检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2006年第7期33卷 641-646页

作者：李波王大鹏方文刚陈誉华中国医科大学发育生物学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和... 详细信息

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

关键词：葡萄糖调节蛋白 GRP78 GRP94 脑发育内质网分子伴侣

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毒力岛基因ibeT有助于大肠杆菌抵抗人脑微血管内皮细胞溶酶体的降解

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生物化学与生物物理进展 2009年第4期36卷 417-423页

作者：张可赵伟东李强方文刚朱莉陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

大肠杆菌是导致新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌.为探讨毒力岛基因ibeT在大肠杆菌K1株致病过程中的作用,构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株,细菌在细胞内存活试验结果显示,ibeT基因缺失抑制了大肠杆菌K1株在人脑微血管内皮... 详细信息

大肠杆菌是导致新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌.为探讨毒力岛基因ibeT在大肠杆菌K1株致病过程中的作用,构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株,细菌在细胞内存活试验结果显示,ibeT基因缺失抑制了大肠杆菌K1株在人脑微血管内皮细胞中的生长.利用激光共聚焦扫描显微镜观察到,在细菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞后,与野生型相比,ibeT基因缺失突变株较多地滞留在溶酶体内;透射电镜结果进一步显示,ibeT基因缺失使大肠杆菌K1株逃逸ECV(含有大肠杆菌的囊泡)的能力发生了下降,继而使其在细胞浆内的复制减少.利用体外模拟的弱酸性环境,检测大肠杆菌菌体胞内的缓冲容量,发现ibeT基因缺失突变株菌体胞内的缓冲能力较野生型低.这些结果提示,在大肠杆菌K1株侵袭进入人脑微血管内皮细胞后,ibeT基因有利于大肠杆菌降解ECV膜,避免与溶酶体融合,进而促使大肠杆菌逃逸进入细胞浆并进行复制.

关键词： ibeT 大肠杆菌K1株人脑微血管内皮细胞溶酶体逃逸

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基于热阻梯度加热系统的温度梯度芯片毛细管电泳用于DNA突变检测

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高等学校化学学报 2010年第4期31卷 667-671页

作者：徐章润李娜张惠丹樊晓峰方瑾东北大学分析科学研究中心沈阳110004 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001

建立了一种简单、可靠的空间温度梯度芯片毛细管电泳DNA突变分析系统,制作了热阻呈梯度均匀变化的硅橡胶(PDMS)基片,利用其热阻变化对热传导的影响,在基片表面形成稳定的空间温度梯度.通过改变PDMS基片的厚度差,可得到范围不同的温度梯... 详细信息

建立了一种简单、可靠的空间温度梯度芯片毛细管电泳DNA突变分析系统,制作了热阻呈梯度均匀变化的硅橡胶(PDMS)基片,利用其热阻变化对热传导的影响,在基片表面形成稳定的空间温度梯度.通过改变PDMS基片的厚度差,可得到范围不同的温度梯度,且形成的温度梯度在6h内保持稳定.利用该温度梯度加热装置对玻璃微流控芯片进行加热,在10℃温度梯度范围内对209bp的DNA突变标准样品进行分离检测,单次样品分析时间为8.3min,并成功用于3例大肠癌患者石蜡组织切片中K-ras基因突变的检测.

关键词：微流控芯片毛细管电泳温度梯度基因突变

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大鼠海马内注射β淀粉样蛋白诱导外周血T细胞MIP-1α过表达及其穿过血脑屏障

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生物化学与生物物理进展 2006年第12期33卷 1177-1182页

作者：郭大文马怡然方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

为观察脑内β淀粉样蛋白(amyloidbeta,Aβ)沉积对外周血T细胞穿过血脑屏障的影响,通过立体定位仪将Aβ1～42肽注射到大鼠双侧海马(以Aβ42～1反序列肽为对照),实时定量PCR(RT-qPCR)检测发现,Aβ1～42上调了外周血T细胞中巨嗜细胞炎症蛋... 详细信息

