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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：郎宏鑫庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p...

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p 显著差异表达,并通过qRT-PCR 的方法对胚胎早中期和晚期的皮肤样本进行验证.并且通过双荧光素酶报告基因的方法验证microRNA-149-5p 的靶基因.将外源性microRNA-149-5p 的mimics 转染人永生化表皮细胞系(HaCaT),观察其对HaCaT的生物学作用.以及通过与人真皮成纤维细胞共培养检测其对成纤维细胞增殖、迁移以及无瘢痕修复相关基因的表达的情况.结果：人胚胎早中期的皮肤样本中microRNA-149-5p 的表达为晚期的1.8 倍(p＜0.05),并且qRT-PCR 验证此结果.将microRNA-149-5p 与含有IL-1β 3'UTR 的重组质粒报告载体共转染HaCaT,结果显示microRNA-149-5p 可以下调IL-1β 的表达.并且,过表达microRNA-149-5p 可以促进HaCaT 迁移,将转染microRNA-149-5p mimics 的HaCaT 通过与人真皮成纤维细胞共培养后,划痕实验证实且转染mimics 组可以促进成纤维细胞迁移;同时,qRT-PCR 检测到共培养后成纤维细胞中促进皮肤无瘢痕修复的TGFβ-3 和Collagen3表达量升高约1.5 倍(p＜0.05),α-SMA 表达量下降.结论：microRNA-149-5p 可以通过调控其靶基因IL-1β 的表达,而调控成纤维细胞无瘢痕修复相关因子的表达,从而参与皮肤创伤修复的过程.

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人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁移和血管生成的影响

人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：吴倩倩庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充...

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充质干细胞和上皮细胞两类细胞，并通过流式细胞方法进行鉴定.hAECs 或hAMSCs 收集的条件培养基(CDM)用于培养人主动脉内皮细胞(hAoECs)：我们使用细胞划痕实验及Transwell 小室，以评估迁移能力;细胞增殖试剂盒(CCK-8)和细胞周期检测来评估增殖能力;基质胶血管生成实验，以评估血管生成的能力.为了检测血管生成相关基因的表达，使用定量PCR 和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行分析.

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新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作用研究

新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：李莹张殿宝庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可...

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可明显缩短创面愈合时间.MMP14 是一种细胞内激活的膜锚定蛋白，主要成分PEX 与CD44 相互作用形成异二聚体，并引起胞内细胞骨架重排，促进细胞的迁移.MMP14 还可以激活pro-MMP2 增加细胞外基质的降解，引导细胞迁移.

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lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

lncRNA 调控皮肤角质形成细胞分化

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张涛庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、...

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA.哺乳动物基因组序列中4％-9％的序列产生的转录本是lncRNA(相应的蛋白编码RNA的比例是1％).研究表明,lncRNA 在表观遗传调控、转录调控、细胞分化调控、甚至作为小RNA 的前体等众多生命活动中发挥重要作用.虽然关于lncRNA 的研究进展迅猛,但是绝大部分的lncRNA 的功能仍是不清楚的.目前为止对长链非编码RNA 在表皮分化方面的研究还比较有限.我们通过基因芯片检测了分化前后角质形成细胞中lncRNA 的表达情况,发现6750 个差异表达 lncRNA,其中3217 个 lncRNA 差异表达上调,这些lncRNA 的分类如下：natural antisense lncRNA 占15％,intronic antisense lncRNA 占17％,intron sense-overlapping lncRNA 占3％,intergenic lncRNA 占46％,exon sense-overlapping lncRNA 占11％,bidirectional lncRNA 占8％;3533 个 lncRNA 差异表达下调,这些lncRNA的分类如下：natural antisense lncRNA 占17％,intronic antisense lncRNA 占14％,intron sense-overlapping lncRNA 占5％,intergenic lncRNA 占44％,exon sense-overlapping lncRNA 占13％,bidirectional lncRNA 占7％.我们通过生物信息学初步筛选与分化有关的基因及可能与其互做的lncRNA.对这些lncRNA 进行功能学分析发现,它们参与对角质形成细胞分化的调控.下一步的工作我们将对这些分化相关lncRNA进行细致全面的研究,探索分化的分子机制,这些全新的发现将极大地丰富表皮细胞分化调控的机制,带来对表皮创伤修复的新的治疗策略.

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微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创伤无瘢痕愈合

微小RNA 调控角质形成细胞TGF-β/Smads 信号传导通路促进皮肤创...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：赵峰庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR...

目的：探讨孕早、中期胎儿皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)中特异表达的新微小RNA(microRNA)seq-915_x4024 促进皮肤创伤无瘢痕愈合的机制。为应用microRNA促进皮肤创伤修复提供科学的理论依据。方法：通过小RNA 二代测序及qRT-PCR 检测人孕中期(孕28 周前)及孕晚期(孕28 周后)胎儿皮肤KCs 中microRNAs 的表达差异。通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因检测分析及Western blot 探讨seq-915_x4024 的靶基因。通过体外增殖及迁移试验检测过表达seq-915_x4024 后人表皮细胞系HaCaT 及与之共培养的人真皮成纤维细胞(fibroblasts,FBs)增殖及迁移能力的变化。通过实时定量PCR 及Western blot 检测过表达seq-915_x4024 的HaCaT 细胞及与之共培养FBs 分泌细胞外基质能力的变化。

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REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第32期15卷 6036-6040页

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室辽宁省沈阳市110031 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁省沈阳市110001

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退... 详细信息

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果与结论:PCR和测序证实,构建出了REST/NRSFshRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%。4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显。结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

关键词：慢病毒载体 REST/NRSF shRNA 基因骨髓间充质干细胞

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骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只... 详细信息

