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中国老年学杂志 2006年第8期26卷 1091-1093页

作者：毕国荣张辉周慧杰海虹张贺敏方秀斌中国医科大学第二临床学院神经内科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室

目的探讨肾上腺髓质素(adrenom edu llin,ADM)在不同月龄大鼠脑缺血再灌注(I/R)脑组织的表达情况。方法采用栓线法制成大鼠大脑中动脉I/R模型,阻断血流2 h后再灌注4 h。应用免疫组织化学染色法检测不同月龄段大鼠局灶性脑I/R后血浆ADM... 详细信息

目的探讨肾上腺髓质素(adrenom edu llin,ADM)在不同月龄大鼠脑缺血再灌注(I/R)脑组织的表达情况。方法采用栓线法制成大鼠大脑中动脉I/R模型,阻断血流2 h后再灌注4 h。应用免疫组织化学染色法检测不同月龄段大鼠局灶性脑I/R后血浆ADM。结果正常大鼠脑内即有ADM表达,假手术后ADM表达略有增加,但与正常对照组相比无明显差异(P>0.05);大鼠脑I/R后ADM免疫阳性细胞增多,与正常对照组及假手术组相比差异显著(均P<0.05);大鼠脑I/R后缺血侧及缺血对侧ADM免疫阳性细胞均增多,但以缺血侧区域增多最为明显(P<0.05)。老龄大鼠脑I/R后ADM免疫阳性细胞数明显高于青年大鼠(P<0.05)。结论脑I/R后ADM表达增强,ADM表达增强与血管硬化相关。

关键词：脑缺血再灌注肾上腺髓质素免疫组织化学染色法

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肺炎支原体重组P1蛋白多克隆抗体的制备及纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1208-1210页

作者：曾晶晶王舰赵芝娜刘忠顺董占双王桂珍中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;S... 详细信息

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;SDS-PAGE分析抗体的纯度;量子点标记纯化抗体,分析抗体的免疫活性;直接免疫荧光法检测抗体的特异性。结果重组P1蛋白兔免疫血清抗体效价为1∶25 600;纯化的抗体浓度为3.689μg/μl;SDS-PAGE显示相对分子质量58 000的重链条带;用量子点标记纯化的抗体仍保持较高的免疫活性,与其他呼吸道常见病原菌均未发生特异性结合。结论获得的纯化Mp P1蛋白IgG抗体具有较高的免疫活性和特异性,可用于临床Mp感染的抗原诊断。

关键词：支原体,肺炎 P1蛋白多克隆抗体

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运动对大鼠骨骼肌PI3K磷酸化与表达的影响

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中国医科大学学报 2008年第4期37卷 477-479页

作者：曹师承孙黎光赵刚刘慧莉张合中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室中国医科大学基础医学院运动医学基础教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院运动医学基础教研室

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA表达、蛋白总量(t-PI3K)及磷酸化PI3K(p-PI3K)的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h/d和1.5h/d的游泳运动7周,最后一次运动结束恢复24h和48h取材,分为1... 详细信息

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA表达、蛋白总量(t-PI3K)及磷酸化PI3K(p-PI3K)的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h/d和1.5h/d的游泳运动7周,最后一次运动结束恢复24h和48h取材,分为1h/d运动24h取材组、1h/d运动48h取材组、1.5h/d运动24h取材组、1.5h/d运动48h取材组。测定血液葡萄糖和胰岛素浓度;Westernblot法检测骨骼肌t-PI3K蛋白表达、p-PI3K磷酸化水平;RT-PCR法分析PI3KmRNA表达。结果与对照组比较,运动组胰岛素浓度降低;各运动组p-PI3K升高;1h/d运动24h取材组和1.5h/d运动24h与48h取材组t-PI3K增高;PI3KmRNA表达变化发生在1h和1.5h运动24h取材组。结论运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,改善PI3K磷酸化、蛋白和基因表达。

关键词：磷脂酰肌醇3-激酶运动骨骼肌基因表达

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铜及赖氨酰氧化酶与胎膜早破的相关性研究

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中华妇产科杂志 2006年第1期41卷 7-11页

作者：张惠丹陈惠池单连峰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001 第二临床医院妇产科基础医学院数学教研室

目的探讨孕妇血清铜（Cu）、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶（LOX）、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性，以及与胎膜早破的关系。方法100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组，其中妊娠37～42周40例、34～36周^＋6 40例、28～33周^＋6 20例；与胎膜... 详细信息

