检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 1997年第5期26卷 547-549页

作者：陈誉华宋今丹沈阳中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室110001

一种简便实用的ＲＮＡ制备方法陈誉华宋今丹（细胞生物学卫生部重点实验室，沈阳１１０００１）关键词核糖核酸；核酸杂交；反转录—多聚酶链反应ｃＤＮＡ克隆或从ｍＲＮＡ来分析细胞内某蛋白表达的首要步骤是提纯细胞的总ＲＮＡ。迄今... 详细信息

一种简便实用的ＲＮＡ制备方法陈誉华宋今丹（细胞生物学卫生部重点实验室，沈阳１１０００１）关键词核糖核酸；核酸杂交；反转录—多聚酶链反应ｃＤＮＡ克隆或从ｍＲＮＡ来分析细胞内某蛋白表达的首要步骤是提纯细胞的总ＲＮＡ。迄今有关细胞总ＲＮＡ的制备方法虽已常规...

关键词： RNA 制备核酸杂交聚合酶链反应反转录

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缺氧内皮细胞介导肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子mRNA表达

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中华病理学杂志 1998年第6期27卷 425-428页

作者：李丰张燕车东媛邓仲端中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室同济医科大学病理学教研室

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和... 详细信息

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养的肺动脉平滑肌细胞有ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ弱表达；内皮细胞条件培养液明显增加肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达，两者分别为无血清培养组的１．８倍和１．７倍（Ｐ＜０．０１），为常氧内皮细胞条件培养液培养组的１．４倍和１．５倍（Ｐ＜０．０１）。结论缺氧时肺动脉内皮细胞可以介导肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ的自分泌。

关键词：缺氧肺动脉内皮细胞 PASMC PDGF mRNA

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人大肠癌与早幼粒白血病细胞中内质网分子伴侣Grp94的差异表达

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科学通报 1997年第16期42卷 1773-1776页

作者：陈誉华宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

内质网分子伴侣Grp（Glucose regulated protein）94属HSP（Heat shock protein）90家族,是正常细胞内质网腔中含量较丰富的蛋白质,在多种应激条件下其表达水平可明显升高。Grp94的主要功能是参与由内质网合成的蛋白质的折叠装配和跨膜... 详细信息

内质网分子伴侣Grp（Glucose regulated protein）94属HSP（Heat shock protein）90家族,是正常细胞内质网腔中含量较丰富的蛋白质,在多种应激条件下其表达水平可明显升高。Grp94的主要功能是参与由内质网合成的蛋白质的折叠装配和跨膜转运。人Grp94编码基因的cDNA长度为2780bp,与编码基因相比,它的两个假基因均有不同程度的插入、缺失与点突变。这些结果均是从非癌细胞研究中获得的。在癌细胞研究中了解到。

关键词：内质网分子伴铝 Grp94 大肠癌白血病癌细胞

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结直肠癌相关细胞膜表面抗原检测试剂盒的研制

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中华检验医学杂志 2001年第3期24卷 148-150页

作者：刘戈飞宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的　探讨以结直肠癌相关细胞膜表面抗原作为标志物的结直肠癌诊断方法。方法　分别应用生物素氨基己酰肼和辣根过氧化物酶标记能识别该抗原的单克隆抗体ND 1,研制采用生物素链霉亲和素技术的一步夹心酶联免疫法检测血清中该抗原的试... 详细信息

目的　探讨以结直肠癌相关细胞膜表面抗原作为标志物的结直肠癌诊断方法。方法　分别应用生物素氨基己酰肼和辣根过氧化物酶标记能识别该抗原的单克隆抗体ND 1,研制采用生物素链霉亲和素技术的一步夹心酶联免疫法检测血清中该抗原的试剂盒 ,并用临床收集的健康人与结直肠癌患者血清对试剂盒诊断的有效性进行评价。结果　健康人组吸光度值 (A4 0 5)为 0 .0 5 6± 0 .0 38,结直肠癌患者组A值为 0 .5 5 3± 0 .44 1,两组差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;用接受器性能曲线分析确定试剂盒诊断临界值为 0 .2 48,灵敏度、特异度和有效性分别为 89.2 9% ,87 5 % ,88.5 4% ,ROC值为0 95 ;试剂盒检测的批内变异小于 5 % ,批间变异小于 10 % ;诊断结果与病理诊断结果差异无显著意义 (P <0 .0 1)。该抗原在血清中的含量与结直肠癌的分化程度相关 (P <0 .0 5 ) ,而与结直肠癌的分期无相关 (P >0 .0 5 )。结论　该抗原作为新发现的肿瘤标志物对结直肠癌的诊断有一定的应用价值。

