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解剖学报 2020年第1期51卷 128-131页

作者：赵宇范军柏树令中国医科大学附属盛京医院整形美容外科沈阳110004 中国医科大学公共基础学院组织工程教研室沈阳110122

目的通过为人体吸脂来源的脂肪组织脱细胞,评估脱细胞脂肪组织的组织学成分,探讨其作为组织工程支架材料的可能性。方法采用改良的脱细胞方法为5例人吸脂来源的脂肪组织脱细胞,观察制备过程的大体形态,对脱细胞脂肪进行HE染色、Masson... 详细信息

目的通过为人体吸脂来源的脂肪组织脱细胞,评估脱细胞脂肪组织的组织学成分,探讨其作为组织工程支架材料的可能性。方法采用改良的脱细胞方法为5例人吸脂来源的脂肪组织脱细胞,观察制备过程的大体形态,对脱细胞脂肪进行HE染色、Masson染色、Gomori染色、油红O染色、DAPI染色,并对脱细胞组织中残留的DNA、胶原蛋白及糖胺聚糖含量进行定量检测。结果本实验制备的脱细胞脂肪,外观呈不透明的乳白色,无固定形态。HE染色和DAPI染色无可见细胞成分残留,Masson染色可见胶原纤维,Gomori染色可见网状纤维存在,油红O染色无可见脂质残留。组织中残留的DNA含量微小,胶原和糖胺聚糖含量均有所保留。结论应用结合物理化学和酶学的脱细胞方法,可以为人体的吸脂来源脂肪组织脱细胞,得到的脱细胞组织去除了脂肪组织中的细胞及脂质成分,保留了脂肪组织细胞外基质的组成成分。

关键词：脂肪组织脱细胞支架细胞外基质组织学染色人

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脂肪干细胞对糖尿病肾病大鼠氧化应激反应的抑制作用

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解剖学杂志 2013年第5期36卷 896-900页

作者：房艳柏树令田晓红曾瑞霞单伟辽宁医学院解剖学教研室锦州121001 中国医科大学组织工程学教研室沈阳110001

目的：探讨脂肪干细胞（ADSCs）对糖尿病肾病大鼠氧化应激反应的抑制作用。方法：原代培养大鼠ADSCs，观察细胞形态，检测表面抗原。糖尿病肾病大鼠经尾静脉注射荧光标记的自体ADSCs，检测肾功指标，观察ADSCs在肾组织的分布及肾病理改... 详细信息

目的：探讨脂肪干细胞（ADSCs）对糖尿病肾病大鼠氧化应激反应的抑制作用。方法：原代培养大鼠ADSCs，观察细胞形态，检测表面抗原。糖尿病肾病大鼠经尾静脉注射荧光标记的自体ADSCs，检测肾功指标，观察ADSCs在肾组织的分布及肾病理改变；测定肾组织氧化应激产物丙二醛及蛋白羰基含量，免疫印迹检测MnSOD和CuZnSOD的表达水平。结果：大鼠ADSCs类似成纤维细胞，呈旋涡状生长，高表达间充质干细胞标记CD90、CD44，内皮细胞标记CD31阴性，另外，CIN9d低表达，CD106阴性；ADSCs移植后糖尿病肾病大鼠的肾功生化指标明显恢复，肾组织内可见发红色荧光的ADSCs，病理形态明显改善，丙二醛、蛋白羰基含量及MnSOD、CuZnSOD表达量明显下调。结论：ADSCs可以通过抑制氧化应激反应治疗改善大鼠糖尿病肾病。

关键词：脂肪干细胞糖尿病肾病氧化应激

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低氧诱导因子1α在继发性脊髓损伤中的时序性表达及意义

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中国修复重建外科杂志 2011年第1期25卷 91-95页

作者：牛庆飞贾长青王楠陈晓春赤仁杰柏树令沈阳医学院奉天医院骨外科沈阳110024 中国医科大学附属盛京医院脊柱关节外科中国医科大学组织工程教研室

目的通过观察大鼠继发性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)中低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor lα,HIF-lα)的表达规律,探讨其在继发性SCI发生、发展过程中的作用。方法 SD大鼠66只,雌雄不限,体重(250±20)g,随机分为正... 详细信息

