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microRNA-223对糖基化终产物诱导人脂肪间充质干细胞凋亡和氧化应激影响的体外研究

中国动脉硬化杂志 2017年第1期25卷 1-6页

作者：王哲张殿宝杨向红中国医科大学盛京医院病理科辽宁省沈阳市110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行... 详细信息

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行检测。将h ADSC分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用组、miR-223模拟物转染组、miR-223模拟物转染+AGE-BSA组、miR-223抑制物转染组和miR-223抑制物转染+AGE-BSA组。应用CCK-8法和TUNEL染色检测各组细胞存活率和凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase3蛋白表达水平,应用双氯荧光素(DCFH-DA)试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)含量。结果流式细胞术检测结果表明,原代培养的h ADSC高表达CD14、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和HLADR。CCK-8法、TUNEL染色、Western blot和DCFH-DA法检测结果表明,与BSA对照组相比,AGE-BSA作用组h ADSC凋亡率、miR-223表达水平、Cleaved Caspase3蛋白表达水平、ROS生成显著升高,而细胞存活率下降(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223模拟物转染能够进一步上调AGE-BSA引起的h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,下调AGE-BSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223抑制物转染能够抑制h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,拮抗AGEBSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05)。结论 miR-223高表达能够促进AGE-BSA引起的h ADSC细胞凋亡和ROS生成,其可能作为调控h ADSC促进糖尿病创伤愈合的新靶点。

关键词：糖基化终产物人脂肪间充质干细胞 microRNA-223 凋亡氧化应激

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王瑞庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs...

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs 的标记;用台盼蓝染色法检测不同浓度的磁纳米颗粒对hADSCs 活性的影响;用荧光显微镜观察磁纳米颗粒作为基因载体时的转染效率;分别用 Real-time PCR 和 Western-blot 检测转染后 REST 、SHH 的表达;用 Real-time PCR 检测hADSCs 共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后胰岛分化相关基因的表达情况.结果：磁性纳米颗粒可以作为基因载体转染细胞;用磁性纳米颗粒作为基因载体后,未标记组活细胞比率为 97.12％,铁浓度为 6 和 8mg/L 活细胞比率分别为96.28％和 96.21％,与未标记组无差异;铁浓度为 10 和 12mg/L 活细胞比率分别为 79.03％和 70.23％,显著低于未标记组;荧光显微镜观察转染效率为71％;磁纳米颗粒作为基因载体时REST RNA表达量为(0.46±0.04),蛋白水平表达量为(0.501±0.006);SHH RNA 表达量为(0.53±0.05),蛋白水平表达量为(0.523±0.004);磁纳米颗粒作为基因载体共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后,通过Real-time PCR 相对定量法检测胰岛分化相关基因的表达,结果显示,insulin、pdx1、pax4、ngn3 的表达都呈不同程度的升高.

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人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王贵玲庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊...

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊膜上皮细胞融合度达90％时,换新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,培养24h 后收集培养液,离心后取上清分装冻存,与新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基1：1 混合后作为条件培养基(conditioned medium,CM),即50％CM.应用孔径为8.0um 的24 孔板transwell 检测细胞迁移,实验组下室放600ml50％HAEC-CM,对照组下室放600ml 新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,上室接种100ul 无血清DMEM/F12 的人成骨细胞hOB1.19 悬液,接种细胞数为1x105,培养2h 后HE 染色,显微镜下拍照计数.

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PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张殿宝李莹苏航王竟施萍庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞...

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞在植入体内后的存活、迁移和分化等进行活体动态监测。本研究探索使用PEI-Fe3O4 纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞,以期为人羊膜上皮细胞的体内示踪提供新的方法和思路。方法：原代培养人羊膜上皮细胞,本研究经中国医科大学第一临床学院伦理委员会审批;使用透射电子显微镜和动态光散射表征PEI-Fe3O4 纳米颗粒;使用纳米颗粒标记原代培养的人羊膜上皮细胞,应用普鲁士蓝染色评价其标记效率;使用台盼蓝染色法和CCK-8 法检测细胞存活率和细胞毒性。结果：PEI-Fe3O4 纳米颗粒呈紧凑的球形,平均粒径为14 nm,水动力学半径为18 nm,zeta电位为+35 mV;浓度大于20 μg/mL 的纳米颗粒能够有效标记人羊膜上皮细胞,镜下可见细胞内着蓝色的纳米颗粒,细胞摄取的纳米颗粒随着浓度的增大而增多,具有浓度依赖性;本研究通过检测纳米颗粒对细胞存活率的影响,评价纳米颗粒标记羊膜上皮细胞的安全性,浓度大于50 μg/mL 的纳米颗粒能够显著降低细胞的存活率,细胞毒性显著高于对照组。结论：PEI-Fe3O4 纳米颗粒可用于标记人羊膜上皮细胞,并且在其工作浓度下未表现出显著的细胞毒性。

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microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：郎宏鑫庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p...