目的探讨孕妇血清铜（Cu）、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶（LOX）、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性，以及与胎膜早破的关系。方法100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组，其中妊娠37～42周40例、34～36周^＋6 40例、28～33周^＋6 20例；与胎膜早破组孕周、例数相对应的100例非胎膜早破孕妇作为对照组。应用火焰原子吸收法检测两组孕妇血清Cu和羊膜Cu水平，荧光发光法检测羊膜LOX水平，免疫组化法和图像分析法检测羊膜Ⅲ型胶原水平。将不同孕周孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原测定结果进行直线相关分析，并比较胎膜早破组与对照组在这些指标上的差异。结果（1）妊娠37—42周：两组孕妇血清Cu与羊膜Cu水平呈正相关，r为0．82（P〈0．001），其他各指标均无相关关系。（2）妊娠34～36周^＋6和28～33周^＋6：两组孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原水平之间均呈正相关（P〈0．01）。（3）妊娠37～42周：两组孕妇血清Cu水平与羊膜Cu比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；胎膜早破组及对照组孕妇羊膜LOX水平分别为（0．53±0．10）和（0．75±0．10）μg／g（P〈0．01），羊膜Ⅲ型胶原吸光度（A）值分别为0．36±0．01和0．37±0．01（P〈0．05）；（4）妊娠34—36周^＋6：胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为（115．23±9．56）、（139．03±10．59）mg／L，羊膜Cu水平分别为（0．19±0．04）、（0．29±0．04）μg／mg，羊膜LOX水平分别为（0．54±0．10）、（0．70±0．13）μg／g，羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0．36±0．01、0．37±0．01。胎膜早破组以上各指标均低于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（5）妊娠28～33周^＋6：胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为（120．31±8．04）、（136．40±8．21）μg／L，羊膜Cu水平分别为（0．21±0．04）、（0．26±0．03）μg／mg，羊膜LOX水平分别为（0．62±0．09）、（0．72±0．09）μg／g，羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0．35±0．01、0．38±0．01。胎膜早破组以上各指标均低于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论足月妊娠的胎膜早破孕妇，其羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原水平下降不受血清Cu水平的影响，这可能与羊膜的退行性变加快有关；未足月妊娠的胎膜早破孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原的水平降低则与胎膜早破的发生直接相关。

关键词：胎膜早破铜蛋白赖氨酸6-氧化酶胶原Ⅲ型

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骨髓间充质干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的功能恢复

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中国医科大学学报 2010年第1期39卷 7-9页

作者：刁延娜马兰兰孟凡彪李宏图庞希宁中国医科大学基础医学院发育生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤的作用。方法将大鼠MSCs移植到大鼠脊髓损伤处,移植后评估大鼠行为学改变,免疫组织化学染色法观察BrdU标记的MSCs在脊髓损伤处存活情况,辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,观察脊髓损伤处... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤的作用。方法将大鼠MSCs移植到大鼠脊髓损伤处,移植后评估大鼠行为学改变,免疫组织化学染色法观察BrdU标记的MSCs在脊髓损伤处存活情况,辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,观察脊髓损伤处神经通路的重构建,皮层体感诱发电位(CSEP)测定脊髓损伤处神经通路传导功能的恢复。结果术后移植组评分均高于损伤组,移植组大鼠脊髓损伤区远端检测到BrdU阳性细胞,脊髓损伤近侧端检测到HRP阳性细胞,CSEP波形恢复但波幅减低,潜伏时延长。结论MSCs可在损伤区存活并分化为神经元,在损伤局部形成神经元通路,使损伤脊髓的远端和近端建立联系,神经纤维传导功能部分恢复。

关键词：骨髓间充质干细胞脊髓损伤移植

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斯氏按蚊配子体激活因子活性变化与产卵的关系

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中国人兽共患病学报 2007年第12期23卷 1194-1197页

作者：王继春蒋志云申莉刘英杰曹雅明中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001

目的探讨斯氏按蚊唾液腺中疟原虫配子体激活因子的变化趋势与蚊卵发育及产出的关系。方法应用体外雄配子体出丝观察方法检测雌性斯氏按蚊唾液腺抽提物及卵巢匀浆上清中配子体激活因子对伯氏疟原虫雄配子体出丝诱导活性的动态变化;分别... 详细信息

目的探讨斯氏按蚊唾液腺中疟原虫配子体激活因子的变化趋势与蚊卵发育及产出的关系。方法应用体外雄配子体出丝观察方法检测雌性斯氏按蚊唾液腺抽提物及卵巢匀浆上清中配子体激活因子对伯氏疟原虫雄配子体出丝诱导活性的动态变化;分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Bradford蛋白分析法检测两器官蛋白成分或含量的变化。结果吸血后按蚊唾液腺抽提物的出丝诱导活性显著下降,未产卵组和产卵组按蚊的活性分别于吸血后第8日和第4日恢复到吸血前水平;卵巢匀浆上清的诱导活性亦在吸血后下降,吸血后第2日显著升高,未产卵组保持该活性水平至吸血后第8日,产卵组诱导活性于吸血后第4日(产卵翌日)回落。两组按蚊唾液腺蛋白组成未见明显区别;吸血后第2日,卵巢的蛋白含量达到峰值,未产卵组按蚊卵巢蛋白含量维持在高水平直至吸血后第6日,而产卵组按蚊卵巢蛋白含量在吸血后第4日则恢复到吸血前的水平。结论按蚊唾液腺中配子体激活因子的消长与雌蚊体内蚊卵的发育、成熟及产出之间存在某种内在的生理联系。

