检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2021年第4期31卷 107-114页

作者：张雪金美玉于洋郑志红中国医科大学实验动物部沈阳110000 辽宁省转基因动物研究重点实验室沈阳110000

目的NOBOX是在原始卵泡激活过程中起关键作用的转录因子,可直接调控Gdf9转录,并参与GDF9/SMAD通路影响颗粒细胞增殖分化,但其在初级卵泡及之后的具体调控机制并不清楚。Kit作为影响卵泡发育的重要基因,其启动子存在多个NOBOX结合位点。... 详细信息

目的NOBOX是在原始卵泡激活过程中起关键作用的转录因子,可直接调控Gdf9转录,并参与GDF9/SMAD通路影响颗粒细胞增殖分化,但其在初级卵泡及之后的具体调控机制并不清楚。Kit作为影响卵泡发育的重要基因,其启动子存在多个NOBOX结合位点。本研究拟探索在初级卵泡发育阶段,转录因子NOBOX对Kit的转录调控作用,以及通过GDF9/SMAD通路对卵泡发育的影响。方法体外培养初级卵泡统计发育时间;qRTPCR检测显微注射Nobox-siRNA的初级卵泡中Nobox、Kit、Kitl、Gdf9的mRNA表达变化;Western blot检测显微注射Nobox-siRNA的初级卵泡中NOBOX、KIT、P-SMAD的蛋白表达变化;ChIP实验验证转录因子NOBOX在Kit基因启动子上的结合位点。结果初级卵泡在体外培养第5天可发育为次级卵泡,注射Nobox-siRNA的初级卵泡延缓2 d发育至次级;初级卵泡中注射Nobox-siRNA后,卵泡中Nobox、Kit、Kitl、Gdf9 mRNA表达显著下调,NOBOX、KIT、PSMAD2/3蛋白表达量降低;转录因子NOBOX可以结合于Kit基因启动子。结论NOBOX是小鼠初级卵泡发育至次级卵泡的关键基因,NOBOX可直接结合Kit基因启动子,且影响初级卵泡中KITL/KIT和GDF9/SMAD通路。

关键词：初级卵泡 NOBOX ChIP Kit

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小鼠肝炎病毒研究进展

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解剖科学进展 2018年第4期24卷 438-440,443页

作者：陈雪婷刘佳中国医科大学实验动物部辽宁省实验动物转基因研究重点实验室辽宁沈阳110001

小鼠肝炎病毒是世界范围内最常见的感染实验小鼠的病原体。小鼠肝炎病毒是一种冠状病毒,传染性强。未成年小鼠感染小鼠肝炎病毒常引起较高比例的动物死亡,成年小鼠感染小鼠肝炎病毒后多呈隐性感染,但引起一系列的免疫反应,还可引发肝炎... 详细信息

小鼠肝炎病毒是世界范围内最常见的感染实验小鼠的病原体。小鼠肝炎病毒是一种冠状病毒,传染性强。未成年小鼠感染小鼠肝炎病毒常引起较高比例的动物死亡,成年小鼠感染小鼠肝炎病毒后多呈隐性感染,但引起一系列的免疫反应,还可引发肝炎、脑炎和肠炎等病变,从而严重影响实验结果。人们建立了多种方法检测血清中抗体或组织中病毒核酸诊断小鼠肝炎感染。小鼠种群感染小鼠肝炎病毒后可以通过重新引种或胚胎移植的方法清除病毒。

关键词：小鼠肝炎病毒冠状病毒 RNA MHV 病毒包膜

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NRP2和COUP-TFⅡ在大肠癌组织中的表达

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解剖科学进展 2018年第5期24卷 476-478页

作者：张乃友刘佳辽宁省朝阳市中心医院普外科辽宁朝阳122000 中国医科大学实验动物部辽宁省实验动物转基因研究重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨神经纤毛蛋白2(NRP2)和鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)在大肠癌组织中的表达。方法选取57例大肠癌组织和29例正常大肠黏膜组织,将其分别设置为实验组与对照组。采取免疫组织化学方法和Western blot方法对两组大肠... 详细信息

