检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：郎宏鑫施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室千细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过...

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过对孕中期和孕晚期胎儿皮肤角质形成细胞总RNA进行mRNAs和microRNAs第二代测序分析,得到孕中期胎儿皮肤中呈现高表达的microRNAs,我们发现microRNA-149在孕中期呈高表达,并通过实时荧光定量PCR对其相对表达情况进行验证.通过生物信息学分析与双荧光素酶报告基因验证mcroiRNA-149的靶基因.用Lipo2000将microRNA-149的mimic转染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),设置阴性对照组和空白对照组,通过Elisa检测细胞培养液中IL-6的表达改变.并通过Transwell实验和MTS实验检测microRNA-149mimic对HaCaT的迁移和增殖情况.并且通过Transwell将转染microRNA-149mimic的HaCaT与人真皮成纤维细胞进行共培养,检测转染microRNA-149mimic的HaCaT对人真皮成纤维细胞的迁移影响,并检测人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况.结果：实时荧光定量PCR检测到mcroiRNA-149在孕中期的表达高于孕晚期,提示可能参与胎儿皮肤无瘢痕愈合过程.通过***和TargetScan分析确定microRNA-149的靶基因为IL-6,并经过双荧光素酶报告基因实验进行验证.将microRNA-149的mimic转染HaCaT后,Elisa检测到转染后的培养液中IL-6表达明显下调,结果有统计学意义(P＜0.05).microRNA-149mimic对HaCaT的增殖无明显影响;而可以促进HaCaT的迁移,差异有统计学意义(P＜0.05).转染microRNA-149mimic的HaCaT对与其共培养的人真皮成纤维细胞的影响以及人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况结果还有待于进一步探讨研究.

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正向、负向调节子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

正向、负向调节子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分...

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳 110031 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110001

目的重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化.方法原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染,并培养10d,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基因... 详细信息

目的重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化.方法原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染,并培养10d,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基因的表达,免疫荧光检测胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达.ELISA检测胰岛素分泌.结果慢病毒转染后胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达明显升高,胰岛内分泌细胞分化的相关基因SLc2a2,Nkx6.1,NeuroD1,ngn3,Mafa的表达均有不同程度的升高;并检测到胰岛素的分泌.结论通过用shREST/NRSF、shSHH及PDX1慢病毒载体转染大鼠MSCs,能够使其重编程分化为胰岛素分泌细胞.

关键词：间充质干细胞重编程分化胰岛素分泌细胞

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间充质干细胞的旁分泌作用及其在颅颌面骨再生治疗中的应用研究进展

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中国实用口腔科杂志 2016年第6期9卷 373-378页

作者：王贵玲仇丽鸿庞希宁中国医科大学口腔医学院.附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁沈阳110002 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110122

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)自被发现以来,一直在再生医学中作为理想的种子细胞,利用多向分化的潜能分化为组织细胞,以修复组织缺损。然而近年来人们发现,进入体内的MSCs增殖分化能力有限,其主要是通过旁分泌作用诱导受... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)自被发现以来,一直在再生医学中作为理想的种子细胞,利用多向分化的潜能分化为组织细胞,以修复组织缺损。然而近年来人们发现,进入体内的MSCs增殖分化能力有限,其主要是通过旁分泌作用诱导受体自身细胞的增殖分化,从而实现局部组织的修复再生。现对MSCs的旁分泌作用及其在颅颌面骨再生治疗中的应用做一综述。

关键词：间充质干细胞旁分泌骨再生

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正常与糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的比较

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解剖科学进展 2014年第5期20卷 420-424页

作者：王哲张殿宝刘晓玉王瑞王秋实中国医科大学附属盛京医院输血科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的比较正常和糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)移植促进皮肤创伤愈合疗效差别。方法无菌条件下获取正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型... 详细信息

目的比较正常和糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)移植促进皮肤创伤愈合疗效差别。方法无菌条件下获取正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。应用WST法和Transwell迁移实验检测细胞增殖和迁移情况。应用ELISA对正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量进行检测。建立小鼠皮肤创伤模型并随机分为3组,分别以皮内注射方式将3代正常小鼠或糖尿病小鼠来源ADSCs的细胞混悬液移植到小鼠创面四周,空白对照组注射生理盐水,于伤后14d观察创面愈合情况;Western blot检测伤后14d创面组织Bcl-2蛋白表达。结果小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45,与正常小鼠相比,糖尿病小鼠来源的ADSCs增殖和迁移能力下降,条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量明显降低。糖尿病小鼠ADSCs移植组于创伤后第14d伤口愈合率为(79.6%±6.2%),均显著低于正常小鼠移植组14d的(97.1%±4.1%),两者均高于对照组14d的(64.6%±2.9%,<0.05)。与正常小鼠移植组相比,糖尿病小鼠移植组伤后14d创面组织Bcl-2表达水平降低,高于对照组创面组织Bcl-2表达水平。结论正常小鼠来源ADSCs较糖尿病小鼠ADSCs更能促进小鼠皮肤创面愈合。

关键词：脂肪间充质干细胞细胞增殖细胞迁移创伤愈合小鼠

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早期胎儿表皮microRNAs调控TGF-β/Smads传导通路促进皮肤创伤无瘢痕愈合机制的研究

早期胎儿表皮microRNAs调控TGF-β/Smads传导通路促进皮肤创伤无...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：赵峰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究...

