检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学杂志 2016年第6期39卷 768-769页

作者：田晓红柏树令敖强侯伟建范军佟浩徐赫中国医科大学公共基础学院组织工程学教研室

组织工程学作为一门新兴的边缘学科和交叉学科，从1987年美国国家科学基金会正式确立这一概念到现在已经有近30年的发展历程。这期间组织工程学的发展经历了量的积累到质的飞跃，相关的研究论文呈井喷之势增长，截止到2015年10月底，Pub... 详细信息

组织工程学作为一门新兴的边缘学科和交叉学科，从1987年美国国家科学基金会正式确立这一概念到现在已经有近30年的发展历程。这期间组织工程学的发展经历了量的积累到质的飞跃，相关的研究论文呈井喷之势增长，截止到2015年10月底，Pubmed上可检索到118000多篇研究报道。此外，组织工程皮肤、角膜等产品的获批和上市为成千上万的患者带来了希望和福音，并极大地鼓舞了研究者的信心。笔者就这些年本教研室的教学方式和方法改革进行了总结。

关键词：组织工程学教学方式中国医科大学 Pubmed 组织工程皮肤交叉学科边缘学科研究论文

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经超顺磁性氧化铁标记的自体BMSCs在兔椎间盘内存活时间研究

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中国修复重建外科杂志 2009年第11期23卷 1355-1359页

作者：谭树森贾长青刘振宁刘瑞端杨杰张磊寿奋勇鞠晓军中国医科大学附属盛京医院骨科沈阳110001 中国医科大学组织工程学研究室

目的观察超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的自体BMSCs在兔椎间盘内的存活时间,为后期采用转染成功的BMSCs预防椎间盘退变提供依据,并观察其迁移规律。方法8～10周龄日本大耳白兔12只,雌雄不限,体重1.5～2.0kg,取... 详细信息

目的观察超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的自体BMSCs在兔椎间盘内的存活时间,为后期采用转染成功的BMSCs预防椎间盘退变提供依据,并观察其迁移规律。方法8～10周龄日本大耳白兔12只,雌雄不限,体重1.5～2.0kg,取4mL骨髓密度梯度离心法行BMSCs分离、培养。取第3代BMSCs(1×106个)用SPIO(25μg/mL)标记,普鲁士蓝铁染色检测标记效率,透射电镜观察标记细胞,锥虫蓝染色鉴定标记细胞活力,MTT法测定标记细胞及未标记细胞增殖,并绘制生长曲线。将12只兔随机分为实验组(n=8)和对照组(n=4),分别于L1、2、L2、3、L3、4、L4、5注入标记和未标记自体BMSCs悬液20μL(细胞浓度均为5×105个/mL),术后2、4、6、8周实验组和对照组分别取2只和1只动物处死,取相应椎间盘行普鲁士蓝铁染色观察细胞是否存活以及分布。结果第3代BMSCs经SPIO标记后,普鲁士蓝铁染色标记效率为95.65%±1.06%;透射电镜观察示细胞质内有电子高密度铁颗粒;锥虫蓝染色示细胞活力为98.28%±0.85%;MTT检测显示7d内未标记细胞组和标记细胞组间细胞增殖比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组细胞移植术后8周,仍可观测到位于细胞质内的蓝染颗粒。对照组未见蓝染颗粒。结论SPIO可以安全、有效地标记BMSCs,并能在体内持续存活8周。

关键词： BMSCs 超顺磁性氧化铁标记细胞移植细胞迁移椎间盘退变兔

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纳米“羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖”材料复合骨髓间充质干细胞修复小鼠胫骨缺损

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解剖学报 2013年第3期44卷 386-392页

作者：李阳房艳柏树令田晓红佟浩侯伟健中国医科大学组织工程学教研室沈阳110001

目的应用纳米级材料"羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖"复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复小鼠胫骨5mm的缺损,探讨其对长骨缺损的修复效果。方法原代分离培养小鼠BMSCs,进行干细胞相关生物学特性检测。制备纳米级材料羟基磷灰石-胶... 详细信息

