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解剖科学进展 2016年第2期22卷 162-164,168页

作者：张健刘奇李瑞娟张红艳李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122 沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科沈阳110001

目的研究小分子化合物M-364对人胃癌细胞BGC823、MKN-45增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法应用MTT检测不同浓度小分子化合物M-364对于胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的化合物M-364处理BGC... 详细信息

目的研究小分子化合物M-364对人胃癌细胞BGC823、MKN-45增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法应用MTT检测不同浓度小分子化合物M-364对于胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的化合物M-364处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述两种细胞侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物M-364以剂量依赖的方式抑制BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的侵袭能力,但对增殖能力无明显影响。Western Blot结果显示M-364能够下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物M-364抑制BGC823、MKN-45胃癌细胞侵袭可能与下调MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平相关。

关键词： M-364 胃癌侵袭 MMP2 Cofilin

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CUEDC2介导肿瘤发生相关机制的研究进展

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生命科学 2015年第9期27卷 1168-1173页

作者：于灏婷李彦姝中国医科大学七年制临床医学系中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室

CUEDC2是一种普遍存在于许多肿瘤中的蛋白质,与肿瘤的发生以及预后治疗存在着紧密关系,近年来越来越受到广泛的关注和重视。现从CUEDC2在乳腺癌中的作用,对有丝分裂细胞周期、炎症反应的信号通路和巨噬细胞的调节,以及CUEDC2与一些新兴... 详细信息

CUEDC2是一种普遍存在于许多肿瘤中的蛋白质,与肿瘤的发生以及预后治疗存在着紧密关系,近年来越来越受到广泛的关注和重视。现从CUEDC2在乳腺癌中的作用,对有丝分裂细胞周期、炎症反应的信号通路和巨噬细胞的调节,以及CUEDC2与一些新兴领域如褪黑素以及热休克蛋白的关系入手,对CUEDC2介导肿瘤发生相关机制的研究进展进行综述。

关键词： CUEDC2 肿瘤乳腺癌 APC/C NF-κB信号通路 JAK1/STAT3信号通路

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一种转移性大肠癌特异性核酸适配子的分析鉴定及应用

一种转移性大肠癌特异性核酸适配子的分析鉴定及应用

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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：李婉明王蒴周琳琳方瑾医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

核酸适配子(aptamer)是利用指数富集的系统进化技术(the systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从一个库容量达1018的随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶细胞高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列.W3... 详细信息

核酸适配子(aptamer)是利用指数富集的系统进化技术(the systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从一个库容量达1018的随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶细胞高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列.W3是本课题组在前期工作中以转移性大肠癌细胞系LoVo为靶细胞,通过消减Cell-SELEX技术筛选得到的能与转移性肿瘤细胞特异性结合的核酸适配子.为了进一步明确W3所结合的靶标是否具有转移性肿瘤标志物特性并探讨W3作为标志物检测探针的可能性,本研究首先采用流式分选技术对靶细胞LoVo进行基于W3结合特异性的分选,收集得到W3high和W3low细胞亚群.体外生物学行为分析显示W3high的体外增殖能力和单克隆形成能力与W3low相似,但是迁移和侵袭能力显著高于W3low,表明W3结合的靶分子与肿瘤的侵袭转移相关.裸鼠成瘤实验显示W3high的成瘤能力低于W3low,但肝转移能力明显高于W3low,这结果进一步说明W3结合的靶分子为转移性大肠癌的特异性生物标志物.为了探讨W3能否作为临床转移性大肠癌的靶向成像分子探针,我们将W3连接量子点构建量子点探针(W3-QD),对89例的大肠癌组织病理标本和15例的癌旁组织进行成像检测,结果发现W3-QD具有良好的肿瘤特异性,且荧光信号的强弱与淋巴结转移与否高度相关,表明W3可以作为转移性肿瘤的一个特异性分子探针,能够为肿瘤早期发生转移提供一个有效的诊断工具.同时,基于W3对转移性肿瘤细胞的高特异结合活性,本研究尝试将其用于含量稀少但具有良好诊断价值的循环肿瘤细胞的捕获,即利用W3建立基于微流控芯片的细胞捕获系统,成功实现了对混合细胞及人全血中肿瘤细胞的靶向捕获和富集,可望为大肠癌患者血样中的循环肿瘤细胞的检测提供有效简便的新方法.

