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生物化学与生物物理进展 2025年

作者：程雅洁周雪彤王瑞方瑾中国医科大学生命科学学院医学细胞生物学教育部重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室青岛大学附属妇女儿童医院病理科中国医科大学基础医学院干细胞与再生医学教研室

目的探讨大肠癌LoVo细胞来源的外泌体（LoVo-Exos）对肿瘤血管生成的影响，并探讨其促血管生成的可能分子机制。方法超速离心法提取LoVo-Exos，共聚焦显微镜观察其内化进入受体HUVEC细胞，体外管状形成实验分析LoVo-Exos对血管生成的... 详细信息

目的探讨大肠癌LoVo细胞来源的外泌体（LoVo-Exos）对肿瘤血管生成的影响，并探讨其促血管生成的可能分子机制。方法超速离心法提取LoVo-Exos，共聚焦显微镜观察其内化进入受体HUVEC细胞，体外管状形成实验分析LoVo-Exos对血管生成的影响；采用小鼠体内基质胶塞实验，体内分析LoVo-Exos对血管生成的影响。为探讨LoVo-Exos促血管生成的分子机制，Western blot分析LoVo-Exos携带活化型表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor，pEGFR）进入受体细胞。Western blot及ELISA方法分析EGFR-ERK通路关键信号蛋白及下游血管生成核心分子表达情况，并观察敲减EGFR及细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulatory protein kinase，ERK）抑制剂处理对血管生成的影响。结果共聚焦显微镜观察到LoVo-Exos内化进入HUVEC内皮细胞；体外血管生成实验显示，LoVo-Exos能够显著促进HUVEC细胞管状结构的形成。小鼠皮下基质胶塞实验显示LoVo-Exos能够促进血管样结构的形成。进一步研究发现LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，激活EGFR-ERK通路，促进血管生成。分析LoVo-Exos对下游血管生成核心分子表达的影响，发现LoVo-Exos能够促进HUVEC细胞白介素-8（interleukin-8，IL-8）的分泌，敲减EGFR的LoVo-Exos该促进作用降低，且该促进作用能够被MEK1/2抑制剂U0126抑制。结论 LoVo-Exos能够在体内外促进血管生成，其可能机制为LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，通过EGFR-ERK途径上调IL-8分泌水平，从而促进HUVEC血管生成能力，为癌症的转移提供新机制。

关键词：外泌体血管生成表皮生长因子受体大肠癌

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实验性支气管哮喘豚鼠肺和内脏感觉传入系统蛋白激酶C的表达及神经生长因子的调节作用

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中华结核和呼吸杂志 2005年第8期28卷 525-529页

作者：曹德寿刘晓湘巩永凤刘丽方秀斌中国医科大学基础医学院解剖学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角)蛋白激酶C(PKC)的表达及神经生长因子(NGF)的调节作用。方法40只豚鼠按随机数字表法分为4组生理盐水对照组(A组)8只、单纯致敏对照组(B组)8只、... 详细信息

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角)蛋白激酶C(PKC)的表达及神经生长因子(NGF)的调节作用。方法40只豚鼠按随机数字表法分为4组生理盐水对照组(A组)8只、单纯致敏对照组(B组)8只、哮喘组(C组)12只和NGF抗体组(D组)12只。用免疫组织化学方法检测各组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的免疫反应变化;采用Westernblot方法分别检测各组豚鼠肺组织、C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角NGF与PKC的表达;采用LuzexF实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对以上结果进行图像分析。结果(1)免疫组织化学A、B组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的平均吸光度(A)值分别为0.102±0.009、0.113±0.009、0.106±0.005、0.116±0.007,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的A值分别为0.215±0.014、0.176±0.010,C组与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。D组豚鼠C7～T5脊神经节和对应的脊髓后角PKC的A值分别为0.140±0.008、0.130±0.011,D组与C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)Westernblot蛋白印迹C组肺组织、C7～T5脊神经节神经元及相应脊髓节段PKC蛋白表达量(其A相对值分别为1.51±0.01、1.40±0.03、2.22±0.02)与A组(其A相对值分别为0.51±0.02、0.43±0.01、0.92±0.02)和B组比较均明显增加,而D组PKC蛋白表达量(其A相对值分别为0.80±0.03、0.83±0.01、1.12±0.02)明显低于C组。结论PKC可能参与哮喘的发病过程,而NGF可上调哮喘豚鼠PKC的表达。