目的探讨神经纤毛蛋白2(NRP2)和鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)在大肠癌组织中的表达。方法选取57例大肠癌组织和29例正常大肠黏膜组织,将其分别设置为实验组与对照组。采取免疫组织化学方法和Western blot方法对两组大肠黏膜组织标本中NRP2和COUP-TFⅡ的蛋白表达水平进行检测,分析在大肠癌组织中NRP2与COUP-TFⅡ表达的相关性。结果大肠癌组织中NRP2与COUP-TFⅡ蛋白阳性表达的光密度值显著高于正常大肠黏膜组织。Spearman相关分析结果显示,大肠癌组织中NRP2与COUP-TFⅡ的表达呈正相关。结论 NRP2与COUP-TFⅡ的高表达与大肠癌的发生发展有关,可作为重要的生物学标志。

关键词：神经纤毛蛋白2 COUP-TFⅡ 大肠癌

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EGFR和CXCL14在大肠癌组织中的表达

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解剖科学进展 2018年第6期24卷 567-569页

作者：张乃友刘佳辽宁省朝阳市中心医院普外科辽宁朝阳122000 中国医科大学实验动物部辽宁省实验动物转基因研究重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)和趋化因子CXCL14在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取57例大肠癌组织和29例正常大肠黏膜组织,将其分别设置为实验组与对照组。采取免疫组织化学方法和Western Blot方法对两组大肠黏膜组织标本中E... 详细信息

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)和趋化因子CXCL14在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取57例大肠癌组织和29例正常大肠黏膜组织,将其分别设置为实验组与对照组。采取免疫组织化学方法和Western Blot方法对两组大肠黏膜组织标本中EGFR和CXCL14的蛋白表达水平进行检测,分析在大肠癌组织中EGFR与CXCL14表达的相关性。结果大肠癌组织中EGFR阳性表达的光密度值显著高于正常大肠黏膜组织,而CXCL14的阳性表达则显著降低,P<0.01。Spearman相关分析结果显示,大肠癌组织中EGFR与CXCL14的表达呈负相关。结论 EGFR的高表达与CXCL14的低表达与大肠癌的发生发展有关,可作为重要的生物学标志。

关键词：表皮生长因子受体 CXCL14 大肠癌

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一种能实现蛋白可逆表达的敲入载体构建方法

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辽宁农业科学 2016年第4期 27-32页

作者：王金霞徐影琪魏政立杨葳张梅英郑志红中国医科大学实验动物部/辽宁省转基因动物研究重点实验室辽宁沈阳110001

在细胞或小鼠中使用Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)条件性地删除或修饰基因是不可逆的,基因删除后蛋白不能恢复表达。FK506-雷怕霉素结合蛋白FKBP L106P不稳定结构域(FKBP L106P destabilization domain)DD-... 详细信息

在细胞或小鼠中使用Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)条件性地删除或修饰基因是不可逆的,基因删除后蛋白不能恢复表达。FK506-雷怕霉素结合蛋白FKBP L106P不稳定结构域(FKBP L106P destabilization domain)DD-C-Shield1系统可以解决这个问题,能人为控制蛋白表达或降解,避免胚胎致死。本实验以小GTP酶腺苷二磷酸核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)为例,借助EL350细菌中Red/ET重组作用,使用DD-C-Shield1系统和重叠延伸PCR方法,发展一种通用的可实现蛋白可逆表达的构建敲入载体的方法。该方法缩短了构建时间,减少了重组的步骤,不需要使用rps L-neo DNA、链霉素和酶切位点。此敲入载体两侧同源臂5 kb左右,可用传统的ES打靶方法构建敲入小鼠,经过简单改造也可使用CRISPR/Cas9方法构建敲入细胞或小鼠模型,从而在细胞和动物模型中进行条件性修饰、快速、可逆地调节特异性蛋白表达,以利于发育学研究,为细胞和活体生物严谨调控蛋白功能提供了一种新的策略。

关键词： FKBP(L106P)不稳定结构域(DD-C) Shield1 敲入载体重叠延伸PCR 可逆降解

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SD大鼠超数排卵的优化

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实验动物与比较医学 2015年第4期35卷 316-317,319页