关键词：核酸适配子转移性大肠癌靶向成像循环肿瘤细胞

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MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

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现代肿瘤医学 2015年第2期23卷 157-162页

作者：王金行丁奇周雯雯刘柏新刘芙蓉宋鉴清中国医科大学附属第一医院检验科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21... 详细信息

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P<0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P<0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)%、(38.6±1.56)%]、siRNA组[(27.3±1.72)%、(37.3±1.59)%]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)%、(22.1±1.63)%],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P<0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P<0.05)。结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据。

关键词：多发性骨髓瘤 miR-21 SPRY2 增殖侵袭

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hβ-arrestin2基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

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现代肿瘤医学 2015年第9期23卷 1198-1200页

作者：刘彩红毛琪郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞病理生物学研究室细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 哈尔滨医科大学大庆校区医学检验与技术学院免疫教研室黑龙江大庆163319

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测... 详细信息

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测序公司检测正确后瞬时转染人胚肾细胞HEK293,Western blot检测融合蛋白表达。激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在HEK293细胞中的分布。结果:hβ-arrestin2编码序列被成功克隆至p EGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为77k Da,p EGFP-C1-β-arrestin2定位于HEK293细胞的细胞质中。结论:成功构建hβ-arrestin2基因真核表达载体,证实了融合蛋白定位在HEK293的细胞质中。

关键词： hβ-arrestin2基因蛋白质印记绿色荧光蛋白

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利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：陈晨卢超霞王琼曹丽华罗阳张学中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分... 详细信息

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分,因此上述基因的突变,均可影响Ⅳ型胶原的折叠、分泌及基质形成等分子生物学功能,从而引起AS。方法:我们利用Ion AmpliseqTM Inherited Disease Panel,通过靶向二代测序技术进行包括COL4A3,COL4A4和COL4A5基因在内的328个基因的突变筛查,针对可疑突变进行Sanger测序验证及进一步的RNA水平分析。结果:靶向二代测序区域未直接检测到致病突变,但我们在分析原始数据中发现COL4A5基因外显子4,10,17,20,21,37和45未被Disease Panel的探针完全覆盖,Sanger测序验证以上区域,发现先证者COL4A5基因内含子9存在剪接突变c.547-3C>A,其母亲该位点为杂合突变。经RNA提取及cDNA测序分析显示先证者发生COL4A5基因外显子1 0跳跃,整码缺失21个氨基酸。结论:本研究首次发现COL4A5基因的一个新剪接突变,导致外显子10缺失,据此分析在蛋白水平Ⅳ型胶原α5链将丢失7个典型的Gly—X-Y结构,很可能影响胶原分子的构象、弹性及组装。综上,我们利用二代测序技术检测到X连锁Alport综合征家系的致病突变,并在RNA水平验证了该突变导致的外显子跳跃,帮助确定临床诊断,并为后续的遗传咨询和产前诊断提供可靠依据。

关键词：先证者靶向二代测序 Alport 综合征基因突变分析

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野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达

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吉林大学学报（医学版） 2014年第1期40卷 27-30页

作者：刘彤李丹妮李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段... 详细信息

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。

关键词： p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签

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人Elf5基因真核表达质粒的构建及其亚细胞定位

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现代肿瘤医学 2014年第6期22卷 1236-1238页

作者：张红艳张健李丹妮李彦姝刘芙蓉李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人Elf5真核细胞表达质粒,并研究其在乳腺癌MCF7细胞中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人Elf5基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,构建含人Elf5基因的真核表达质粒pEGFPhElf5。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定... 详细信息

目的:构建人Elf5真核细胞表达质粒,并研究其在乳腺癌MCF7细胞中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人Elf5基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,构建含人Elf5基因的真核表达质粒pEGFPhElf5。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定Elf5真核表达质粒及Elf5蛋白的亚细胞定位。结果:经酶切鉴定、DNA测序、免疫印迹方法确认Elf5基因成功导入真核表达载体pEGFP-C1。瞬时转染MCF7细胞,Elf5蛋白表达在细胞核中。结论:pEGFP-Elf5真核表达质粒构建成功,Elf5定位在细胞核中。

关键词： Elf5 pEGFP-C1 亚细胞定位

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p57^(kip2)蛋白在乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位

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现代肿瘤医学 2014年第3期22卷 506-509页

作者：李彦姝刘芙蓉张红艳李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:研究p57kip2在人乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位。方法:免疫印迹法检测人乳腺肿瘤细胞系中p57kip2的表达。人乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,检测p57kip2在组织中的表达。激光共聚焦扫描显微镜检测内源p57kip2在MCF-7细胞中的定... 详细信息

目的:研究p57kip2在人乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位。方法:免疫印迹法检测人乳腺肿瘤细胞系中p57kip2的表达。人乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,检测p57kip2在组织中的表达。激光共聚焦扫描显微镜检测内源p57kip2在MCF-7细胞中的定位。结果:p57kip2在乳腺癌细胞系内表达,免疫组化染色分析和激光共聚焦扫描显微镜证实p57kip2主要定位于细胞核内。结论:p57kip2在乳腺癌细胞内表达,p57kip2主要定位于乳腺癌组织细胞核内,可能是参与肿瘤细胞基因转录调控和蛋白表达的重要蛋白之一。

关键词： p57kip2 免疫组织化学激光共聚焦扫描显微镜定位

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小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制

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解剖科学进展 2014年第2期20卷 105-108,111页

作者：张健刘彤李瑞娟刘奇李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科沈阳110001

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞... 详细信息

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。

关键词： E-039 人胃癌侵袭金属基质蛋白酶2 Cofilin

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