目的应用纳米级材料"羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖"复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复小鼠胫骨5mm的缺损,探讨其对长骨缺损的修复效果。方法原代分离培养小鼠BMSCs,进行干细胞相关生物学特性检测。制备纳米级材料羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖的新型复合材料,扫描电子显微镜下观察材料结构,检测支架材料的孔隙率、降解率。制备小鼠胫骨5mm离断性缺损模型30只,分3组进行骨修复,每组10只:A组(纳米羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖材料复合BMSCs);B组(单纯纳米羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖材料);C组(单一纳米级羟基磷灰石复合BMSCs)。于8周时各组动物麻醉并取材,HE染色观察缺损区成骨情况,X线检测骨修复情况。结果原代分离的BMSCs具有成纤维细胞形态,表达间充质干细胞的表面标记,符合干细胞的生物学特性。制备的纳米级羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖支架具有丰富的孔隙,支架内部孔隙间有广泛的交通,孔隙大小均匀,直径为100～200μm,孔隙率72.3%～92.7%之间,平均为82.5%左右,支架降解率为(60.3±5.4)%。修复8周后,A组可见支架材料大部分降解,无炎性反应,并见大量成熟板层骨样结构。X线评分显示A组在缺损区可见新生骨痂且新骨密度增高,形成骨桥并与两端桥接,而B、C组效果不理想,与A组相比差异明显(P<0.01)。结论纳米级材料"羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖"复合BMSCs对于小鼠胫骨骨缺损修复效果良好。

关键词：骨髓间充质干细胞羟基磷灰石胶原蛋白壳聚糖骨缺损扫描电子显微镜小鼠

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小鼠骨髓基质干细胞与脱细胞基质骨联合培养的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 124-126页

作者：董鸿铭柏树令中国医科大学组织工程研究室沈阳110001

目的　研究小鼠股骨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)在同种异体脱细胞基质骨(acellular extra cellular matrix,AECM)上的生长情况。　方法　昆明种小鼠 8只共 16侧股骨 ,用 Triton X- 10 0处理后获 AECM。另将 1月龄... 详细信息

目的　研究小鼠股骨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)在同种异体脱细胞基质骨(acellular extra cellular matrix,AECM)上的生长情况。　方法　昆明种小鼠 8只共 16侧股骨 ,用 Triton X- 10 0处理后获 AECM。另将 1月龄昆明种小鼠 2 0只双侧股骨切断 ,用 4 ml PBS反复冲洗骨髓腔后 ,离心分瓶 ,取 MSCs进行原代培养 ,以 5× 10 6 /ml浓度将原代培养的小鼠 MSCs种植于 AECM中 ,进行体外联合培养 7d,通过相差显微镜、光镜、电镜等方法观察细胞在材料中的生长情况。　结果　在 AECM的孔隙中 ,有成团蓝染的 MSCs核团 ,周边部分大于中间部分 ,且靠近细胞培养液层面的 AECM中蓝染的核团数量明显比远离细胞培养液的层面多。 AECM具有良好的孔隙率 ,MSCs可在 AECM上良好生长。　结论　 AECM可作为构建组织工程骨的一种较好的支架材料。

关键词：小鼠脱细胞基质股骨骨髓基质干细胞联合培养原代培养 MSC 细胞培养液昆明支架材料

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兔耳前边缘静脉的类内皮细胞扫描电镜结构

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解剖学报 2006年第2期37卷 208-210页

作者：陈华勇柏树令王军朱小兵刘月华中国医科大学组织工程学教研室中国医科大学第二电镜室

目的观测新发现的兔耳前边缘静脉类内皮细胞扫描电镜结构。方法取日本大耳白兔耳前边缘静脉,常规制备扫描电镜样本,对新发现的类内皮细胞结构做扫描电镜观察。结果在兔耳前边缘静脉内皮细胞与基膜之间存在类似内皮细胞样结构,分布于血... 详细信息

目的观测新发现的兔耳前边缘静脉类内皮细胞扫描电镜结构。方法取日本大耳白兔耳前边缘静脉,常规制备扫描电镜样本,对新发现的类内皮细胞结构做扫描电镜观察。结果在兔耳前边缘静脉内皮细胞与基膜之间存在类似内皮细胞样结构,分布于血管干和属支开口处。每个类内皮细胞呈椭圆形或树叶状,最大长径(8.32±1.04)μm,最大宽径为(5.79±0.68)μm,长径/宽径比值为1.45±0.22,其长轴与血管纵轴呈平行排列。细胞之间以线状结构相连成“串珠”样,且线状结构将细胞压成凹陷或其末端嵌入细胞内;相邻两个细胞间的线长(6.41±2.45)μm。结论兔耳前边缘静脉内膜含有类内皮细胞结构;以线状结构相连也是细胞间连接方式之一。