目的通过观察大鼠继发性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)中低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor lα,HIF-lα)的表达规律,探讨其在继发性SCI发生、发展过程中的作用。方法 SD大鼠66只,雌雄不限,体重(250±20)g,随机分为正常对照组(A组,6只)、假损伤组(B组,6只)和SCI组(C组,54只)。A组不作任何处理;B组大鼠仅行椎板切除术;C组大鼠在椎板切除术后采用脊髓静压法建立T10静压SCI模型。A、B组于术后1h,C组于术后1、3、6、12h及1、2、3、7、14d各处死6只大鼠,取损伤区脊髓组织行HE染色,采用SABC法行免疫组织化学染色观察各组HIF-1α阳性表达情况并计数。结果各组动物均存活至实验完成。HE染色示,A、B组脊髓组织结构致密,细胞核圆而大、染色浅、核仁清晰。C组术后1～12h,损伤局部神经元核固缩,胞体缩小,胞质深伊红染色;1～3d,轴突肿胀,出现空泡,白质内神经髓鞘散乱、崩解破裂;7、14d,胶质细胞增生明显,损伤段脊髓变细,部分灰质崩解坏死,可见囊腔形成。免疫组织化学染色示,A组HIF-1α阳性细胞少,B组稍增多。C组术后1、3h,HIF-1α阳性产物开始增多,主要在脊髓前角神经元和少量胶质细胞中表达;术后1d达峰值,1～3d维持较高水平,此后逐渐减少;14d时仅可见少量白质中的胶质细胞。A、B组间HIF-1α阳性细胞数比较差异无统计学意义(t=1.325,P=0.137)。C组各时间点HIF-1α阳性细胞数均高于A、B组(P<0.05),C组各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SCI后HIF-1α表达开始升高,与继发性SCI缺血缺氧密切相关,其表达规律与损伤时间具有相关性。

关键词：低氧诱导因子1α 继发性脊髓损伤缺血缺氧大鼠

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姜黄素对大鼠胸主动脉瘤JNK信号通路的影响

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解剖学杂志 2013年第1期36卷 33-34页

作者：范军柏树令田晓红阎亚伟侯伟健佟浩中国医科大学基础医学院组织工程教研室沈阳110001

目的：探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中JNK信号的影响。方法：成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙（CaCl2）诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。H-E染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改... 详细信息

目的：探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中JNK信号的影响。方法：成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙（CaCl2）诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。H-E染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变;免疫组织化学检测动脉瘤壁p-JNK和p-c-Jun的表达。结果：姜黄素可明显抑制胸主动脉的扩张。与对照组比较,动脉瘤组p-JNK和p-c-Jun表达水平明显升高,而姜黄素能有效抑制动脉瘤中JNK和cJun的磷酸化。结论：姜黄素抑制胸主动脉瘤的发展有可能与其抑制JNK信号相关。

关键词：姜黄素 JNK 胸主动脉瘤免疫组织化学大鼠

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bulge区毛囊组织块培养结合酶消化法分离大鼠毛囊隆突部细胞的生物学特征

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第20期12卷 3806-3809页

作者：王慧君柏树令田伟佟浩中国医科大学基础医学院组织工程学教研室辽宁省沈阳市110001

背景：目前毛囊隆突部细胞的分离培养方法多存在细胞分离纯度不高、活力差等缺点，采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞能否克服上述缺点？目的：本实验采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞并对其进行鉴定... 详细信息

背景：目前毛囊隆突部细胞的分离培养方法多存在细胞分离纯度不高、活力差等缺点，采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞能否克服上述缺点？目的：本实验采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞并对其进行鉴定。设计、时间及单位：单一样本设计，体外细胞培养实验。于2007—03／08在中国医科大学组织工程学实验室完成。材料：选用15只雌性Wistar大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供。实验用表皮生长因子、Hoechst33342购白美国Sigma公司，SAB-小鼠IgG抗体免疫组化试剂盒、SABC—Cy3免疫荧光组织化学试剂盒、DAB显色剂、SABC—FITC免疫荧光组化试剂盒均购白武汉博士德公司。方法：利用显微分离的方法将大鼠触须部皮肤分离，剪开真皮和皮下组织，将毛囊与周围组织钝性分离取出毛囊，剪开结缔组织鞘，用显微外科镊取出毛囊外根鞘bulge区，移入培养板中进行组织块培养，应用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化分离大鼠毛囊bulge区细胞，倒置相差显微镜下观察其增殖能力，免疫荧光法检测毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达情况。主要观察指标：①大鼠隆突部细胞增殖能力。②毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达。结果：①大鼠隆突部细胞胞体积较大，胞核大，核仁明显，细胞生长迅速，活力好，3-4d即可传代，具有增殖能力强、细胞纯度高等特性。②细胞免疫荧光结果显示培养的细胞胞浆角蛋白15阳性，细胞的胞膜β1整合索阳性，细胞的胞核P63阳性。结论：组织块法结合酶消化法可成功分离培养毛囊隆突部细胞，细胞可同时表达K15、β1整合索和P63，纯度高，活力好。

