检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞生物学杂志 2004年第4期26卷 433-438页

作者：刘戈飞黄东阳杜晶崔泽实宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001 汕头大学医学院汕头515031 中国医科大学实验技术中心沈阳110001

应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR... 详细信息

应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR具有视黄醛还原酶活性,在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的Km值和Vmax值分别(2.8±0.24)μM和(0.468±0.036)μmol／(min·mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa细胞后,应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR定位到过氧化物酶体是必需的,删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此,人肝脏NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。

关键词：辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶全反式视黄酸人肝脏表达细胞活性

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雌激素受体ERα的功能调控及相关疾病的研究进展

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中国细胞生物学学报 2011年第1期33卷 65-71页

作者：刘晓霞翟曜耀赵越中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的... 详细信息

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的功能受许多因子调节,包括与之结合的配体、DNA上的顺式元件、募集的辅助调节因子及细胞环境等。在雌激素受体相关疾病中,除乳腺癌和子宫内膜癌外,近年研究表明心血管疾病、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病等疾病也与雌激素受体密切相关。雌激素的生物效应与多种疾病的发生、转归和预后密切相关。本文将综述几类辅助调节因子对雌激素受体介导的基因转录的调控,雌激素受体相关疾病,及环境有害物质对ERα功能的影响。

关键词：雌激素受体辅助调节因子雌激素受体相关疾病环境有害物质

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Flag标签MORC2-677丝氨酸位点突变载体构建及表达

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生命科学研究 2012年第1期16卷 1-5页

作者：王桂玲王孝会程正国宋艳艳李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部细胞生物学重点实验室中国辽宁沈阳110001

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MOR... 详细信息

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MORC2-WT野生型质粒为模板,在S677突变位点两侧设计重叠突变引物,进行三轮重叠延伸PCR完成定点突变,获得MORC2全长编码序列的S677位点的定点突变体载体(pcDNA3.1A-MORC2-S677A/S677E);再通过KpnⅠ和XhoⅠ酶切把pcDNA3.1A-MORC2-WT/S677A/S677E各载体定向克隆到已构建好的pcDNA3.1-Flag空载体中,酶切鉴定及测序正确后,转染到SGC-7901细胞中,利用Flag–标签抗体,Western blot检测其各突变载体的表达.成功构建了人Flag标签MORC2全长编码序列S677位点突变体真核表达载体并在SGC-7901细胞中获得带Flag标签融合蛋白表达产物,为进一步研究MORC2的功能奠定了基础.

关键词： MORC2 突变体真核表达载体基因表达胃癌细胞

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应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞膜表面糖链表达

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中国医科大学学报 2009年第7期38卷 481-483页

作者：李春辉何群潘忠诚王天骄张玉魁李超赵雨杰中国医科大学基础医学院生物芯片中心卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞系A549和H460细胞膜表面糖链表达类型。方法用胶原酶Ⅱ消化非小细胞肺癌细胞系,对提取的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖链表达。结果腺癌A... 详细信息

目的应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞系A549和H460细胞膜表面糖链表达类型。方法用胶原酶Ⅱ消化非小细胞肺癌细胞系,对提取的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖链表达。结果腺癌A549和大细胞肺癌H460除LTL和DBA这两个凝集素位点没有捕获到细胞外,其余各点均捕获到细胞。结论根据凝集素的亲和特异性表明,非小细胞肺癌细胞膜表面糖链类型主要有:唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链,为建立癌症细胞膜表面糖链表达谱和寻找肺癌分子靶向治疗的药物作用位点提供理论依据。

关键词：凝集素芯片特异性非小细胞肺癌细胞糖链表达

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巨噬细胞炎症蛋白1α促进6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层

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细胞生物学杂志 2006年第6期28卷 883-887页

作者：尚德淑马怡然赵伟东方文刚朱莉陈誉华宋今丹中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞... 详细信息

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)表达明显增高。为进一步在体外研究促使T淋巴细胞穿过HBMEC单层的机制,选取重组人MIP-1α(rhMIP-1α)作用于HBMEC,同时选用高表达MIP-1α的人急性白血病T淋巴细胞(6T-CEM)作为模式细胞,与HBMEC共同温育。发现rhMIP-1α可促进6T-CEM细胞穿过HBMEC单层,并使HBMEC单层紧密连接结构发生改变。在6T-CEM细胞或rhMIP-1α与HBMEC单层单独温育过程中,均引起HBMEC单层CCR5表达变化。提示MIP-1α可能通过与HBMEC单层上CCR5相互作用介导T淋巴细胞穿过HBMEC单层。

关键词：巨噬细胞炎症蛋白1α 人脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 CC趋化因子受体5

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不同连接肽的双价单链抗体基因的构建及表达

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细胞生物学杂志 2007年第2期29卷 272-276页

作者：严丹丹方瑾宋今丹中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳医学院免疫教研室

采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3],将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND-1scFv共价连接,构建表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌BL21中表达ND-1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni2+亲和层析方法对表达产物进... 详细信息