为观察脑内β淀粉样蛋白(amyloidbeta,Aβ)沉积对外周血T细胞穿过血脑屏障的影响,通过立体定位仪将Aβ1～42肽注射到大鼠双侧海马(以Aβ42～1反序列肽为对照),实时定量PCR(RT-qPCR)检测发现,Aβ1～42上调了外周血T细胞中巨嗜细胞炎症蛋白(macrophageinflammatoryprotein-1α,MIP-1α)的表达,同时免疫荧光分析显示,脑内的Aβ1～42也引起了脑微血管内皮上MIP-1α受体(CCR5)的表达增加,以及伴随的脑实质内T细胞数量的增加.然而,大鼠腹腔内注射抗MIP-1α中和抗体则阻断了Aβ1～42所致的脑内T细胞数量的增加.提示脑内Aβ沉积能诱导外周血T细胞MIP-1α依赖性迁移入脑.

关键词：阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 MIP-1α T细胞血脑屏障

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超抗原葡萄球菌肠毒素与抗人大肠癌单链抗体ND-1 scFv融合基因的构建、表达及活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第4期28卷 400-403页

作者：陈航李莉方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的:构建并表达超抗原葡萄(SEA)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,以提高SEA的靶向杀伤作用。方法:构建超抗原SEA和鼠抗人大肠癌单链抗ND-1scFv的融合基因ND-1 scFv/SEA的表达载体,转化到大肠杆菌*** M15中进行诱导表达。Ni-... 详细信息

目的:构建并表达超抗原葡萄(SEA)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,以提高SEA的靶向杀伤作用。方法:构建超抗原SEA和鼠抗人大肠癌单链抗ND-1scFv的融合基因ND-1 scFv/SEA的表达载体,转化到大肠杆菌*** M15中进行诱导表达。Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化。间接免疫荧光法检测融合蛋白的靶向结合活性,MTT法检测靶向杀伤效率。结果:成功构建了融合基因ND-1scFv/SEA,实现功能性表达,纯化的ND-1scFv/SEA融合蛋白与表达有ND-1相应抗原的大肠癌细胞CCL-187有高度亲和活性,通过激活外周血单核细胞,可特异性杀伤靶细胞,在4μg/mL浓度下对CCL-187的杀伤率达到91%,明显优于SEA的杀伤活性。结论:融合蛋白ND-1 scFv/SEA对大肠癌细胞CCL-187具有靶向结合和杀伤活性,为SEA用于靶向性的大肠癌治疗奠定了基础。

关键词： ND-1单克隆抗体单链抗体Fv 葡萄球菌肠毒素A 大肠癌

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脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A的克隆表达及血清学分析

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第4期29卷 414-417页

作者：陈航方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠... 详细信息

目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,GSTrap FF亲和层析纯化出具有生物活性的NspA融合蛋白。采用纯化得到的NspA融合蛋白检测流脑恢复期患者血清中的抗NspA抗体。结果成功表达了功能性NspA蛋白,相对分子质量(Mr)为44 000。并用NspA融合蛋白检测到患者恢复期血清中存在有抗NspA抗体,且滴度为1∶40时,阳性率为90%。结论成功表达了NspA重组蛋白,并检测到自然感染流脑患者恢复期血清中的NspA抗体。

关键词：脑膜炎奈瑟氏菌脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A抗体血清学分析

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RUNX3全长和不同结构域原核表达载体的构建及其重组蛋白表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第6期39卷 1112-1115页

作者：宋艳艳王桂玲中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:构建RUNX3全长和不同结构域的原核表达载体并表达其重组蛋白。方法:以pcDNA3.1-myc-RUNX3为模板,采用PCR法扩增RUNX3全长和各个结构域片段,通过EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点将RUNX3全长和不同结构域定向插入谷胱甘肽转移酶(GST)融合表... 详细信息

