红艳李彦姝王春玉苏楠李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转... 详细信息

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。

关键词： PAK4基因蛋白质印迹融合蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

引用

现代肿瘤医学 2021年第18期29卷 3160-3166页

作者：袁莹李晓东中国医科大学生命科学学院分子细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面的作用。方法:CCK8检测CWS-6对胰腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测CWS-6对胰腺癌细胞周期分布的影响;细胞划痕实验检测CWS-6对胰腺癌细胞迁移的影响;Transw... 详细信息

目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面的作用。方法:CCK8检测CWS-6对胰腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测CWS-6对胰腺癌细胞周期分布的影响;细胞划痕实验检测CWS-6对胰腺癌细胞迁移的影响;Transwell实验检测CWS-6对胰腺癌细胞侵袭的影响;激光扫描共聚焦显微(Confocal)实验检测CWS-6对胰腺癌细胞微丝的影响;Western blotting实验检测CWS-6对胰腺癌细胞PAK4激酶的活化及其下游与迁移侵袭相关蛋白表达的影响。结果:CWS-6对胰腺癌细胞的增殖以及周期影响不明显;在5μmol/L时对胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力有显著的抑制作用;CWS-6对PAK4激酶的活性以及PAK4下游的细胞骨架相关靶蛋白的表达有抑制作用。结论:CWS-6是通过抑制PAK4激酶的活性来抑制细胞增殖以及通过影响PAK4下游细胞骨架相关蛋白抑制微丝的解聚从而抑制胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力。

关键词： PAK4小分子抑制剂胰腺癌增殖迁移侵袭

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PAK4与RCBTB1相互作用促进胰腺癌细胞增殖

引用

中国医科大学学报 2022年第2期51卷 115-120页

作者：于昕博黄昌伟路天琦袁莹李晓东中国医科大学临床一系沈阳110122 中国医科大学生命科学学院分子细胞生物学教研室国家卫生健康委员会细胞生物学重点实验室暨教育部细胞生物学重点实验室沈阳110122

目的研究p21激活激酶4(PAK4)与RCC1和BTB结构域包含蛋白1(RCBTB1)的相互作用及其在胰腺癌细胞增殖过程中的作用。方法采用免疫共沉淀实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的相互作用;采用免疫荧光实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的... 详细信息

目的研究p21激活激酶4(PAK4)与RCC1和BTB结构域包含蛋白1(RCBTB1)的相互作用及其在胰腺癌细胞增殖过程中的作用。方法采用免疫共沉淀实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的相互作用;采用免疫荧光实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的定位和共定位位置;采用CCK-8实验探究过表达PAK4、RCBTB1对胰腺癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测过表达PAK4、RCBTB1对胰腺癌细胞周期的影响;采用Western blotting检测过表达PAK4、RCBTB1对cyclin D1蛋白表达水平的影响。结果PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内存在相互作用。PAK4与RCBTB1共定位于胰腺癌细胞核和核周细胞质内。过表达PAK4、RCBTB1促进胰腺癌细胞增殖,加速胰腺癌细胞的细胞周期进程,促进cyclin D1的表达。结论PAK4与RCBTB1相互作用促进胰腺癌细胞增殖。

关键词： p21激活激酶4 RCC1和BTB结构域包含蛋白1 相互作用胰腺癌增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用荧光蛋白示踪脑微血管内皮细胞微丝的动态变化

引用

中国医科大学学报 2020年第8期49卷 673-678页

作者：杜书嵩赵伟东中国医科大学生命科学学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫健委细胞生物学重点实验室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院肛肠外科沈阳110001

目的利用活细胞显微成像术对脑微血管内皮细胞内肌动蛋白的动态变化实现实时观察。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记Lifeact的真核表达载体即Lifeact-pEGFP,利用脂质体转染法将Lifeact-pEGFP质粒转染至脑微血管内皮细胞中,利用共聚焦激光... 详细信息

目的利用活细胞显微成像术对脑微血管内皮细胞内肌动蛋白的动态变化实现实时观察。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记Lifeact的真核表达载体即Lifeact-pEGFP,利用脂质体转染法将Lifeact-pEGFP质粒转染至脑微血管内皮细胞中,利用共聚焦激光扫描显微镜对Lifeact-pEGFP在细胞内的分布进行分析,并检测其在细胞伸展和迁移过程中的动态变化。结果成功将Lifeact-p EGFP质粒转染至人脑微血管内皮细胞,细胞存活未受到影响。Lifeact-pEGFP能将活细胞中的肌动蛋白丝标记为绿色荧光,并能够有效监测细胞伸展和迁移过程中肌动蛋白丝的动态变化。结论 Lifeact-p EGFP转染结合活细胞显微成像术可以用于实时记录和分析脑微血管内皮细胞内肌动蛋白丝的动态变化。

关键词： Lifeact 肌动蛋白脑微血管内皮细胞活细胞显微成像术

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：