检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2011年第8期40卷 684-687页

作者：代炜李彦姝李妍孙长伏中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科教研室口腔颌面头颈外科沈阳110002 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌... 详细信息

目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC在腺样囊性癌ACC-2细胞内的定位。结果 m3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为1 740 bp。Western blot检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC表达,分子量约为91 kDa。pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质内定位,在细胞核内未见表达。结论成功构建了m3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC蛋白主要定位于细胞质内。

关键词： 3D3/LYRIC 腺样囊性癌 AEG-1

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肿瘤相关抗原在人大肠癌中的表达

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肿瘤防治研究 2007年第5期34卷 354-358,F0003页

作者：冯慧伊德林曾艳刘芙蓉方瑾宋今丹沈阳医学院生物化学教研室 110034 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室

目的应用ND-1单抗和抗CEA单抗对大肠癌细胞的标记情况对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及意义。方法采用流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测大肠癌细胞系LEA和CEA的表达。并采用间接ELISA法测定LEA和CEA单抗对大肠癌细胞系的特异性。应用免... 详细信息

目的应用ND-1单抗和抗CEA单抗对大肠癌细胞的标记情况对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及意义。方法采用流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测大肠癌细胞系LEA和CEA的表达。并采用间接ELISA法测定LEA和CEA单抗对大肠癌细胞系的特异性。应用免疫组化检测其在大肠癌组织中的表达。结果流式细胞仪检测显示,LEA抗原在CCL-187、CX-1、CLone A和CCL-229细胞表达的阳性峰平均荧光强度呈递减趋势,并且强于CEA的表达量(P<0.01)。LEA在高分化大肠癌细胞系CCL-187和CX-1高度表达,并且低侵袭大肠癌细胞系CCL-187和CX-1LEA表达量高于高侵袭大肠癌细胞系CLoneA和CCL-229(P<0.01)。ELISA检测表明,与抗CEA单抗相比,ND-1单抗对大肠癌细胞具有很强的特异性结合力(P<0.01)。LEA的表达阳性率随大肠腺癌组织分化程度降低而下降(P<0.01),而且对高分化腺癌表现出更高的选择性。抗CEA单抗对高、中、低分化癌选择性相似(P>0.05)。结论LEA是更加特异的高分化大肠癌相关抗原。LEA可能与癌细胞的分化程度、侵袭力、恶性程度有关,LEA可作为早期诊断和判断大肠癌恶性程度的有用指标。

关键词：肿瘤相关抗原大肠癌细胞表达

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GST/HIF-1α融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

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中国医科大学学报 2009年第10期38卷 721-723,729页

作者：佟宇鑫李丹妮邵阳光李妍李丰中国医科大学第90期生物科学与生物技术系沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和NotI酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEX-4T-2中,构建原... 详细信息

目的构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和NotI酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST/HIF-1α全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了HIF-1α原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化HIF-1α蛋白和研究HIF-1α的生物学功能奠定了基础。

关键词：缺氧诱导因子1α 截短突变体质粒原核表达

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雌激素受体在甲状腺癌中作用的研究进展

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生命科学 2017年第5期29卷 489-494页

作者：宋诗平赵越王春玉中国医科大学七年制沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110122

近年来,越来越多的研究报道了雌激素受体在甲状腺癌发生发展过程中的作用。与正常甲状腺组织和结节性增生组织相比,不同亚型的雌激素受体在甲状腺癌中的表达有不同的改变:乳头状甲状腺癌中雌激素受体的表达与Ki67、突变型P53和VEGF这些... 详细信息

近年来,越来越多的研究报道了雌激素受体在甲状腺癌发生发展过程中的作用。与正常甲状腺组织和结节性增生组织相比,不同亚型的雌激素受体在甲状腺癌中的表达有不同的改变:乳头状甲状腺癌中雌激素受体的表达与Ki67、突变型P53和VEGF这些重要肿瘤标志物有关;ERα与IQGAP1相互作用促进甲状腺癌进展;ERα在甲状腺癌中上调Hsp27表达,等等。这些研究结果确定了雌激素受体对甲状腺癌增殖、侵袭和转移等病理过程的影响,但不同亚型的雌激素受体对甲状腺癌影响尚不完全明确。现就雌激素受体在甲状腺癌中的相关研究进行综述。

关键词：甲状腺癌雌激素受体肿瘤生长肿瘤转移

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PPARα在肝脏相关疾病中作用的研究进展

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生命科学 2017年第5期29卷 479-484页

作者：朱书彤赵越中国医科大学七年制沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110122

过氧化物酶体增殖物激活受体α(perixisome proliferation-activated receptor alpha,PPARα)是核受体超家族成员,是参与肝脏β氧化的主要调控蛋白,通过诱导下游靶基因转录,从而发挥其重要的生物学功能。近年来,肝脏相关疾病的研究备受... 详细信息

过氧化物酶体增殖物激活受体α(perixisome proliferation-activated receptor alpha,PPARα)是核受体超家族成员,是参与肝脏β氧化的主要调控蛋白,通过诱导下游靶基因转录,从而发挥其重要的生物学功能。近年来,肝脏相关疾病的研究备受关注,肝癌(主要以肝细胞性肝癌为主)也呈年轻化趋势。PPARα的活化能够降低高脂喂养小鼠肝脏中甘油三酯的含量或脂肪的生成量。此外,PPARα通过调控细胞增殖与凋亡进程等多种机制参与肝癌进程。现综述PPARα在非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝和肝细胞性肝癌进程中的作用。

关键词： PPARα 转录调控非酒精性脂肪肝酒精性脂肪肝肝细胞性肝癌

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利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术在悬浮细胞中获得基因沉默效应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 226-232页

