检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞生物学杂志 2004年第4期26卷 433-438页

作者：刘戈飞黄东阳杜晶崔泽实宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001 汕头大学医学院汕头515031 中国医科大学实验技术中心沈阳110001

应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR... 详细信息

应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR具有视黄醛还原酶活性,在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的Km值和Vmax值分别(2.8±0.24)μM和(0.468±0.036)μmol／(min·mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa细胞后,应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR定位到过氧化物酶体是必需的,删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此,人肝脏NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。

关键词：辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶全反式视黄酸人肝脏表达细胞活性

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胃癌细胞中p21活化激酶4的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第8期38卷 565-568页

作者：邵阳光李妍王春玉佟宇鑫李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学生物科学与生物技术系沈阳110001

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1... 详细信息

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。将pCAN2-MYC-PAK4质粒瞬时转染到胃癌BGC-823细胞中,用Western blot方法检测MYC-PAK4融合蛋白的表达;并用Western blot方法检测不同胃癌细胞系中内源性PAK4的表达;瞬时转染pEGFP-PAK4到胃癌BGC-823细胞中,用激光扫描共聚焦显微镜观察PAK4的定位。结果(1)hPAK4编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;(2)证实了MYC-PAK4融合蛋白及内源性PAK4在胃癌细胞中的表达;(3)转染pEGFP-PAK4后,在胃癌BGC-823细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-PAK4载体,证实了外源性和内源性PAK4的表达,证明在胃癌BGC-823细胞中PAK4主要定位于细胞质,为进一步研究PAK4的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。

关键词： p21活化激酶4 绿色荧光蛋白融合蛋白转染胃癌

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单克隆抗体ND-1-量子点荧光探针对大肠癌细胞的特异成像研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2013年第3期22卷 249-253页

作者：王蒴方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的制备抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的量子点荧光探针,实现对大肠癌细胞的靶向成像。方法采用共价偶联方法,以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)为缩合剂,通过在反应体系中加入不同摩尔比例的... 详细信息

目的制备抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的量子点荧光探针,实现对大肠癌细胞的靶向成像。方法采用共价偶联方法,以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)为缩合剂,通过在反应体系中加入不同摩尔比例的单克隆抗体ND-1和游离量子点QD605进行条件优化,制备偶联产物ND-1-QD605荧光探针;利用荧光光谱扫描技术对ND-1-QD605进行光学特性表征,并检测其抗光漂白能力;利用免疫荧光方法检测ND-1-QD605对大肠癌细胞的靶向结合能力。结果在量子点QD605与单克隆抗体ND-1摩尔比1:40条件下,可实现二者的高效偶联;荧光光谱分析显示ND-1-QD605保留了游离量子点QD605优良的荧光特性;在激发光照射1h内,ND-1-QD605荧光强度未发生明显改变;荧光显微镜观察可见该探针能够与表达有相应抗原LEA的人大肠癌CCL187细胞特异性结合,呈现高灵敏度、特异性荧光成像。结论制备的单克隆抗体ND-1的量子点荧光探针具有大肠癌细胞靶向成像能力,有望为大肠癌的体内靶向成像研究和临床诊断提供新方法。

关键词：量子点单克隆抗体ND-1 大肠癌 LEA

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一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法

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临床与实验病理学杂志 2010年第5期26卷 590-593页

作者：张惠丹任辉王晓楠方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室、医学细胞生物学教育部重点实验室、细胞生物学教研室沈阳110001 沈阳市肛肠医院大肠外科沈阳110002

目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片... 详细信息

目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片段分布,紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度。以提取的DNA为模板,PCR扩增不同长度产物片段并进行产物的直接测序以评价提取方法。结果该提取方法能够获得较长片段的基因组DNA,从一片10μm厚石蜡切片中即可获得大约60μg的DNA,在0.5h消化条件下获取的模板DNA,即可实现对152bp、293bp、392bp和541bp等4种不同片段的100%扩增,1h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序。结论建立了一种简单、快速地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA。

关键词：甲醛固定石蜡包埋组织 DNA提取聚合酶链式反应(PCR)

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内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中的表达

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细胞生物学杂志 2005年第2期27卷 191-195页

