检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2011年第7期40卷 577-579页

作者：曹丽华商秀丽王述森季春燕何志义罗阳中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院神经内科沈阳110001

目的对1例临床拟诊断为肯尼迪病的患者进行雄激素受体(AR)基因突变分析。方法对肯尼迪病患者AR基因第一外显子CAG三核苷酸重复序列进行PCR扩增TA克隆后测序。结果基因检测结果表明,患者AR基因第一外显子中CAG重复序列数为50个,符合肯尼... 详细信息

目的对1例临床拟诊断为肯尼迪病的患者进行雄激素受体(AR)基因突变分析。方法对肯尼迪病患者AR基因第一外显子CAG三核苷酸重复序列进行PCR扩增TA克隆后测序。结果基因检测结果表明,患者AR基因第一外显子中CAG重复序列数为50个,符合肯尼迪病基因诊断的标准。结论基因诊断可以作为肯尼迪病诊断的可靠依据。

关键词：肯尼迪病雄激素受体基因多聚谷氨酰胺延展

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PPARα在肝脏相关疾病中作用的研究进展

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生命科学 2017年第5期29卷 479-484页

作者：朱书彤赵越中国医科大学七年制沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110122

过氧化物酶体增殖物激活受体α(perixisome proliferation-activated receptor alpha,PPARα)是核受体超家族成员,是参与肝脏β氧化的主要调控蛋白,通过诱导下游靶基因转录,从而发挥其重要的生物学功能。近年来,肝脏相关疾病的研究备受... 详细信息

过氧化物酶体增殖物激活受体α(perixisome proliferation-activated receptor alpha,PPARα)是核受体超家族成员,是参与肝脏β氧化的主要调控蛋白,通过诱导下游靶基因转录,从而发挥其重要的生物学功能。近年来,肝脏相关疾病的研究备受关注,肝癌(主要以肝细胞性肝癌为主)也呈年轻化趋势。PPARα的活化能够降低高脂喂养小鼠肝脏中甘油三酯的含量或脂肪的生成量。此外,PPARα通过调控细胞增殖与凋亡进程等多种机制参与肝癌进程。现综述PPARα在非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝和肝细胞性肝癌进程中的作用。

关键词： PPARα 转录调控非酒精性脂肪肝酒精性脂肪肝肝细胞性肝癌

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巨噬细胞炎症蛋白1α促进6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层

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细胞生物学杂志 2006年第6期28卷 883-887页

作者：尚德淑马怡然赵伟东方文刚朱莉陈誉华宋今丹中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞... 详细信息

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)表达明显增高。为进一步在体外研究促使T淋巴细胞穿过HBMEC单层的机制,选取重组人MIP-1α(rhMIP-1α)作用于HBMEC,同时选用高表达MIP-1α的人急性白血病T淋巴细胞(6T-CEM)作为模式细胞,与HBMEC共同温育。发现rhMIP-1α可促进6T-CEM细胞穿过HBMEC单层,并使HBMEC单层紧密连接结构发生改变。在6T-CEM细胞或rhMIP-1α与HBMEC单层单独温育过程中,均引起HBMEC单层CCR5表达变化。提示MIP-1α可能通过与HBMEC单层上CCR5相互作用介导T淋巴细胞穿过HBMEC单层。

关键词：巨噬细胞炎症蛋白1α 人脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 CC趋化因子受体5

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利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术在悬浮细胞中获得基因沉默效应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 226-232页

作者：王淳方文刚李波辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组... 详细信息

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架重组;将重组子转染HEK 293细胞,经过3轮病毒包装,收获病毒颗粒并测定滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞(NCI-H 250和NCI-H 209),通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应,并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果成功构建带有靶基因干扰序列及scramble、空载体的3种腺病毒重组子(AD-shuttle-shPLGF、AD-shuttle-scramble和AD-shuttle)。经过HEK 293细胞包装,最终获得3株病毒颗粒,病毒滴度分别为1.5×1011、1.6×1011和1.6×1011。NCI-H 250和NCI-H 209细胞感染腺病毒颗粒48 h后,大部分细胞表达GFP,感染率接近100%;且两株细胞感染AD-shuttle-shPLGF病毒48 h后,PLGF mRNA表达水平降低(P<0.01),肿瘤细胞侵袭能力明显下降(P<0.01)。结论携带shRNA的腺病毒表达载体可以代替电转、脂质体介导等方法,使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。