关键词：斯氏按蚊伯氏疟原虫配子体激活因子唾液腺卵巢

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重组人睾丸精子结合蛋白对蛋白激酶A活性的影响

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生物医学工程学杂志 2007年第6期24卷 1334-1337,1342页

作者：宿文辉张哲张杰于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

为探讨人睾丸精子结合蛋白(TSBP)在精子获能及顶体反应中可能发挥的作用,检测了TSBP重组蛋白在体外转染细胞系中对蛋白激酶A活性的影响。构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,稳定转染HEK293细胞后,蛋白免疫印迹检测到培养细胞... 详细信息

为探讨人睾丸精子结合蛋白(TSBP)在精子获能及顶体反应中可能发挥的作用,检测了TSBP重组蛋白在体外转染细胞系中对蛋白激酶A活性的影响。构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,稳定转染HEK293细胞后,蛋白免疫印迹检测到培养细胞中融合蛋白的表达。选择表达量高的细胞克隆,扩增并用金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6-TSBP。用放射自显影法检测HEK293细胞中蛋白激酶A(PKA)活性,发现重组质粒转染组PKA活性高于对照组,确定了TSBP对PKA活性的促进作用。

关键词：人睾丸精子结合蛋白蛋白纯化蛋白激酶A

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小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21蛋白表达及定位的影响

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生物工程学报 2007年第3期23卷 493-496页

作者：武迪迪冯晨刘莹张杰宗志宏具英花李雪松于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

初步探讨在小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21蛋白表达及定位的影响。通过显微操作技术注射野生型、持续激活型及激酶失活型的PKB的mRNA,用免疫荧光方法检测p21蛋白的细胞定位、Western blot方法检测p21蛋白的表达。结果显示在注射... 详细信息

初步探讨在小鼠受精卵早期发育过程中PKB/Akt对p21蛋白表达及定位的影响。通过显微操作技术注射野生型、持续激活型及激酶失活型的PKB的mRNA,用免疫荧光方法检测p21蛋白的细胞定位、Western blot方法检测p21蛋白的表达。结果显示在注射不同形式的PKB mRNA后p21蛋白的表达无明显差别,但是细胞定位发生改变,PKB被激活后,p21蛋白滞留在胞浆中。因而初步认为在小鼠受精卵中,PKB/Akt通过影响p21的细胞定位而影响细胞周期的进程。

关键词：蛋白激酶B p21 细胞周期小鼠受精卵

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人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 437-440页

作者：刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 详细信息

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入*** BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。

关键词： P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白

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急性脑梗死患者血浆肾上腺髓质素含量的变化及其与内皮素的相关性

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中国医科大学学报 2005年第2期34卷 159-161页

作者：毕国荣张辉方秀斌中国医科大学附属第二医院神经内科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室

目的:探讨脑梗死后血浆肾上腺髓质素含量的变化及其与内皮素的相互关系。方法:应用放射免疫分析法检测62例急性脑梗死患者血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量,进行动态观察,同时与54例健康体检者血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量进行对比分... 详细信息

目的:探讨脑梗死后血浆肾上腺髓质素含量的变化及其与内皮素的相互关系。方法:应用放射免疫分析法检测62例急性脑梗死患者血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量,进行动态观察,同时与54例健康体检者血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量进行对比分析。结果:急性期脑梗死患者血浆肾上腺髓质素和内皮素的含量均升高,与正常对照组相比,差异非常显著(P均<0. 01)。肾上腺髓质素的含量与病情严重程度呈显著正相关(r=0. 856,P<0. 01);与梗死体积呈显著正相关(r=0. 753,P<0. 01);与内皮素含量呈显著正相关(r=0. 761,P<0. 01)。动态观察脑梗死后血浆肾上腺髓质素含量变化,发现其高峰值出现在梗死后3d,至2周左右已明显下降,但与正常对照组相比仍有显著性差异(P<0. 01)。结论:脑梗死后血浆肾上腺髓质素含量变化可有助于判断病情严重程度、梗死灶的体积大小及病情预后。

关键词：脑梗死肾上腺髓质素内皮素

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