作者：张婀娜郎雪楠赵文陈雪婷董婉维周生来于洋王惟张梅英郑志红中国医科大学实验动物部辽宁省转基因研究重点实验室沈阳110001

目的通过对鼠龄及激素剂量的控制研究其对SD大鼠排卵的影响。方法分别采用三种不同剂量PMSG／hCG组合（PMSG／hCG：20IU／20IU、25IU／25IU、30IU／30IU）对4、5、6周龄的SD大鼠进行超数排卵处理，以超数排卵总卵数、正常受精卵数、异... 详细信息

目的通过对鼠龄及激素剂量的控制研究其对SD大鼠排卵的影响。方法分别采用三种不同剂量PMSG／hCG组合（PMSG／hCG：20IU／20IU、25IU／25IU、30IU／30IU）对4、5、6周龄的SD大鼠进行超数排卵处理，以超数排卵总卵数、正常受精卵数、异型卵数作为评判标准，确定最佳超排剂量及鼠龄。结果20IU剂量时，三种周龄大鼠分别获取胚胎24．72枚、33．12枚、15．22枚，其中正常受精卵：21．58枚、29．1枚、13．1枚，异型卵：2．01枚、1．01枚、2．12枚；25IU剂量时，三种周龄大鼠分别获取胚胎37．63枚、43．62枚、20．78枚，其中正常受精卵22．67枚、38．6枚、18．5枚，异型卵：2．82枚、1．23枚、2．28枚；30IU剂量时，三种周龄大鼠分别获取胚胎51．69枚、61．36枚、30．2枚，其中正常受精卵47．2枚、60．8枚、25．6枚，异型卵：1．23枚、0．56枚、1．3枚。结论5周龄，激素剂量30Iu为大鼠超排的最适周龄及最佳激素剂量，为基因工程动物制备及胚胎冷冻实验提供技术保障。

关键词：超数排卵激素周龄 SD大鼠

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应用Dicer1转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究

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实验动物与比较医学 2015年第4期35卷 294-297页

作者：李兆阳姜川郭晓冲杨葳董婉维郑志红中国医科大学实验动物部辽宁省转基因研究重点实验室沈阳110001

目的应用D妇r1（编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族）转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL／6J小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL／6J... 详细信息

目的应用D妇r1（编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族）转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL／6J小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果与C57BL／6J小鼠组肿瘤比较，Dicer1转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体A（P〈0．05）。结论应用Dicer1转基因小鼠建立了黑色素瘤模型，结果显示Dicer1基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。

关键词： Dicer1 转基因小鼠黑色素瘤

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ADAR1在Hela细胞中通过抑制内源性凋亡途径促细胞存活

ADAR1在Hela细胞中通过抑制内源性凋亡途径促细胞存活

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中国北方第十三届实验动物科技年会

作者：于萌李兆阳董婉维魏政立徐影琪陈雪婷郎雪楠张梅英郑志红中国医科大学实验动物部辽宁省转基因动物重点实验室 110001

目的:ADAR1作为RNA编辑酶,能够让双链RNA上的腺苷酸(A)转变为次黄嘌呤(Ⅰ).有研究证实ADAR1在肿瘤组织中表达较正常组织高,而且在造血过程中能够阻止细胞凋亡,这些都提示了ADAR1与人类肿瘤的形成有关.本研究在人宫颈癌细胞系Hela细胞中... 详细信息

目的:ADAR1作为RNA编辑酶,能够让双链RNA上的腺苷酸(A)转变为次黄嘌呤(Ⅰ).有研究证实ADAR1在肿瘤组织中表达较正常组织高,而且在造血过程中能够阻止细胞凋亡,这些都提示了ADAR1与人类肿瘤的形成有关.本研究在人宫颈癌细胞系Hela细胞中证明ADAR1通过抑制内源性凋亡途径促细胞存活. 方法:本研究利用脂质体转染将ADAR1(Human)shRNA干扰载体瞬时转入Hela细胞中,以shRNA空载体作为对照,在给予化疗药阿霉素(Adramycin,ADR)刺激不同时间点后,提取实验组及对照组Hela细胞的总RNA及细胞总蛋白裂解液,利用RT-PCR、WestemBlot等分子生物学方法进行凋亡相关基因Bcl2及Akt表达的检测.同时检测内源性凋亡相关因子Caspase3、7的活性,并利用MTT实验检测Hela细胞的存活情况. 结果:在实验组中Hela细胞ADAR1基因表达明显下调;在给予化疗药刺激后,实验组ADAR1较对照组的表达有明显下调,而且内源性凋亡相关基因Bcl2及Akt的表达也随之下调,凋亡相关因子Caspase3、7的活性明显升高;MTT实验结果显示实验组中Hela细胞的存活率明显低于对照组(P＜ 0.01). 结论:上述实验结果在细胞水平证明了ADAR1在人类宫颈癌Hela细胞中通过抑制内源性凋亡途径,促进肿瘤细胞存活.