采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3],将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND-1scFv共价连接,构建表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌BL21中表达ND-1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni2+亲和层析方法对表达产物进行纯化,SDS-PAGE、免疫荧光法(IFA)和ELISA对纯化后的蛋白质进行纯度和免疫活性分析。结果表明成功构建了表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌中获得高效表达,其表达产物以不溶性包涵体形式存在。纯化后ND-1sc(Fv)2-5、ND-1sc(Fv)2-15的蛋白质纯度分别为90%和86%。IFA及ELISA结果表明,二者均保留了亲本抗体的免疫活性,对表达在人大肠癌细胞上的肿瘤相关抗原LEA具有特异结合活性,其免疫活性均明显高于ND-1scFv,其中ND-1sc(Fv)2-15的免疫活性更接近于亲本单抗ND-1,该抗体有望成为大肠癌临床导向诊断和治疗的理想载体。

关键词：双价单链抗体 ND-1 连接肽大肠癌表达

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血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究

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癌症 2005年第9期24卷 1096-1101页

作者：徐晓琳刘戈飞黄东阳辽宁省辽阳中医药学校辽宁辽阳111000 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001 汕头大学医学院分子生物学中心广东汕头515041

背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过... 详细信息

背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性。方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Westernblot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析;用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTT法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用。结果:成功构建了滴度为2×108pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长。结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用。

关键词：血管内皮细胞血管抑制素/拮抗和抑制剂杆状病毒基因转染草地贪夜蛾(Sf9) 昆虫细胞

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血管内皮生长因子及其受体在鼠成骨细胞分化中的作用

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中华实验外科杂志 2004年第7期21卷 852-854,F003页

作者：李长有宋今丹原银栋范广宇中国医科大学第一临床学院骨科沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部重点实验室

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在鼠成骨细胞分化过程中的作用。方法利用鼠原代FRC细胞培养系统(第0、5、9、14天)和取材新生鼠颅盖骨组织(5例),采用反转录聚合酶链反应(RTPCR)和免疫组织化学染色方法,检测VEGF及其受体Flt1和KDR/Flk1... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在鼠成骨细胞分化过程中的作用。方法利用鼠原代FRC细胞培养系统(第0、5、9、14天)和取材新生鼠颅盖骨组织(5例),采用反转录聚合酶链反应(RTPCR)和免疫组织化学染色方法,检测VEGF及其受体Flt1和KDR/Flk1在FRC细胞分化、矿化过程中mRNA和在新生鼠颅盖骨组织中蛋白质的表达。结果在控制培养条件下,FRC细胞出现明显的成骨特性。结合FRC细胞分化特性,RTPCR检测发现VEGF及其受体Flt1和KDR/Flk1在FRC细胞中从分化到矿化过程中,mRNA表达逐渐增强。特别是在矿化后第9天和第14天表达水平明显增强。免疫组织化学染色证实了RTPCR结果,新生鼠颅盖骨中的成骨细胞同时表达VEGF及其受体Flt1和KDR/Flk1。结论VEGF及其受体Flt1和KDR/Flk1在成骨细胞分化和矿化过程中表达逐渐增强。作为一种重要的血管性因子,VEGF的自分泌作用方式在成骨细胞的分化中起重要作用。

关键词：血管内皮生长因子受体鼠成骨细胞自分泌作用免疫组织化学

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血管内皮生长因子在人类和鼠成骨细胞中的选择性剪接表达

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中华实验外科杂志 2005年第7期22卷 835-836页

作者：李长有宋今丹原银栋范广宇中国医科大学附属第一医院骨科沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部重点实验室

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)各种转录本亚型在成骨细胞分化中的作用。方法应用特殊设计的引物,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测VEGFmRNA在人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63和胎鼠颅盖骨细胞(FRC)在第0、5、9、14天不同分化阶段中的选... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)各种转录本亚型在成骨细胞分化中的作用。方法应用特殊设计的引物,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测VEGFmRNA在人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63和胎鼠颅盖骨细胞(FRC)在第0、5、9、14天不同分化阶段中的选择性剪接表达。结果人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63表达所有的VEGFmRNA亚型,其中以VEGF121和VEGF165表达最强。鼠FRC细胞表达3种VEGFmRNA亚型(即VEGF120,VEGF144和VEGF164),其中以VEGF120和VEGF164表达最强。伴随着FRC细胞的增殖、分化和矿化,这些亚型的表达逐渐增强,并且在结节矿化后达到最高水平。结论小分子的VEGF121/120和VEGF165/164在成骨细胞的分化过程中表达增强,可能起重要的血管源性调节作用。

关键词：选择性剪接血管内皮生长因子(VEGF) 人类成骨细胞样细胞 SaOS-2 VEGF165 成骨细胞分化聚合酶链反应颅盖骨细胞方法应用 mRNA 细胞表达表达增强分化过程调节作用血管源性 A亚型转录本逆转录 FRC C细胞高水平

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全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用

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中国现代医学杂志 2006年第11期16卷 1646-1648,1650页

作者：王昕陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观... 详细信息

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观察大鼠行为学改变。结果随着PFOS浓度的增高细胞形态发生变化,细胞变圆、部分细胞不再贴壁、细胞骨架微管解聚细胞形态变圆,微管逐渐向细胞核周围聚集;动物实验表明高浓度PFOS可导致大鼠脑损伤、出现偏瘫的体征。结论全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞有损伤作用。

关键词：人脑微血管内皮细胞(FIBMEC) PFOS 微管蛋白 α-tubulin

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