关键词：神经生长因子蛋白激酶C 脊神经节脊髓哮喘神经生长因子(NGF) 蛋白激酶C(PKC) 实验性支气管哮喘图像分析系统内脏感觉传入

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地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入部位IL-1β表达的抑制作用

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中国药理学通报 2005年第6期21卷 681-684页

作者：曹德寿佟浩刘晓湘刘丽方秀斌中国医科大学基础医学院解剖学教研室中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)IL-1β表达的抑制作用。方法以卵蛋白致敏豚鼠制作哮喘模型,免疫组织化学检测各组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角IL-1β的表达,Westernblot免疫印迹... 详细信息

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)IL-1β表达的抑制作用。方法以卵蛋白致敏豚鼠制作哮喘模型,免疫组织化学检测各组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角IL-1β的表达,Westernblot免疫印迹检测各组豚鼠肺、C7T5脊神经节及对应的脊髓后角IL-1β的蛋白表达变化。结果哮喘组豚鼠IL-1β在肺及内脏感觉传入系统表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结论IL-1β可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠IL-1β的表达可能是激素治疗哮喘的机制之一。

关键词：白介素-1β 地塞米松肺脊神经节脊髓哮喘

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罂粟碱与缓激肽配伍开放血肿瘤屏障机制的初探

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中国药理学通报 2008年第11期24卷 1436-1440页

作者：乔文芳刘坤薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨罂粟碱与缓激肽配伍对血肿瘤屏障开放是否有协同效应,以及细胞因子IL-1β在血肿瘤屏障开放机制中的作用。方法♀Wistar大鼠160只,随机分为8组,即假手术组,模型组,罂粟碱(PA)组,缓激肽(BK)组,PA+BK组,1/2PA+BK组,1/2BK+PA组,1/2P... 详细信息

目的探讨罂粟碱与缓激肽配伍对血肿瘤屏障开放是否有协同效应,以及细胞因子IL-1β在血肿瘤屏障开放机制中的作用。方法♀Wistar大鼠160只,随机分为8组,即假手术组,模型组,罂粟碱(PA)组,缓激肽(BK)组,PA+BK组,1/2PA+BK组,1/2BK+PA组,1/2PA+1/2BK组。每组20只。建立大鼠C6胶质瘤模型,颈内动脉给药,通过电镜观察紧密连接开放程度,用伊文斯蓝检测血肿瘤屏障通透性。应用Western法测定各组大鼠肿瘤组织内白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的变化。应用免疫组织化学法测定各组大鼠肿瘤部位脑微血管周围IL-1β蛋白表达的变化。结果与假手术组及模型组相比,PA组,BK组,PA+BK组,IL-1β蛋白表达量明显增加(P<0.05);其中PA+BK组与其他各组相比,IL-1β蛋白表达量明显增高(P<0.01)。结论罂粟碱与缓激肽配伍应用对血肿瘤屏障开放具有协同效应。细胞因子IL-1β蛋白表达的变化趋势与血肿瘤屏障通透性的变化有关。

关键词：罂粟碱缓激肽白细胞介素-1β 血肿瘤屏障脑胶质瘤

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缓激肽开放血瘤屏障过程中诱发快速耐受性的机制探讨

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中国药理学通报 2006年第12期22卷 1466-1470页

作者：秦丽娟谷艳婷薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨缓激肽(bradykinin,BK)开放血瘤屏障过程中,HSF1和HSP70对BK诱发快速耐受性的影响。方法首先通过立体定向法接种C6细胞制备恶性胶质瘤大鼠模型。模型制备成功后,经颈内动脉缓慢小剂量给予缓激肽(或生理盐水)10μ***-1,动态观察... 详细信息