作者：王淳方文刚李波辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组... 详细信息

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架重组;将重组子转染HEK 293细胞,经过3轮病毒包装,收获病毒颗粒并测定滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞(NCI-H 250和NCI-H 209),通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应,并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果成功构建带有靶基因干扰序列及scramble、空载体的3种腺病毒重组子(AD-shuttle-shPLGF、AD-shuttle-scramble和AD-shuttle)。经过HEK 293细胞包装,最终获得3株病毒颗粒,病毒滴度分别为1.5×1011、1.6×1011和1.6×1011。NCI-H 250和NCI-H 209细胞感染腺病毒颗粒48 h后,大部分细胞表达GFP,感染率接近100%;且两株细胞感染AD-shuttle-shPLGF病毒48 h后,PLGF mRNA表达水平降低(P<0.01),肿瘤细胞侵袭能力明显下降(P<0.01)。结论携带shRNA的腺病毒表达载体可以代替电转、脂质体介导等方法,使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。

关键词： RNA干扰 shRNA 腺病毒载体悬浮细胞

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PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放

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基础医学与临床 2013年第8期33卷 960-965页

作者：王淳李波方文刚陈誉华辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HB... 详细信息

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HBMEC间紧密连接相关蛋白质occludin和ZO-1的表达及分布,用蛋白激酶抑制剂干预和Western blot法检测Rho蛋白活性。结果 25 ng/mL PLGF 30 min显著降低体外血脑屏障模型TEER,使其通透性增高(P<0.05);增加S-occludin表达的同时降低了IS-occludin的表达,使ZO-1蛋白在细胞周边分布减少;此外,ROCK蛋白激酶抑制剂Y27632抑制了PLGF引起的体外血脑屏障透过性增高(P<0.05),并激活细胞内Rho激酶活性。结论 PLGF通过激活HBMEC内Rho/ROCK信号通路,影响HBMEC间紧密连接完整性,进而改变血脑屏障的通透性。

关键词：胎盘生长因子血脑屏障紧密连接 Rho ROCK

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贲门癌中染色体8p21-p23杂合性丢失的研究

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遗传 2006年第6期28卷 641-645页

作者：满晓辉徐岩王振宁吕志徐米多姜莉罗阳徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤外科沈阳110001 中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学重点实验室北京100005

染色体8p21-p23区域存在与多种肿瘤相关的抑癌基因.为明确该染色体区域的抑癌基因与贲门癌的关系,我们进行了贲门癌中染色体8p21-p23区域微卫星标记的杂合性丢失研究.首先采用激光捕获显微切割技术从19例贲门癌组织中获得均质的肿瘤细... 详细信息

染色体8p21-p23区域存在与多种肿瘤相关的抑癌基因.为明确该染色体区域的抑癌基因与贲门癌的关系,我们进行了贲门癌中染色体8p21-p23区域微卫星标记的杂合性丢失研究.首先采用激光捕获显微切割技术从19例贲门癌组织中获得均质的肿瘤细胞及正常的胃粘膜细胞,然后利用多重置换扩增技术扩增捕获细胞的全基因组DNA.选择覆盖染色体8p21-p23区域的13个微卫星标记,利用PCR结合硝酸银染色方法分析了肿瘤细胞中染色体8p21-p23的杂合性丢失情况.结果显示,在贲门癌中染色体8p21-p23的总丢失频率高达63.2%(12/19),单一标记的丢失频率为25%～55.6%.根据不同肿瘤组织中杂合性丢失的情况,我们确定了一个最小缺失区域,即8p22GGAA-8p22ATCT标记间约1.2 Mb的范围.研究结果表明,染色体8p22区域抑癌基因在贲门癌发生发展中起重要作用;染色体最小重叠区域的确定对最终鉴定该区域内的抑癌基因有参考价值.

关键词：贲门癌抑癌基因染色体8p21-p23 杂合性丢失

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RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究

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中华病理学杂志 2005年第3期34卷 150-153页

作者：马琳张军航刘芙蓉张学中国医科大学附属第二医院(盛京医院)妇产科沈阳110004 卫生部细胞生物学重点实验室中国协和医科大学基础医学院医学遗传研究室

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RA... 详细信息

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RASSF1A mRNA在卵巢癌SK OV3细胞中表达缺失;RASSF1A和RASSF1C在人卵巢癌组织中的表达率分别为40.0%(32/80)和91.3%(73/80)。RASSF1AmRNA的表达在浆液性癌、黏液性癌和内膜样癌组织中分别是41.2%(20/48),38.1%(8/21)和36.4%(4/11),P>0.05;临床Ⅰ期和Ⅱ期分别为71.4%和75.0%(10/14,9/12),明显高于临床Ⅲ期和Ⅳ期(26.7%、12/45和14.1%,1/9),P<0.05;高和中分化组分别为58.6%和50.0%(17/29,10/20),明显高于低分化组(16.1%,5/31),P<0.05。结论卵巢癌细胞和人原发卵巢癌组织中存在RASSF1AmRNA表达的缺失,RASSF1A的表达与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关,可能作为一种新的抑癌基因在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用,RASSF1AmRNA的缺失提示预后不良。

关键词：卵巢癌细胞系癌组织中表达率基因转录 RNA 原发临床分化 RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应

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α-2，3-唾液酸糖基转移酶ST3家族分子序列生物信息学分析

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 497-500,511页

作者：马汝海钟连生潘忠诚王天骄何群中国医科大学基础医学院化学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院教育部细胞生物学重点实验室生物芯片中心沈阳110001

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族... 详细信息

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化分析显示其各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化,家族中各亚型底物特异性可能与其糖基化位点相关。

关键词： α-2,3-唾液酸糖基转移酶同源性分析结构域系统进化树

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