作者：王大鹏李波方文刚陈誉华宋今丹中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

为观察内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子的表达情况,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的人脑微血管内皮细胞,建立内质网应激模型,采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学的方法检测了细胞内血管内皮细胞生长因子的表达。结果... 详细信息

为观察内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子的表达情况,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的人脑微血管内皮细胞,建立内质网应激模型,采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学的方法检测了细胞内血管内皮细胞生长因子的表达。结果发现血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中存在一定的表达;内质网应激可诱导血管内皮细胞生长因子表达升高,随着衣霉素浓度的增高,血管内皮细胞生长因子的表达逐渐增加,与mRNA水平相比,血管内皮细胞生长因子蛋白量的增加更明显。实验结果提示人脑微血管内皮细胞中存在血管内皮细胞生长因子自分泌,血管内皮细胞生长因子可能是内质网应激的靶基因。

关键词：内质网应激血管内皮细胞生长因子人脑微血管内皮细胞血脑屏障基因表达自分泌系统

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内质网分子伴侣Grp94的表达与细胞周期的关系

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中华物理医学与康复杂志 1999年第2期21卷 109-110页

作者：赵迎辉宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

目的进一步分析正常组织来源的细胞系ＣＶ１和人大肠癌细胞系ＣＣＬ２２９的Ｇｒｐ９４的表达及其与细胞周期的关系。方法对细胞中ＤＮＡ和内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４进行同时染色，进行双参数流式细胞术分析。结果两种细胞的Ｇｒｐ... 详细信息

目的进一步分析正常组织来源的细胞系ＣＶ１和人大肠癌细胞系ＣＣＬ２２９的Ｇｒｐ９４的表达及其与细胞周期的关系。方法对细胞中ＤＮＡ和内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４进行同时染色，进行双参数流式细胞术分析。结果两种细胞的Ｇｒｐ９４的表达情况相似，在细胞周期各时相中内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４均有表达，Ｇ０＋Ｇ１期表达量较少，Ｓ期的表达量无明显增加，Ｇ２＋Ｍ期的表达量最高。结论Ｇｒｐ９４在细胞周期各时相的表达呈渐增的趋势，但在Ｓ期增加不明显，表明Ｇｒｐ９４的表达与细胞周期各时相的变化存在着密切的关系。

关键词：内质网细胞周期蛋白类表达 CCL-229

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癌基因转染后细胞内质网膜系统的超微结构变化

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中华物理医学杂志 1996年第1期18卷 1-3,I001页

作者：李旦宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

实验应用常规电镜固定方法和新建立的高锰酸钾技术，在透射电镜（ＴＥＭ）和扫描电镜（ＳＥＭ）下观察和研究了癌基因转染后的细胞内质网膜系统（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍ，ＥＲ）的超微结构改变。结果表明，经Ｈａ－... 详细信息

实验应用常规电镜固定方法和新建立的高锰酸钾技术，在透射电镜（ＴＥＭ）和扫描电镜（ＳＥＭ）下观察和研究了癌基因转染后的细胞内质网膜系统（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍ，ＥＲ）的超微结构改变。结果表明，经Ｈａ－ｒａｓ癌基因转染的ＧＣＭ３Ｔ３转化细胞中ＥＲ发育较差，数量减少，排列紊乱，整个ＥＲ向核区聚集，细胞边缘可见链索状ＥＲ结构，表现了ＥＲ在癌变细胞的生物学特性。

关键词：癌基因内质网高锰酸钾技术细胞学

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应用共聚焦显微镜观察卵母细胞成熟过程中Cdc42活性变化

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电子显微学报 2007年第3期26卷 225-228页

作者：程大也梁彬李丰中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

Cdc42属于GTP酶家族成员,参与细胞骨架调节和细胞发育,但在细胞分裂过程中的作用所知甚少。以爪蟾卵母细胞为模型,GFP-wGBD(Cdc42活性探针)和罗丹明-微管蛋白作为荧光标记物,采用共聚焦显微镜观察卵母细胞分裂过程中Cdc42活性变化。结... 详细信息