关键词：宫颈癌海拉细胞核糖核酸特异腺苷脱氨酶1 内源性凋亡细胞存活

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应用Dicer转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究

应用Dicer转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究

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中国北方第十三届实验动物科技年会

作者：李兆阳姜川杨葳董婉维郑志红中国医科大学实验动物部辽宁省转基因研究重点实验室 110001

目的:应用Dicer转基因小鼠建立黑色素瘤模型.方法:将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer转基因鼠和C57BL/ 6J小鼠前肢腋下,观察两种小鼠的荷瘤情况,包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线.结果:与C57BL/ 6J小鼠组肿瘤比较,Dicer转基因小... 详细信息

目的:应用Dicer转基因小鼠建立黑色素瘤模型.方法:将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer转基因鼠和C57BL/ 6J小鼠前肢腋下,观察两种小鼠的荷瘤情况,包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线.结果:与C57BL/ 6J小鼠组肿瘤比较,Dicer转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体积大(P＜0.05).结论:本研究应用Dicer转基因小鼠建立黑色素瘤模型,结果显示Dicer基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响,为进一步研究Dicer在黑色素瘤发生和发展中的作用奠定了基础.

关键词：黑色素瘤发病机制核糖核酸内切酶转基因

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体外受精-胚胎移植技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用

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实验动物与比较医学 2014年第2期34卷 140-144页

作者：吕相川张婀娜周生来王惟于洋郑志红中国医科大学实验动物部辽宁省转基因研究重点实验室沈阳110001

目的研究体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用.方法分别应用自然交配与体外受精方法进行APP/PSl双转基因繁育,比较受精率及产仔数量;腹腔注射PMSG-HCG超排雌性C57BL/6小鼠,分别与12周龄、24周龄、36周... 详细信息

目的研究体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用.方法分别应用自然交配与体外受精方法进行APP/PSl双转基因繁育,比较受精率及产仔数量;腹腔注射PMSG-HCG超排雌性C57BL/6小鼠,分别与12周龄、24周龄、36周龄、52周龄、72周龄的成年雄性APP/PSl双转基因小鼠进行体外受精,将获得的2-细胞胚胎移植到假孕雌鼠的输卵管,通过PCR方法对仔代小鼠进行鉴定.结果 6只雄性转基因小鼠与18只野生型雌性小鼠自然方式交配,实验周期为21d,获得胚胎的受精率为73.3％.应用体外受精的方法用1只雄性转基因小鼠的精子与18只雌性野生型小鼠的胚胎进行体外受精,受精率达到95％,实验周期为4d.两种繁育方式产仔数量阳性生小鼠数量有显著差异（P＜0.05）,阳性生率无显著性差异（P＞0.05）. 12周龄、24周龄、36周龄的APP/PSl转基因雄性小鼠的体外受精结果显示,三种不同周龄的雄性APP/PS1转基因小鼠受精率、产仔数量及阳性率均无显著性差异（P＞0.05）.对应用常规繁育方法难以获得后代的老龄APP/PS1双转基因雄性小鼠（52周龄、72周龄）体外受精率分别为85.6％、84.1％,获得阳性后代18只和14只.结论 APP/PS1双转基因小鼠可以采用IVF-ET技术进行繁育,为APP/PS1双转基因小鼠快速扩大繁育提供一种新方式.

关键词：小鼠体外受精-胚胎移植(IVF-ET) 阿尔兹海默病扩大繁育

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