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只小鼠制作皮肤损伤模型,并随机分为hBMSC移植组,hAMSC移植组,hADSC移植组,和盐水移植组.分别于伤后3,7,10,14天采用创面大体观察、组织学检查方法观察创面愈合情况.体外实验通过transwell小室将hBMSC,hAMSC,hADSC分别与人皮肤成纤维细胞(hFB)共培养,检测各组成纤维细胞的增殖,迁移,趋化,胶原合成,和生长因子VEGF,KGF,bFGF,TGF-β的分泌情况,探讨其促进创面愈合的机制.结果：创伤后3d开始,各组创面逐渐缩小,脂肪间充质干细胞治疗组最为明显,差异有显著性意义(P＜0.05),组织学检查显示,脂肪间充质干细胞治疗组重上皮化明显.体外实验,各组成纤维细胞增殖无显著性差异,脂肪间充质干细胞组迁移,趋化,胶原合成,生长因子分泌明显优于其它组,差异有显著性意义(P＜0.05).结论：脂肪间充质干细胞是治疗皮肤损伤更理想的种子细胞.

关键词：间充质干细胞表皮成纤维细胞皮肤损伤修复

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一种简单扩增获得表皮干细胞的新方法

一种简单扩增获得表皮干细胞的新方法

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第九届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议暨第二届中欧创面修复学术会议

作者：王喜良庞希宁中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳11000l

目的：寻找一种简单扩增表皮干细胞的方法,为皮肤组织工程提供充足的"种子细胞"。方法以中性蛋白酶和胰酶序贯消化表皮皮片,获得表皮单细胞悬液,接种到75cm2培养瓶中,20min后清除未贴壁细胞,使用Epilife低钙培养液培养。细胞... 详细信息

目的：寻找一种简单扩增表皮干细胞的方法,为皮肤组织工程提供充足的"种子细胞"。方法以中性蛋白酶和胰酶序贯消化表皮皮片,获得表皮单细胞悬液,接种到75cm2培养瓶中,20min后清除未贴壁细胞,使用Epilife低钙培养液培养。细胞生长到30％-50％汇合后,加大培养液的使用量,为常规培养用量的2-3倍(30-40ml),24小时换液一次。

关键词：表皮干细胞 involucrin loricrin miR-203

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胚胎表皮角质形成细胞抑制CD4+/CD8+T细胞增殖的体外研究

胚胎表皮角质形成细胞抑制CD4+/CD8+T细胞增殖的体外研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王哲张殿宝刘晓玉赵峰王喜良张涛林学文王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的：建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对CD4+/CD8+T细胞增殖的作用及机制。方法：分离培养表皮KCs,并将其分为妊娠中期(孕18-24w)、妊娠晚期(孕30-33w)和成年(20-30y)组;将各组细...

目的：建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对CD4+/CD8+T细胞增殖的作用及机制。方法：分离培养表皮KCs,并将其分为妊娠中期(孕18-24w)、妊娠晚期(孕30-33w)和成年(20-30y)组;将各组细胞分别与经CFSE标记的第三方健康献血CD4+/CD8+T细胞共培养5d,流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测各组KCs条件培养液中细胞因子IL-6的浓度。结果妊娠中期胚胎表皮KCs具有比妊娠晚期胚胎表皮KCs和成年表皮KCs更强的抑制CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力;妊娠中期胚胎表皮KCs条件培养液中IL-6的浓度明显低于妊娠晚期胚胎表皮KCs和成年表皮KCs条件培养液中IL-6的浓度;用激动剂上调胚胎表皮KCs中IL-6表达时,其抑制CD4+/CD8+T细胞增殖能力减弱。结论妊娠中期胚胎表皮KCs能够抑制CD4+/CD8+T细胞增殖,机制与其IL-6分泌不足有关,其有望成为皮肤组织修复和预防皮肤移植排斥反应发生的理想细胞来源。

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胚胎表皮角质形成细胞对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用

胚胎表皮角质形成细胞对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王哲刘晓玉张殿宝王喜良张涛赵峰林学文王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的探讨不同胎龄胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用方法原代培养表皮KCs和成纤维细胞,体外应用Transwell系统观察胚胎表皮KCs共培养后真皮成纤维细胞增殖和迁移情况,应用RT-PCR和Western bl...

目的探讨不同胎龄胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用方法原代培养表皮KCs和成纤维细胞,体外应用Transwell系统观察胚胎表皮KCs共培养后真皮成纤维细胞增殖和迁移情况,应用RT-PCR和Western blotting技术检测成纤维细胞中TGF-β家族, precollagen,collagen,MMPs和TIMPs基因和蛋白表达.结果与晚期妊娠组相比,中期妊娠胚胎表皮KCs更能促进成人真皮成纤维细胞增殖和迁移.中期妊娠胚胎表皮KCs共培养能上调成纤维细胞precollagen 1,collagen 1,TGF-β1,TGF-β2,TIMP-2和TIMP-3表达,同时下调成纤维细胞precollagen 3,collagen 3,TGF-β 3,MMP-2,MMP-3,MMP-9和MMP-14表达.晚期妊娠胚胎表皮KCs共培养能下调成纤维细胞中precollagen 3, TGF-β1,TIMP-2和TIMP-3表达,上调collagen 1,TGF-β2,TGF-β3,MMP-2,MMP-3,MMP-9和MMP-14表达.中期妊娠和晚期妊娠共培养组成纤维细胞precollagen 1,precollagen 3,collagen 1,collagen 3,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β 3,MMP-1,-3,MMP-14,TIMP-1和TIMP-2表达水平差异显著(p＜0.05).结论胎儿表皮KCs能够调节成纤维细胞表型和功能,从而在无瘢痕愈合中发挥重要作用.

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