关键词：毛囊隆突部细胞生物学特性纯度

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亚健康状态与人体形态学分析

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解剖学杂志 2009年第4期32卷 566-567页

作者：柏树令曹师承刘彩霞田晓红中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室沈阳110001 中国医科大学运动医学基础教研室沈阳110001 中国医科大学盛京医院核医学科沈阳110001 中国医科大学组织工程学教研室沈阳110001

亚健康状态（rabhealth riatus）是近年来提出的新名词，是指人体器官疾病前介于健康与疾病之间的一种临界状态。是疾病前的代偿过渡阶段，是由健康体魄转向疾病生长的相对漫长的移行期。临床流行病学资料显示，亚健康状态既有某些疾病... 详细信息

亚健康状态（rabhealth riatus）是近年来提出的新名词，是指人体器官疾病前介于健康与疾病之间的一种临界状态。是疾病前的代偿过渡阶段，是由健康体魄转向疾病生长的相对漫长的移行期。临床流行病学资料显示，亚健康状态既有某些疾病信号的预警和表露，又查不出人体功能的明显障碍和形态学上的显著改变。

关键词：亚健康状态人体形态健康与疾病学分流行病学资料临界状态人体器官疾病信号

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黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

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中药药理与临床 2015年第2期31卷 7-10页

作者：杨岳王阳杨景兰王佐周侯伟健中国医科大学3组织工程学教研室沈阳110001 辽河油田总医院盘锦124000

目的:探讨黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制。方法:将培养7~9天大鼠海马细胞随机分为对照组、黄芪甲苷组、谷氨酸损伤组、黄芪甲苷预处理组。采用噻唑蓝法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含量,... 详细信息

目的:探讨黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制。方法:将培养7~9天大鼠海马细胞随机分为对照组、黄芪甲苷组、谷氨酸损伤组、黄芪甲苷预处理组。采用噻唑蓝法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含量,流式细胞仪测定细胞凋亡率;2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠探针法检测细胞中活性氧的水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中8-羟基脱氧鸟苷的含量。结果:0.1 mmol/L谷氨酸作用于海马神经元24小时后,细胞存活率下降、培养液中乳酸脱氢酶含量、细胞凋亡率、细胞中活性氧的水平及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量均明显升高。于损伤前加入黄芪甲苷(0.08,0.40,2.00mg/L)孵育30 min可以不同程度提高细胞存活能力,减少乳酸脱氢酶的漏出,降低细胞凋亡率和上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量,但以0.40,2.00 mg/L黄芪甲苷预处理组效果更明显。单纯黄芪甲苷组存活率、细胞凋亡率与正常对照组相比无显著差异,但细胞中活性氧的水平以及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量明显降低。结论:黄芪甲苷预处理能减轻谷氨酸诱导的海马神损伤,其机制可能与其抗氧化有关。

关键词：黄芪甲苷谷氨酸海马凋亡

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piRNA-PIWI通路作为肿瘤治疗靶点研究进展

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中华肿瘤防治杂志 2013年第23期20卷 1855-1858页

作者：陈取田晓红柏树令中国医科大学基础医学院辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院组织工程学教研室辽宁沈阳110001

目的:总结piRNA-PIWI通路研究现状,归纳piRNA靶点和该通路的抑制方法。方法:在PubMed全文数据库检索系统中,以"piRNA、PIWI、合成、小分子药物和肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)"作为关键词,检索2005-05-2013-06的相关文献97... 详细信息

目的:总结piRNA-PIWI通路研究现状,归纳piRNA靶点和该通路的抑制方法。方法:在PubMed全文数据库检索系统中,以"piRNA、PIWI、合成、小分子药物和肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)"作为关键词,检索2005-05-2013-06的相关文献97篇,其中,中文文献90篇,英文文献7篇。纳入标准:1)piRNA-PIWI的合成与工作机制;2)piRNA-PIWI通路在TSC发生发展过程中的作用;3)已知的靶点piRNA与该通路的抑制方法。根据纳入标准符合分析的文献38篇。结果:piRNA-PIWI通路通过沉默转座子与调节基因表达而影响干细胞功能。piRNA-PIWI通路在TSC中高表达,在肿瘤发生发展中抑制凋亡通路、提高耐药性、扰乱miRNA系统、维持TSC的干性与过度甲基化。使用甲基化酶抑制剂与热休克蛋白90抑制剂可以抑制piRNA-PIWI通路。结论:piRNA-PIWI通路可以作为抗肿瘤治疗的新靶点。