关键词：耳边缘静脉内皮细胞细胞连接扫描电镜术兔耳

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Wistar大鼠成骨细胞体外分离、培养及初步研究

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解剖学报 2004年第3期35卷 277-281页

作者：田伟柏树令中国医科大学组织工程学研究室沈阳110001

目的　研究体外分离、培养的Wistar大鼠成骨细胞的生物学物性。　方法　取Wistar大鼠双侧股骨 ,用胰酶冷热交替消化法收集细胞 ,以 1× 10 6 ml的细胞浓度培养 ,2周后得到贴壁生长的单层细胞。随后进入传代培养 ,通过倒置显微镜观... 详细信息

目的　研究体外分离、培养的Wistar大鼠成骨细胞的生物学物性。　方法　取Wistar大鼠双侧股骨 ,用胰酶冷热交替消化法收集细胞 ,以 1× 10 6 ml的细胞浓度培养 ,2周后得到贴壁生长的单层细胞。随后进入传代培养 ,通过倒置显微镜观察、HE染色、碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原检测等手段对所获得的细胞进行生物学特性研究。　结果　获得的细胞呈多种形态 ,有长短不一、粗细不均 ,互相连接的胞浆突起 ,细胞互相重叠呈复层生长 ,并形成细胞结节。细胞经连续传代 ,形态与功能不变。细胞富含碱性磷酸酶活性 ,Ⅰ型胶原染色阳性 ,这与典型成骨细胞的生物学特性相似。　结论　用骨组织在体外能培养出成骨细胞 ,可作为骨组织工程体外构建的种子细胞。

关键词：骨组织工程成骨细胞体外培养生物学特性大鼠

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骨脱细胞后的有机成分分析

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中国修复重建外科杂志 2003年第5期17卷 422-424页

作者：王昊柏树令中国医科大学组织工程学教研室沈阳110001

目的　探讨脱细胞骨细胞外基质 (AECM)的制备 ,并对其进行有机成分分析。　方法　采用低渗和除垢剂脱细胞方法制备 AECM。使用 HE、Mallory- Heidenhain氏快速一步法染色和阿利新蓝染色观察形态学改变 ;免疫组织化学检测纤维连接蛋白 (... 详细信息

目的　探讨脱细胞骨细胞外基质 (AECM)的制备 ,并对其进行有机成分分析。　方法　采用低渗和除垢剂脱细胞方法制备 AECM。使用 HE、Mallory- Heidenhain氏快速一步法染色和阿利新蓝染色观察形态学改变 ;免疫组织化学检测纤维连接蛋白 (FN)和层连接蛋白 (L N)。　结果　HE、Mallory- Heidenhain氏快速一步法染色后镜下可见AECM胶原纤维排列规则 ,骨陷窝空虚 ;阿利新蓝染色可见 AECM骨陷窝周边染色呈不同程度蓝绿色 ;免疫组织化学染色可见 FN和 L N的抗体染色阳性部位在细胞外基质 (ECM)。　结论　低渗和除垢剂二步法脱细胞是 AECM制备的有效方法。脱细胞过程中去除了细胞成分 ,保留了天然的胶原纤维分布及 ECM主要支架成分蛋白多糖、FN和 L N。

关键词：骨脱细胞脱细胞骨细胞外基质制备有机成分分析纤维连接蛋白层连接蛋白免疫组织化学

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人脱细胞羊膜复合脂肪源性干细胞修复大鼠全层皮肤缺损的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2010年第2期24卷 143-149页

作者：鞠晓军潘锋柏树令田晓红佟浩王军中国医科大学人体解剖学教研室沈阳110001 中国医科大学组织工程学教研室沈阳110001

目的人脱细胞羊膜(human acellular amniotic membrane,HAAM)含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,这些成分能为细胞增殖、分化提供丰富营养。研究HAAM与脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的生物相容性... 详细信息