目的探讨缓激肽(bradykinin,BK)开放血瘤屏障过程中,HSF1和HSP70对BK诱发快速耐受性的影响。方法首先通过立体定向法接种C6细胞制备恶性胶质瘤大鼠模型。模型制备成功后,经颈内动脉缓慢小剂量给予缓激肽(或生理盐水)10μ***-1,动态观察肿瘤组织内热休克因子1(heatshockfactor1,HSF1)蛋白单体和三聚体的活性及热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)的表达(Westernblot法)。免疫组织化学技术检测血瘤屏障上紧密连接蛋白occludin的变化。利用伊文思蓝连续监测缓激肽处理后的C6恶性胶质瘤大鼠血瘤屏障的通透性,同时电镜观察血瘤屏障的病理学改变。结果缓激肽作用于C6大鼠后,紧密连接增宽,血瘤屏障通透性增加,伊文思蓝渗出量分别较对照组增加了5.19μg.g-1(0min),5.06μg.g-1(5min),11.35μg.g-1(10min,P<0.05),21.54μg.g-1(15min,P<0.01),12.81μg.g-1(30min,P<0.05),7.28μg.g-1(60min)。肿瘤组织内HSF1蛋白三聚体活性和HSP70蛋白的表达逐渐增加,且分别于处理后的5min和30min时达高峰(P<0.01,与对照组相比),最大值为对照组的2～3倍。免疫组化检测结果发现,处理后的C6动物,其血瘤屏障的紧密连接蛋白occludin表达减少,15min后逐渐增加。结论缓激肽作用于血瘤屏障后,激活了HSF1并促进了hsp70蛋白的表达。增加的hsp70可能通过发挥分子伴侣作用来修复紧密连接蛋白,进而诱发快速耐受性。

关键词：缓激肽血瘤屏障热休克蛋白70 热休克因子1

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缓激肽对C6胶质瘤细胞分泌白细胞介素-6的影响

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中国肿瘤临床 2007年第13期34卷 721-723页

作者：王振华薛一雪中国医科大学基础医学院生理教研室沈阳市110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳市110001

目的:白细胞介素-6(IL-6)与脑胶质瘤的恶性增殖密切相关,本文探讨缓激肽作用大鼠C6胶质瘤细胞后对IL-6表达的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫法分别检测1μmol·L-1缓激肽作用下,C6胶质瘤细胞内及细胞培养液中... 详细信息

目的:白细胞介素-6(IL-6)与脑胶质瘤的恶性增殖密切相关,本文探讨缓激肽作用大鼠C6胶质瘤细胞后对IL-6表达的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫法分别检测1μmol·L-1缓激肽作用下,C6胶质瘤细胞内及细胞培养液中IL-6的表达水平。结果:RT-PCR结果显示缓激肽作用于C6胶质瘤细胞,在不同时相点(0,5,10,15,30,60min)均有IL-6mRNA的表达,各组间比较无显著性差异(P>0.05);放射免疫法结果显示,细胞培养液中未检测到IL-6的表达。结论:缓激肽作用C6胶质瘤细胞60min以内不引起IL-6的表达增强,这为缓激肽临床应用的安全性提供了有利的实验依据。

关键词：神经胶质瘤缓激肽白细胞介素-6

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尼古丁对PD大鼠黑质多巴胺能神经元变性的影响

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解剖学报 2009年第4期40卷 555-559页

作者：李春丽王志刚翟秀岩中国医科大学基础医学院发育生物学教研室

目的探讨尼古丁对帕金森病（PD）大鼠黑质多巴胺能神经元变性的影响及其机制。方法45只大鼠随机分为PBS对照组（CON）、生理盐水＋脂多糖（NS）组、尼古丁＋脂多糖（NIC）组,每组15只。黑质内立体定向注射脂多糖（LPS）或PBS后24h,免疫... 详细信息

目的探讨尼古丁对帕金森病（PD）大鼠黑质多巴胺能神经元变性的影响及其机制。方法45只大鼠随机分为PBS对照组（CON）、生理盐水＋脂多糖（NS）组、尼古丁＋脂多糖（NIC）组,每组15只。黑质内立体定向注射脂多糖（LPS）或PBS后24h,免疫印迹法检测黑质诱导性一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达变化;黑质注射药物后14d,采用免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数量及OX-42阳性细胞形态学变化,RT-PCR及免疫印迹检测黑质TH mRNA及TH蛋白的表达水平。结果与CON组相比,NS组大鼠黑质iNOS表达明显增多,TH阳性神经元、TH mRNA及TH蛋白明显减少,小胶质细胞大多呈胞体大突起短粗的形态;NIC组黑质iNOS表达明显少于NS组,黑质TH阳性神经元、TH mRNA及TH蛋白表达较NS组明显增多,大部分小胶质细胞呈胞体小,突起细长的形态。结论尼古丁可以减轻LPS介导的多巴胺能神经元变性,对多巴胺能神经元有保护作用,其保护机制与抑制小胶质细胞激活、减少iNOS的表达有关。

