检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P<0.01),红白髓界线清晰,生发中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P<0.001),衰老蛋白分子p21和p53表达下调(P<0.001),增殖相关分子Ki67和PCNA表达上调(P<0.001,P<0.05),自噬相关分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P<0.001),活性氧含量降低(P<0.001),CD3^(+)T细胞比例增加(P<0.05),衰老相关分泌表型中白细胞介素1β分泌水平降低(P<0.001),转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

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XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

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解剖学报 2014年第2期45卷 190-195页

作者：田晓红侯伟健柏树令范军佟浩徐赫中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早... 详细信息

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。

关键词： XAV939 神经母细胞瘤 Wnt β-catenin信号通路免疫印迹法人

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RNA干扰介导的端锚聚合酶1表达下调诱导人神经母细胞瘤细胞的凋亡

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解剖学报 2014年第2期45卷 196-203页

作者：田晓红柏树令范军侯伟健佟浩徐赫中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导的端锚聚合酶1(TNKS1)的表达下调对人神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y体外增殖能力和凋亡的影响及机制,为开发治疗NB的新靶点提供一定的实验基础。方法根据TNKS1基因序列,设计合成3个TNKS1基因的特异性短发夹环(s... 详细信息

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导的端锚聚合酶1(TNKS1)的表达下调对人神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y体外增殖能力和凋亡的影响及机制,为开发治疗NB的新靶点提供一定的实验基础。方法根据TNKS1基因序列,设计合成3个TNKS1基因的特异性短发夹环(shRNA)干扰片段,利用慢病毒作为载体,构建目的基因的RNAi序列。慢病毒感染SH-SY5Y细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测TNKS1基因的表达,筛选出最佳干扰序列进行后续实验。然后进行克隆形成实验,检测RNAi-TNKS1后细胞增殖能力的改变。并进一步用Western blotting法检测抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Caspase-3、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达,最后用透射电镜观察凋亡形态的改变,探讨RNAi-TNKS1对细胞凋亡的影响及其作用机制。结果慢病毒载体构建成功,病毒滴度为5×1011TU/L。Real-time PCR检测结果显示,#3 shRNA为最佳的有效靶点。克隆形成实验的结果显示,RNAi-TNKS1后SH-SY5Y细胞的克隆形成率较对照组明显下降。Western blotting结果显示,RNAi-TNKS1可显著抑制Bcl-2蛋白的表达,促进Caspase-3蛋白的表达。此外,Wnt/β-catenin通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达也降低。透射电镜结果显示,RNAi-TNKS1后细胞呈现明显的凋亡结构和形态。结论 RNAi介导的TNKS1的表达下调可降低SH-SY5Y细胞的体外增殖能力,诱导其凋亡,可能部分是通过抑制Wnt/β-catenin通路发挥作用。

关键词： RNA干扰端锚聚合酶1 神经母细胞瘤 Wnt β-catenin信号通路免疫印迹法人

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毛囊培养上清液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的研究

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解剖学报 2008年第3期39卷 386-389页

作者：王慧君柏树令中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨毛囊培养上清液诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向毛囊干细胞横向分化的潜能。方法采用完全贴壁法分离培养大鼠MSCs,取第3代MSCs,用免疫细胞化学染色技术鉴定CD44和CD29。用毛囊培养上清液为条件培养液诱导MSCs,倒置... 详细信息

目的探讨毛囊培养上清液诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向毛囊干细胞横向分化的潜能。方法采用完全贴壁法分离培养大鼠MSCs,取第3代MSCs,用免疫细胞化学染色技术鉴定CD44和CD29。用毛囊培养上清液为条件培养液诱导MSCs,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,对诱导后的细胞进行角蛋白15的免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进一步鉴定诱导后细胞角蛋白15的表达。结果体外培养的MSCs,CD44、CD29表达阳性。经毛囊上清液诱导后,免疫细胞化学、免疫荧光细胞化学染色鉴定,部分细胞角蛋白15表达阳性;同时RT-PCR也检测到keratin 15 mRNA的表达。结论体外培养的骨髓间充质干细胞经毛囊培养上清液诱导可以分化为毛囊干细胞样的细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞毛囊干细胞诱导分化逆转录-聚合酶链反应大鼠