关键词： RNA干扰 shRNA 腺病毒载体悬浮细胞

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PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放

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基础医学与临床 2013年第8期33卷 960-965页

作者：王淳李波方文刚陈誉华辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HB... 详细信息

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HBMEC间紧密连接相关蛋白质occludin和ZO-1的表达及分布,用蛋白激酶抑制剂干预和Western blot法检测Rho蛋白活性。结果 25 ng/mL PLGF 30 min显著降低体外血脑屏障模型TEER,使其通透性增高(P<0.05);增加S-occludin表达的同时降低了IS-occludin的表达,使ZO-1蛋白在细胞周边分布减少;此外,ROCK蛋白激酶抑制剂Y27632抑制了PLGF引起的体外血脑屏障透过性增高(P<0.05),并激活细胞内Rho激酶活性。结论 PLGF通过激活HBMEC内Rho/ROCK信号通路,影响HBMEC间紧密连接完整性,进而改变血脑屏障的通透性。

关键词：胎盘生长因子血脑屏障紧密连接 Rho ROCK

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全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用

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中国现代医学杂志 2006年第11期16卷 1646-1648,1650页

作者：王昕陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观... 详细信息

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观察大鼠行为学改变。结果随着PFOS浓度的增高细胞形态发生变化,细胞变圆、部分细胞不再贴壁、细胞骨架微管解聚细胞形态变圆,微管逐渐向细胞核周围聚集;动物实验表明高浓度PFOS可导致大鼠脑损伤、出现偏瘫的体征。结论全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞有损伤作用。

关键词：人脑微血管内皮细胞(FIBMEC) PFOS 微管蛋白 α-tubulin

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GST/HIF-1α融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

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中国医科大学学报 2009年第10期38卷 721-723,729页

作者：佟宇鑫李丹妮邵阳光李妍李丰中国医科大学第90期生物科学与生物技术系沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和NotI酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEX-4T-2中,构建原... 详细信息

目的构建GST/HIF-1α融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HIF-1α为模板,用PCR法扩增HIF-1α全长及各个截短片段,通过BamHI和NotI酶切位点将HIF-1α全长及各个截短突变体定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-HIF-1α及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST/HIF-1α全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了HIF-1α原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化HIF-1α蛋白和研究HIF-1α的生物学功能奠定了基础。

关键词：缺氧诱导因子1α 截短突变体质粒原核表达

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小鼠3D3／LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

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中国医科大学学报 2011年第8期40卷 684-687页

作者：代炜李彦姝李妍孙长伏中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科教研室口腔颌面头颈外科沈阳110002 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌... 详细信息

目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC在腺样囊性癌ACC-2细胞内的定位。结果 m3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为1 740 bp。Western blot检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC表达,分子量约为91 kDa。pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质内定位,在细胞核内未见表达。结论成功构建了m3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC蛋白主要定位于细胞质内。

关键词： 3D3/LYRIC 腺样囊性癌 AEG-1

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小鼠肝腹水细胞膜表面糖表达谱

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中国现代医学杂志 2010年第19期20卷 2906-2909页

作者：马汝海何群赵雨杰潘忠诚中国医科大学基础医学院化学教研室中国医科大学生物芯片中心(教育部"细胞生物学"重点实验室) 辽宁沈阳110001

目的探讨肝癌腹水细胞膜表面糖链表达谱。方法用H22细胞制备肝腹水模型鼠,36只小鼠随机分为正常组(6只)和肝腹水组(20只),注射10d后抽取腹水提取癌细胞用吖啶橙荧光标记,应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖表达谱。结果肝癌腹水细胞膜表面... 详细信息

目的探讨肝癌腹水细胞膜表面糖链表达谱。方法用H22细胞制备肝腹水模型鼠,36只小鼠随机分为正常组(6只)和肝腹水组(20只),注射10d后抽取腹水提取癌细胞用吖啶橙荧光标记,应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖表达谱。结果肝癌腹水细胞膜表面有大量唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达,正常小鼠肝组织中只有多聚乳糖胺类型糖链表达。结论肝癌发生过程中伴随着细胞膜糖链类型和数量增加,唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达增加与肝癌变发生发展紧密相关。

关键词：肝癌糖基化细胞膜

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GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

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中国医科大学学报 2011年第11期40卷 961-963,978页

作者：顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟中国医科大学附属盛京医院实验研究中心沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室细胞生物学教育部、卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pG... 详细信息

目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。

关键词： LMO1 截短突变体质粒原核表达

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