目的人脱细胞羊膜(human acellular amniotic membrane,HAAM)含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,这些成分能为细胞增殖、分化提供丰富营养。研究HAAM与脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的生物相容性,探讨HAAM复合ADSCs构建真皮替代物修复全层皮肤缺损的可能性。方法取健康4月龄SD大鼠30只,雌雄不限,体重250～300g,于腹股沟处获取脂肪行ADSCs体外分离、培养和传代;取第3代细胞行HE染色及CD44、CD49d、CD34免疫细胞化学染色鉴定。应用物理和酶消化法处理自愿捐赠的人羊膜获得HAAM,行HE染色观察细胞是否脱除干净,扫描电镜观察HAAM结构特征。将第3代ADSCs以2×105个/cm2密度接种于HAAM上皮面,体外共培养1～5d后分别行扫描电镜和MTT检测,不加材料组设为对照组。将大鼠随机分为3组,每组10只,建立背部直径为2cm的全层皮肤缺损模型。A组创面植入复合ADSCs的HAAM,B组植入单纯HAAM,C组常规包扎。术后行大体观察,于术后1、2、4周计算创面愈合率,并取创面皮肤行HE染色和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)免疫组织化学染色观察。结果HE染色示第3代ADSCs呈梭形,胞核为椭圆形,位于细胞中央;免疫细胞化学染色示第3代ADSCs表达CD44和CD49d,不表达CD34。HAAM行HE染色未见细胞残留;扫描电镜下见HAAM两面具有不同的三维结构,上皮面为较致密的网状纤维;基质面为较稀疏的胶原纤维,未见纤维发生融合、断裂和降解。ADSCs-HAAM复合培养3d后扫描电镜下可见细胞生长状态良好,胞体肥大呈梭形隆起,胞膜外绒毛致密略有弯曲,胞体下方形成丰富的伪足牢固黏附于HAAM上;培养1～5d,MTT检测示实验组和对照组吸光度值比较差异无统计学意义(P>0.05)。移植术后1、2、4周,A组创面愈合率均高于B、C组,B组高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色示A组创面愈合速度快于B、C组;A组CK19表达亦明显高于B、C组。结论HAAM复合ADSCs构建真皮替代物对大鼠全层皮肤损具有良好的促愈合作用。

关键词：组织工程皮肤人脱细胞羊膜脂肪源性干细胞皮肤缺损创面愈合大鼠

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XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

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解剖学报 2014年第2期45卷 190-195页

作者：田晓红侯伟健柏树令范军佟浩徐赫中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早... 详细信息

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。

关键词： XAV939 神经母细胞瘤 Wnt β-catenin信号通路免疫印迹法人

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RNA干扰介导的端锚聚合酶1表达下调诱导人神经母细胞瘤细胞的凋亡

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解剖学报 2014年第2期45卷 196-203页

作者：田晓红柏树令范军侯伟健佟浩徐赫中国医科大学基础医学院组织工程学教研室沈阳110001

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导的端锚聚合酶1(TNKS1)的表达下调对人神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y体外增殖能力和凋亡的影响及机制,为开发治疗NB的新靶点提供一定的实验基础。方法根据TNKS1基因序列,设计合成3个TNKS1基因的特异性短发夹环(s... 详细信息

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导的端锚聚合酶1(TNKS1)的表达下调对人神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y体外增殖能力和凋亡的影响及机制,为开发治疗NB的新靶点提供一定的实验基础。方法根据TNKS1基因序列,设计合成3个TNKS1基因的特异性短发夹环(shRNA)干扰片段,利用慢病毒作为载体,构建目的基因的RNAi序列。慢病毒感染SH-SY5Y细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测TNKS1基因的表达,筛选出最佳干扰序列进行后续实验。然后进行克隆形成实验,检测RNAi-TNKS1后细胞增殖能力的改变。并进一步用Western blotting法检测抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Caspase-3、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达,最后用透射电镜观察凋亡形态的改变,探讨RNAi-TNKS1对细胞凋亡的影响及其作用机制。结果慢病毒载体构建成功,病毒滴度为5×1011TU/L。Real-time PCR检测结果显示,#3 shRNA为最佳的有效靶点。克隆形成实验的结果显示,RNAi-TNKS1后SH-SY5Y细胞的克隆形成率较对照组明显下降。Western blotting结果显示,RNAi-TNKS1可显著抑制Bcl-2蛋白的表达,促进Caspase-3蛋白的表达。此外,Wnt/β-catenin通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达也降低。透射电镜结果显示,RNAi-TNKS1后细胞呈现明显的凋亡结构和形态。结论 RNAi介导的TNKS1的表达下调可降低SH-SY5Y细胞的体外增殖能力,诱导其凋亡,可能部分是通过抑制Wnt/β-catenin通路发挥作用。

关键词： RNA干扰端锚聚合酶1 神经母细胞瘤 Wnt β-catenin信号通路免疫印迹法人

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