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姜黄素对大鼠胸主动脉瘤Bcl-2和Bax表达的影响

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解剖学报 2013年第2期44卷 210-213页

作者：范军柏树令田晓红侯伟健阎亚伟佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中Bcl-2和Bax表达的影响。方法将30只成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。HE染色及地衣红染色观察胸... 详细信息

目的探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中Bcl-2和Bax表达的影响。方法将30只成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。HE染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变;免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁Bcl-2和Bax的表达。结果姜黄素可明显抑制胸主动脉的扩张。与对照组比较,动脉瘤组Bax表达水平明显升高,Bcl-2表达水平降低,姜黄素能有效降低动脉瘤中Bax的表达,升高Bcl-2表达水平。结论姜黄素可以促进胸主动脉瘤Bc1-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2的比值。

关键词：姜黄素 Bax Bcl-2 胸主动脉瘤免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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表皮干细胞在糖尿病创面愈合过程中的动态变化

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中国修复重建外科杂志 2007年第7期21卷 693-697页

作者：田晓红柏树令田伟范军佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的观察糖尿病（diabetes mellitus，DM）大鼠创伤后不同时期表皮厚度、表皮干细胞（epidermalste mcells，ESCs）数量变化和分布特征及创面愈合率等动态变化，探讨ESCs与DM皮肤创面难愈之间的关系。方法 48只Wistar大鼠，雄性，体重... 详细信息

目的观察糖尿病（diabetes mellitus，DM）大鼠创伤后不同时期表皮厚度、表皮干细胞（epidermalste mcells，ESCs）数量变化和分布特征及创面愈合率等动态变化，探讨ESCs与DM皮肤创面难愈之间的关系。方法 48只Wistar大鼠，雄性，体重180～200g。随机分为DM组和正常对照组，各24只。DM组大鼠制备DM大鼠慢性创面愈合模型。两组大鼠同时用特制打孔器在大鼠背部脊柱两侧约1．5cm制作直径1．8cm、面积2．54cm。的全层皮肤缺损（共计96个创面），分别在致伤后第3、7、14和21天拍摄创面，计算创面愈合率；取创缘及肉芽组织，行HE染色及角蛋白19（keratin19，K19）和β1整合素抗体免疫组织化学染色，显微图像分析系统测量表皮厚度、阳性部分面积及灰度值。结果致伤后第3、7、14和21天，正常对照组大鼠创面愈合率分别为24．48％±3．37％、50．46％±1．26％、92．82％±2．12％和99．41％±0．66％，而DM组分别为2．43％±1．02％、40．59％±1．65％、80．77％±3．57％和85．40％±0．94％，两组同时期比较差异有统计学意义（P〈0．01）。致伤后第3、7、14和21天，正常对照组表皮厚度分别为26．43±3．21、33．29±3．52、31．53±3．35和26．01±3．19p．m，DM组表皮厚度分别为23．58±2．33、31．02±3．38、33．72±5．49和21．80±4．02p．m，致伤后第3、21天，二者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。致伤后第3、7、14和21天，正常对照组K19染色的平均阳性单位（positiveunit，PU）值分别为91．68％、93．14％、72．27％和70．31％，而DM组分别为40．29％、40．79％、29．94％和10．37％；正常对照组β1整合素染色的平均PU值分别为49．60％、91．16％、77．13％和57．17％，DM组分别为38．94％、24．16％、61．36％和38．83％，与正常对照组同时期比较，DM组K19和β1整合素染色的平均PU值都降低，且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 ESCs数量少和活性低可能是DM创面难愈的重要机制之一。