Cdc42属于GTP酶家族成员,参与细胞骨架调节和细胞发育,但在细胞分裂过程中的作用所知甚少。以爪蟾卵母细胞为模型,GFP-wGBD(Cdc42活性探针)和罗丹明-微管蛋白作为荧光标记物,采用共聚焦显微镜观察卵母细胞分裂过程中Cdc42活性变化。结果显示卵母细胞中,极体释放数分钟前,纺锤体上方和周边可见微弱的Cdc42活性,2 min^4 min内,活性逐渐增强,随后收缩环形成,胞质分裂发生。胞质分裂完成后,Cdc42活性消失。结果提示Cdc42活性可能与爪蟾卵母细胞胞质分裂有关。

关键词： Cdc42 胞质分裂卵母细胞共聚焦显微镜

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卵巢癌患者血液中RASSF1A基因甲基化的检测及其意义

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中华病理学杂志 2005年第12期34卷 785-787页

作者：马琳刘芙蓉张淑兰中国医科大学附属第二临床学院妇产科沈阳110013 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室

目的探讨循环肿瘤DNA中RASSF1A基因的甲基化及其与卵巢癌的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,对51名正常健康人、51例卵巢癌患者和51例卵巢良性肿瘤患者循环DNA RASSF1A基因的甲基化进行了检测。结果51名正常健康人和51例卵巢良... 详细信息

目的探讨循环肿瘤DNA中RASSF1A基因的甲基化及其与卵巢癌的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,对51名正常健康人、51例卵巢癌患者和51例卵巢良性肿瘤患者循环DNA RASSF1A基因的甲基化进行了检测。结果51名正常健康人和51例卵巢良性肿瘤患者循环DNA RASSF1A基因甲基化的发生率均为0;51例卵巢癌患者循环肿瘤DNA RASSF1A甲基化的发生率为43·1%(22/51,P<0·05)。RASSF1A甲基化与卵巢癌组织学类型无明显相关性(P>0·05)。临床Ⅰ期和Ⅱ期循环肿瘤DNA RASSF1A基因甲基化的发生率明显低于临床Ⅲ期和Ⅳ期(P<0·05);高和中分化组RASSF1A基因甲基化的发生率低于低分化组(P<0·05)。结论RASSF1A基因甲基化在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用。卵巢癌患者的循环肿瘤DNA中可以检测到RASSF1A基因的甲基化,与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关。循环肿瘤DNA中RASSF1A甲基化的检测有助于卵巢癌的诊断和预后判定。

关键词：卵巢肿瘤 DNA甲基化基因抑制肿瘤

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表皮生长因子影响人羊膜间充质干细胞迁移的机制

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 606-610页

作者：李彩虹施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAM... 详细信息

目的研究表皮生长因子(EGF)影响体外培养的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移的机制。方法将体外培养的hAMSCs分为对照组(未处理)、EGF组、抑制剂AG1478+EGF组、抑制剂LY294002+EGF组和抑制剂U0126+EGF组5组,采用Transwell小室测定各组hAMSCs的迁移能力,W estern blot检测各组磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化AKT(P-AKT)和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)及金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达情况,RNA-Seq技术对EGF组和对照组细胞中差异表达基因进行分析。结果 EGF组细胞的迁移能力明显高于对照组(P=0.0361),抑制剂AG1478+EGF组(P=0.0113)、抑制剂LY294002+EGF组(P=0.0169)和抑制剂U0126+EGF组(P=0.0293)明显低于EGF组。EGF可增加hAMSCs的P-EGFR、P-AKT和P-ERK1/2及MMP-2的表达,但P-AKT和P-ERK表达的增加可被AG1478和LY294002抑制。对EGF组和对照组细胞中差异表达基因的GO功能富集分析和KEGG代谢途径分析结果表明,EGF组细胞中发生转录上调的基因主要参与转录调节、蛋白质修饰、凋亡抑制等生命过程,其中与MAPK信号通路有关的基因为DUSP5、IL1B、DUSP6、NGF和HSPA2。结论 EGF引起的hAMSCs迁移可能是通过PI3K/AKT、ERK信号通路介导的,需要MMP-2的表达,及其参与转录调节、蛋白质修饰和凋亡抑制等基因的协同表达。

关键词：人羊膜间充质干细胞表皮生长因子磷脂酰肌醇激酶-3 细胞外调节蛋白激酶

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