目的:构建RUNX3全长和不同结构域的原核表达载体并表达其重组蛋白。方法:以pcDNA3.1-myc-RUNX3为模板,采用PCR法扩增RUNX3全长和各个结构域片段,通过EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点将RUNX3全长和不同结构域定向插入谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌(***)BL21中诱导其融合蛋白表达,SDS-PAGE电泳检测其蛋白表达情况。结果:EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后得到与预期大小相符的FL(1 245bp)、ΔRunt(843bp)、Nter(159bp)、Runt(402bp)和Cter(684bp)5个载体片段。SDS-PAGE电泳检测,RUNX3全长及各个结构域截短GST-RUNX3截短融合蛋白(GST-FL、GST-Runt、GST-Nter和GST-Cter)相对分子质量分别为72 000、40 000、32 000和51 000。结论:成功构建RUNX3全长和各个结构域截短的GST标签的原核表达载体,并实现其重组蛋白在原核细胞中的表达。

关键词： RUNX3 载体蛋白诱导蛋白表达

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CCL_（229）细胞经诱导后蛋白激酶C及抑制剂活性的变化

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生物化学与生物物理进展 1996年第1期23卷 52-56页

作者：王红梅于秉治王芸庆宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室中国医科大学生物化学教研室

检测以维甲酸（ＲＡ）、１，２５－二羟基维生素Ｄ３（１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３）诱导２ｄ、佛波酯（ＰＭＡ）诱导６ｈ的人大肠癌细胞ＣＣＬ（２２９）的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及其抑制剂活性．结果显示：诱导后ＰＫＣ总活性升高（Ｐ＜... 详细信息

检测以维甲酸（ＲＡ）、１，２５－二羟基维生素Ｄ３（１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３）诱导２ｄ、佛波酯（ＰＭＡ）诱导６ｈ的人大肠癌细胞ＣＣＬ（２２９）的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及其抑制剂活性．结果显示：诱导后ＰＫＣ总活性升高（Ｐ＜０．０５）；ＲＡ、１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３诱导引起细胞质ＰＫＣ活性增加，ＰＭＡ诱导后细胞膜ＰＫＣ比率（细胞膜活性／总活性）显著升高（Ｐ＜０．０１）；诱导后ＰＫＣ抑制剂活性均降低，其中１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３组与对照组有显著差异（Ｐ＜０．０５）；提示ＰＭＡ引起ＰＫＣ从细胞质向细胞膜转移，不同药物诱导后ＰＫＣ及其抑制剂活性出现不同的相对均衡关系．

关键词：大肠肿瘤癌细胞蛋白激酶C 抑制剂

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核酸探针传感器的构建

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生物化学与生物物理进展 1996年第6期23卷 527-531页

作者：陈誉华宋今丹李大为中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳东宁电子所

依据石英振子的晶体谐振频率是其表面沉积物的函数，建立了简便、特异、敏感性达１００ｐｇ，并能对受检样品相对定量的核酸杂交检测新方法，即压电晶体式核酸探针传感器，该方法的主要特点是以快速。

关键词：核酸杂交生物传感器核酸探针

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p21活化激酶2在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂过程中的作用

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解剖学报 2007年第4期38卷 476-480页

作者：程大也梁彬李丰中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

目的研究p21活化激酶2(PAK2)在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂中的作用。方法以爪蟾卵母细胞为模型,利用特异性抑制PAK2活性的PAK2-N端(PAK2-NT)片段,显微注射爪蟾卵母细胞。荧光显微镜下比较PAK2-NT mRNA注射组和对照组卵母细胞生发泡破裂... 详细信息

目的研究p21活化激酶2(PAK2)在爪蟾卵母细胞的细胞质分裂中的作用。方法以爪蟾卵母细胞为模型,利用特异性抑制PAK2活性的PAK2-N端(PAK2-NT)片段,显微注射爪蟾卵母细胞。荧光显微镜下比较PAK2-NT mRNA注射组和对照组卵母细胞生发泡破裂的发生。激光扫描共焦显微镜下,时间延迟摄影法观察两组卵母细胞的细胞质分裂过程中肌动蛋白和纺锤体的变化。结果PAK2-NT mRNA注射组卵母细胞与对照组卵母细胞生发泡破裂发生相似,但PAK2-NT mRNA注射组卵母细胞未见细胞质分裂。结论PAK2可能参与爪蟾卵母细胞的细胞质分裂过程。

关键词： p21活化激酶卵母细胞细胞质分裂显微注射激光扫描共焦显微镜爪蟾

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