关键词：肿瘤标记生物学结肠肿瘤酶联免疫吸附测定细胞膜表面抗原直肠肿瘤

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分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进

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中国医科大学学报 2000年第5期29卷 325-328页

作者：李丰吴一迪王芸庆宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为... 详细信息

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。

关键词： mRNA差异显示技术丁酸钠大肠癌发病机理

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人盆部淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

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解剖学杂志 2001年第3期24卷 261-264页

作者：蔡威宋今丹等中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳110001

目的　研究人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。方法 :采用电镜酶细胞化学方法观察 7例人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。结果 :Mg2 + ATP酶主要定位在淋巴细胞膜内... 详细信息

目的　研究人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。方法 :采用电镜酶细胞化学方法观察 7例人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。结果 :Mg2 + ATP酶主要定位在淋巴细胞膜内侧 ,G 6 P酶主要定位在内质网、线粒体膜相结构 ,5′ Nase定位在细胞膜外表面。结论 :3种酶定位准确 ,颗粒清晰 ,酶反应特异性强。应用电镜酶细胞化学方法可以检测酶活性变化 ,对判定机体免疫状态及对临床诊断与治疗具有一定意义。

关键词：盆部淋巴系统淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位活性研究

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丁酸钠诱导的人大肠癌细胞成熟分化中的表型变化

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中国医科大学学报 2000年第6期29卷 404-407页

作者：李丰吴一迪王芸庆宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的 :探讨食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长、分化的影响。方法 :应用 MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术 ,观察经丁酸钠诱导后低分化人大肠癌细胞系 Clone- A细胞生长及形态学变化。结果 :经丁酸钠诱导后 ,Clone- A细胞生长... 详细信息

目的 :探讨食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长、分化的影响。方法 :应用 MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术 ,观察经丁酸钠诱导后低分化人大肠癌细胞系 Clone- A细胞生长及形态学变化。结果 :经丁酸钠诱导后 ,Clone- A细胞生长受到明显抑制 ;G0 / G1 期细胞百分比增加 ,S期细胞百分比减少 ,细胞增殖指数下降 ,诱导后 Clone- A细胞变长 ,出现胞浆突起 ,由圆形、不规则形变为扁平的成纤维细胞样形态。同时 ,丁酸钠作用 2 d后 ,细胞表面伸出丝状伪足 ,4d后明显变长。胞浆内质网、高尔基体数量及密度增加 ,内质网聚集核周围并铺展于胞质内 ,形态趋于正常。结论 :丁酸钠能够抑制低分化人大肠癌细胞生长 ,诱导其成熟分化 ,使其一些恶性表型逆转。

关键词：丁酸钠大肠癌分化表型

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人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第1期25卷 6-8页

作者：陈航方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库。方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cD-NA。双链cDNA经末端削平、EcoRⅠ接头... 详细信息

目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库。方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cD-NA。双链cDNA经末端削平、EcoRⅠ接头连接、XhoⅠ酶切、过柱分级分离,除去<400bp片段。收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAPExpress载体连接,体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库。结果:构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库,原始库容量为2.3×109pfu/L,重组率97%。重组子插入cDNA片段平均大小1kb以上。结论:成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库,为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础。

关键词：人大肠癌噬菌体 cDNA表达文库

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人SCG10基因原核质粒构建及其重组蛋白表达

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 491-493页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李家滨李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用... 详细信息

目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用GST-beads纯化诱导的融合蛋白,经Western blot印迹鉴定。结果 SCG10全长编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在BL21大肠杆菌中IPTG诱导融合蛋白的表达分子量为47 kDa,成功纯化出GST及GST-SCG10蛋白,Wstern blot检测到蛋白表达。结论构建了SCG10基因原核表达载体,鉴定了GST-SCG10融合蛋白表达。

关键词： SCG10蛋白纯化融合蛋白 Western blot

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未折叠蛋白反应对维甲酸诱导鼠胚胎干细胞分化的作用

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解剖学报 2003年第2期34卷 162-167页

作者：尚德淑陈誉华宋今丹中国医科大学发育生物学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的　研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。　方法　应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别... 详细信息

目的　研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。　方法　应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别用RT PCR和Westernblot方法检测模型中UPR分子的表达。　结果　RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irelα的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降 ,但未经RA处理组中Irelα的表达始终低于同一时间RA处理组细胞 ;Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升 ,但在未经RA处理组Grp 78的表达未见上升。Irelα和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。　结论　以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统 ,可作为研究神经发育的初步模型 ,其模型中UPR分子的表达变化提示。

关键词：未折叠蛋白反应维甲酸诱导胚胎干细胞细胞分化

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