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p 显著差异表达,并通过qRT-PCR 的方法对胚胎早中期和晚期的皮肤样本进行验证.并且通过双荧光素酶报告基因的方法验证microRNA-149-5p 的靶基因.将外源性microRNA-149-5p 的mimics 转染人永生化表皮细胞系(HaCaT),观察其对HaCaT的生物学作用.以及通过与人真皮成纤维细胞共培养检测其对成纤维细胞增殖、迁移以及无瘢痕修复相关基因的表达的情况.结果：人胚胎早中期的皮肤样本中microRNA-149-5p 的表达为晚期的1.8 倍(p＜0.05),并且qRT-PCR 验证此结果.将microRNA-149-5p 与含有IL-1β 3'UTR 的重组质粒报告载体共转染HaCaT,结果显示microRNA-149-5p 可以下调IL-1β 的表达.并且,过表达microRNA-149-5p 可以促进HaCaT 迁移,将转染microRNA-149-5p mimics 的HaCaT 通过与人真皮成纤维细胞共培养后,划痕实验证实且转染mimics 组可以促进成纤维细胞迁移;同时,qRT-PCR 检测到共培养后成纤维细胞中促进皮肤无瘢痕修复的TGFβ-3 和Collagen3表达量升高约1.5 倍(p＜0.05),α-SMA 表达量下降.结论：microRNA-149-5p 可以通过调控其靶基因IL-1β 的表达,而调控成纤维细胞无瘢痕修复相关因子的表达,从而参与皮肤创伤修复的过程.

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人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁移和血管生成的影响

人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：吴倩倩庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充...

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充质干细胞和上皮细胞两类细胞，并通过流式细胞方法进行鉴定.hAECs 或hAMSCs 收集的条件培养基(CDM)用于培养人主动脉内皮细胞(hAoECs)：我们使用细胞划痕实验及Transwell 小室，以评估迁移能力;细胞增殖试剂盒(CCK-8)和细胞周期检测来评估增殖能力;基质胶血管生成实验，以评估血管生成的能力.为了检测血管生成相关基因的表达，使用定量PCR 和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行分析.

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新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作用研究

新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：李莹张殿宝庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可...

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可明显缩短创面愈合时间.MMP14 是一种细胞内激活的膜锚定蛋白，主要成分PEX 与CD44 相互作用形成异二聚体，并引起胞内细胞骨架重排，促进细胞的迁移.MMP14 还可以激活pro-MMP2 增加细胞外基质的降解，引导细胞迁移.

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lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张涛庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、...

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、甚至作为小RNA 的前体等众多生命活动中发挥重要作用.虽然关于lncRNA 的研究进展迅猛,但是绝大部分的lncRNA 的功能仍是不清楚的.目前为止对长链非编码RNA 在表皮分化方面的研究还比较有限.我们通过基因芯片检测了分化前后角质形成细胞中lncRNA 的表达情况,发现6750 个差异表达 lncRNA,其中3217 个 lncRNA 差异表达上调,这些lncRNA 的分类如下：natural antisense lncRNA 占15％,intronic antisense lncRNA 占17％,intron sense-overlapping lncRNA 占3％,intergenic lncRNA 占46％,exon sense-overlapping lncRNA 占11％,bidirectional lncRNA 占8％;3533 个 lncRNA 差异表达下调,这些lncRNA的分类如下：natural antisense lncRNA 占17％,intronic antisense lncRNA 占14％,intron sense-overlapping lncRNA 占5％,intergenic lncRNA 占44％,exon sense-overlapping lncRNA 占13％,bidirectional lncRNA 占7％.我们通过生物信息学初步筛选与分化有关的基因及可能与其互做的lncRNA.对这些lncRNA 进行功能学分析发现,它们参与对角质形成细胞分化的调控.下一步的工作我们将对这些分化相关lncRNA进行细致全面的研究,探索分化的分子机制,这些全新的发现将极大地丰富表皮细胞分化调控的机制,带来对表皮创伤修复的新的治疗策略.

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微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创伤无瘢痕愈合

微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：赵峰庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR...

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR 检测人孕中期(孕28 周前)及孕晚期(孕28 周后)胎儿皮肤KCs 中microRNAs 的表达差异。通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因检测分析及Western blot 探讨seq-915_x4024 的靶基因。通过体外增殖及迁移试验检测过表达seq-915_x4024 后人表皮细胞系HaCaT 及与之共培养的人真皮成纤维细胞(fibroblasts,FBs)增殖及迁移能力的变化。通过实时定量PCR 及Western blot 检测过表达seq-915_x4024 的HaCaT 细胞及与之共培养FBs 分泌细胞外基质能力的变化。

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间充质干细胞的旁分泌作用及其在颅颌面骨再生治疗中的应用研究进展

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中国实用口腔科杂志 2016年第6期9卷 373-378页

作者：王贵玲仇丽鸿庞希宁中国医科大学口腔医学院.附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁沈阳110002 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110122

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)自被发现以来,一直在再生医学中作为理想的种子细胞,利用多向分化的潜能分化为组织细胞,以修复组织缺损。然而近年来人们发现,进入体内的MSCs增殖分化能力有限,其主要是通过旁分泌作用诱导受... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)自被发现以来,一直在再生医学中作为理想的种子细胞,利用多向分化的潜能分化为组织细胞,以修复组织缺损。然而近年来人们发现,进入体内的MSCs增殖分化能力有限,其主要是通过旁分泌作用诱导受体自身细胞的增殖分化,从而实现局部组织的修复再生。现对MSCs的旁分泌作用及其在颅颌面骨再生治疗中的应用做一综述。

关键词：间充质干细胞旁分泌骨再生

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