关键词：糖尿病创面创面愈合表皮干细胞动态变化大鼠

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Wistar大鼠胰岛细胞体外分离、纯化及鉴定(英文)

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解剖学报 2007年第3期38卷 356-359页

作者：田晓红柏树令佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探索Wistar大鼠胰岛分离纯化的最佳条件。方法采用肝胰管内灌注胶原酶消化分离胰岛及Ficoll 400密度梯度离心纯化。纯化后的胰岛经组织学染色、电镜及放射免疫法鉴定其特异性和活力。结果组织学染色显示纯化后胰岛的活力和纯度分别... 详细信息

目的探索Wistar大鼠胰岛分离纯化的最佳条件。方法采用肝胰管内灌注胶原酶消化分离胰岛及Ficoll 400密度梯度离心纯化。纯化后的胰岛经组织学染色、电镜及放射免疫法鉴定其特异性和活力。结果组织学染色显示纯化后胰岛的活力和纯度分别在95%和85%以上。电镜显示纯化后的胰岛形态完整,包膜清晰,分泌颗粒丰富。放射免疫结果表明,低糖组和高糖组分泌胰岛素的浓度有显著差异,证明胰岛功能良好。结论肝胰管内灌注胶原酶消化法是一种好的消化方法。影响胰岛收获量的因素很多,例如胰腺的充分扩张,胶原酶的浓度和活性以及消化的时间等。

关键词：胰岛细胞分离纯化电镜放射免疫大鼠

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JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义

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解剖学报 2012年第5期43卷 690-693页

作者：范军柏树令李想阎亚伟田晓红侯伟健佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉。用免疫... 详细信息

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉。用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达。结果免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱。Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组。结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用。

关键词： c-Jun氨基末端激酶 c-Jun 胸主动脉瘤免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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血管内皮生长因子和血小板反应蛋白-1在大鼠胸主动脉瘤中的表达

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解剖学报 2012年第6期43卷 818-821页

作者：范军柏树令阎亚伟李想田晓红佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及血小板反应蛋白-1(TSP-1)在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法 30只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和手术组,每组15只。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及血小板反应蛋白-1(TSP-1)在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法 30只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和手术组,每组15只。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉。HE染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变;免疫组织化学和免疫印迹法检测动脉瘤壁VEGF和TSP-1的表达。结果免疫组织化学显示,VEGF主要表达于动脉瘤中膜和外膜,而对照组表达很弱;TSP-1表达于正常动脉全层,而动脉瘤表达很弱。免疫印迹法显示,动脉瘤组织中VEGF表达均强于对照组,而TSP-1弱于对照组。结论 VEGF和TSP-1均参与胸主动脉瘤的形成,其可能是胸主动脉瘤新生血管生成的关键决定因素。

关键词：血管内皮生长因子血小板反应蛋白-1 胸主动脉瘤免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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姜黄素对大鼠胸主动脉瘤JNK信号通路的影响

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解剖学杂志 2013年第1期36卷 33-34页

作者：范军柏树令田晓红阎亚伟侯伟健佟浩中国医科大学基础医学院组织工程教研室沈阳110001

目的：探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中JNK信号的影响。方法：成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙（CaCl2）诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。H-E染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改... 详细信息

目的：探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中JNK信号的影响。方法：成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙（CaCl2）诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。H-E染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变;免疫组织化学检测动脉瘤壁p-JNK和p-c-Jun的表达。结果：姜黄素可明显抑制胸主动脉的扩张。与对照组比较,动脉瘤组p-JNK和p-c-Jun表达水平明显升高,而姜黄素能有效抑制动脉瘤中JNK和cJun的磷酸化。结论：姜黄素抑制胸主动脉瘤的发展有可能与其抑制JNK信号相关。

关键词：姜黄素 JNK 胸主动脉瘤免疫组织化学大鼠

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