关键词：尼古丁帕金森病脂多糖小胶质细胞多巴胺免疫印迹法反转录-聚合酶链式反应 PD大鼠

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哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

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解剖学报 2006年第2期37卷 195-198页

作者：齐金萍曹德寿刘晓湘张国斌方秀斌中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳医学院解剖学教研室沈阳110001

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统（C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角）的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺... 详细信息

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统（C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角）的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法（Western blotting）检测肺及C7～T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子（NGF）的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组（0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029）（P＜0.01）.Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7～T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±***在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关（r=0.651,P＜0.01）.结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子.

关键词： SH2-Bβ 脊神经节脊髓哮喘免疫组织化学法免疫印迹法小鼠

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铝对未成年大鼠血脑屏障完整性的影响

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中华预防医学杂志 2008年第1期42卷 12-15页

作者：刘新刘丽波刘云会薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001 中国医科大学第二临床学院神经外科

目的观察并探讨铝对大鼠血脑屏障的影响。方法健康40d龄SD大鼠80只，按体重随机分到空白生理盐水组、低铝组（Al^3＋2．5mg／kg）、中铝组（Al^3＋5mg／kg）、高铝组（Al^3＋10mg／kg）中，每组20只，腹腔注射无菌AlCl3溶液，造成铝中... 详细信息

目的观察并探讨铝对大鼠血脑屏障的影响。方法健康40d龄SD大鼠80只，按体重随机分到空白生理盐水组、低铝组（Al^3＋2．5mg／kg）、中铝组（Al^3＋5mg／kg）、高铝组（Al^3＋10mg／kg）中，每组20只，腹腔注射无菌AlCl3溶液，造成铝中毒，用Morris水迷宫来检测染毒前后大鼠的学习记忆能力，股静脉注入2％伊文思蓝测定血脑屏障通透性，利用透射电镜观察血脑屏障超微结构和细胞器的变化，蛋白印迹法测紧密连接蛋白occludin的含量变化。结果与生理盐水组相比，中铝组和高铝组大鼠血脑屏障通透性增加，构成血脑屏障重要部分的微血管内皮细胞超微结构发生变化，出现细胞器细胞核的变化，紧密连接蛋白occludin表达显著减少。但各组大鼠水迷宫结果差异无统计学意义。结论短时期铝接触并不能导致大鼠学习记忆能力的改变，但是血脑屏障的超微结构及其通透性均发生了显著变化。

关键词：铝血脑屏障毛细血管通透性

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毒力岛基因ibeT有助于大肠杆菌抵抗人脑微血管内皮细胞溶酶体的降解

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生物化学与生物物理进展 2009年第4期36卷 417-423页

作者：张可赵伟东李强方文刚朱莉陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

大肠杆菌是导致新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌.为探讨毒力岛基因ibeT在大肠杆菌K1株致病过程中的作用,构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株,细菌在细胞内存活试验结果显示,ibeT基因缺失抑制了大肠杆菌K1株在人脑微血管内皮... 详细信息

大肠杆菌是导致新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌.为探讨毒力岛基因ibeT在大肠杆菌K1株致病过程中的作用,构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株,细菌在细胞内存活试验结果显示,ibeT基因缺失抑制了大肠杆菌K1株在人脑微血管内皮细胞中的生长.利用激光共聚焦扫描显微镜观察到,在细菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞后,与野生型相比,ibeT基因缺失突变株较多地滞留在溶酶体内;透射电镜结果进一步显示,ibeT基因缺失使大肠杆菌K1株逃逸ECV(含有大肠杆菌的囊泡)的能力发生了下降,继而使其在细胞浆内的复制减少.利用体外模拟的弱酸性环境,检测大肠杆菌菌体胞内的缓冲容量,发现ibeT基因缺失突变株菌体胞内的缓冲能力较野生型低.这些结果提示,在大肠杆菌K1株侵袭进入人脑微血管内皮细胞后,ibeT基因有利于大肠杆菌降解ECV膜,避免与溶酶体融合,进而促使大肠杆菌逃逸进入细胞浆并进行复制.

关键词： ibeT 大肠杆菌K1株人脑微血管内皮细胞溶酶体逃逸

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