关键词： piRNA PIWI 合成小分子药物肿瘤干细胞综述文献

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成骨细胞与镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层的体外相容性

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解剖学报 2011年第1期42卷 65-69页

作者：左林柏树令潘锋佟浩田晓红张二林杜辉中国医科大学组织工程研究所中国医科大学人体解剖学教研室中国科学院沈阳金属研究所沈阳110001

目的评价成骨细胞在镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层上的生长状况,探讨镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层与成骨细胞的生物相容性。方法用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和茜素红染色法进行鉴定;然后将第4代大鼠的成骨... 详细信息

目的评价成骨细胞在镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层上的生长状况,探讨镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层与成骨细胞的生物相容性。方法用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和茜素红染色法进行鉴定;然后将第4代大鼠的成骨细胞接种于材料表面,用扫描电镜观察成骨细胞在不同表面上黏附形态的变化,同时制备材料浸提液,用浸提液法培养细胞,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法和碱性磷酸酶(ALP)活性法检测成骨细胞的增殖和分化情况。结果将成骨细胞与材料进行复合培养后,扫描电镜下可见,涂层组的成骨细胞生长活力旺盛、形态饱满、分布均匀,而单纯镁合金组未见细胞生长;MTT和ALP活性分析结果显示,硅含量为1%～5%涂层对大鼠成骨细胞的体外生长、增殖和分化的促进作用最佳。结论镁合金表面硅酸盐-磷酸盐涂层与成骨细胞具有良好的相容性,在体外培养的环境下,有利于细胞的生长、黏附、增殖和分化。

关键词：成骨细胞镁合金硅酸盐一磷酸盐复合涂层相容性免疫荧光法

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组织工程小血管支架应用于异种血管移植的可行性

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中国组织工程研究 2009年第38期13卷 7429-7432页

作者：陈华勇柏树令崔春兰延边大学基础医学院解剖学与组织胚胎学教研室中国医科大学组织工程教研部

背景:具有α半乳糖基末端的糖蛋白是引起超急性排斥反应的主要异种抗原。目的:观察脱细胞小血管支架与Wistar大鼠和日本大耳白兔两种种属实验动物血管壁内皮细胞和平滑肌细胞内α半乳糖基的分布特点,探讨经脱细胞处理后的小血管支架应... 详细信息

背景:具有α半乳糖基末端的糖蛋白是引起超急性排斥反应的主要异种抗原。目的:观察脱细胞小血管支架与Wistar大鼠和日本大耳白兔两种种属实验动物血管壁内皮细胞和平滑肌细胞内α半乳糖基的分布特点,探讨经脱细胞处理后的小血管支架应用于异种血管移植的可行性。设计、时间及地点:观察对比实验,于2003-03/2004-12在中国医科大学解剖学教研室完成。材料:采集Wistar大鼠正常尾动脉30条,其中选择15条进行脱细胞处理得小血管支架(小血管支架组),剩余15条未进行脱细胞处理(尾动脉组);采集日本大耳白兔耳背面中央动脉,左右耳各1条,共取15条(中央动脉组)。方法:采用亲和组织化学法,将16mg/L植物凝集素加入组织片作DAB显色后,利用MetaMorth/C5050/BX41显微图像分析系统,检测α半乳糖基阳性反应产物。主要观察指标:光镜下血管壁细胞显色变化;α半乳糖基阳性反应产物的吸光度值。结果:中央动脉组α半乳糖基的表达主要集中于内皮细胞膜和细胞核;尾动脉组内皮细胞膜α半乳糖基表达呈极强阳性;小血管支架组呈弱阳性或阴性表达。3组血管细胞α半乳糖基表达的吸光度值中,尾动脉组内膜低于中央动脉组(P<0.001);小血管支架组内膜低于中央动脉组、尾动脉组(P<0.001);小血管支架组中膜低于中央动脉组、尾动脉组(P<0.001)。结论:①Wistar大鼠尾动脉内皮细胞膜异种抗原性比日本大耳白兔中央动脉的抗原性强。②Wistar大鼠脱细胞的尾动脉支架可作为异种组织工程血管材料应用于异种血管移植。

关键词：异种血管 α半乳糖基

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