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究重点.表皮角质形成细胞在胎儿皮肤再生过程中起到了一定的作用.妊娠早期,皮肤创伤后再上皮化过程迅速,角质形成细胞的增殖及迁移能力显著高于妊娠晚期.并且,角质形成细胞能够通过对成纤维细胞的作用进而调控瘢痕形成过程.我们通过本研究检测人孕中、晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达差异并探讨表皮角质形成细胞中差异表达的miRNAs对皮肤创伤无瘢痕愈合的作用.方法：我们应用Solexa二代测序分别检测3例孕中期及3例孕晚期胎儿表皮角质形成细胞中miRNAs的表达.在去除低质量序列并与人类基因组数据库及已知非编码RNA数据库比对后,应用mirTools 2.0网站运行miRDeep 2.0在测序结果原始数据中预测候选新miRNAs.实时定量PCR技术验证测序得到的miRNAs相对表达结果.RNAfold及UCSC预测候选新miRNAs的二级结构及其在基因组中的定位.将候选新miRNAs与已知miRNA数据库比对预测候选新miRNAs的保守性.生物信息学分析方法预测候选新miRNAs的靶基因及靶向传导通路.结果：我们检测出106个高度可能成为新miRNA的候选新miRNAs.将测序与实时定量PCR的检测结果进行相关性分析得出测序结果具有很高的可重复性,可以代表不同胎龄的人角质形成细胞中miRNAs的基本相对表达情况.通过RNAfold,我们获得候选新miRNAs前体序列的二级结构等相关信息.我们预测出25个与已知各物种miRNAs具有相同种子序列的候选新miRNAs.其中,获得了19个保守性高的候选新miRNAs,8个是与已知人miRNAs有高度保守性的.孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.不同胎龄的表皮角质形成细胞中,6对miRNAs存在成簇表达的现象.生物信息学预测差异表达的miRNAs能够广泛调控TGF-β/Smads传导通路.结论：与孕中期相比,孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.孕中期角质形成细胞中高表达的miRNAs通过显著抑制TGF-β/Smads传导通路促进胎儿无瘢痕愈合.

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的:观察用聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)包被的SPIO(PEI-SPIO)作为基因载体时对细胞的毒性以及将REST-siRNA、SHH-siRNA共转染hADSCs后其分化为胰岛前体细胞的能力.方法:台盼蓝染色、MTT、免疫荧光、Real-time PCR、Western-blot、普鲁士蓝染色实验结果一、hADSCs的分离和培养原代培养hADSCs 24小时后,少量细胞贴壁.传代细胞很快贴壁,细胞形态较均匀一致,呈长梭形均匀贴壁分布.二、hADSCs细胞表面抗原标志物流式细胞学鉴定流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测结果显示,hADSCs不表达CD34,主要表达CD105和CD90.表明所分离的hADSCs不包含造血干细胞及成熟的造血细胞,是一群高表达间质细胞表面分子的细胞..

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不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王哲施萍刘晓玉王喜良张殿宝庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情...

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情同意，医院伦理委员会批准。分别用两步消化法和组织块法分离培养胎儿皮肤角质形成细胞和成人真皮成纤维细胞。将角质形成细胞按胎龄分为小于28周组和大于28周。在倒置相差显微镜观察两种细胞形态，应用免疫荧光检测角蛋白和波形蛋白在细胞内的表达，划痕实验观察两组角质形成细胞的迁移能力及两组角质形成细胞作用下成纤维细胞迁移能力。

关键词：

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高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：张殿宝施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2...

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2和105/cm2接种于六孔板,使用2ng/mL的TGF-β1作用48h,观察细胞形态变化,应用Realtime PCR和western blot分别检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和ZO-1的转录水平和表达水平：免疫荧光检测E-Cadherin和Vimentin表达。结果：低密度组的HaCaT细胞在TGF-β1处理48h后细胞间隙变大,细胞形态由多角形变为长梭形,高密度组的细胞间隙变大,但形态变化不明显;Realtime PCR和westem blot显示两组上皮细胞标志物E-Cadherin和ZO-1的转录及表达均下调,但高密度组下调比例低于低密度组,间充质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin的转录及表达均上调,上调比例无显著差异;免疫荧光结果发现,高密度组表达E-Cadherin的细胞比率明显高于低密度组,Vimentin的表达无显著差异。结论：高接种密度降低TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的效率。

关键词：

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EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检...

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检测干细胞表面标志波形蛋白、CD44、*** chamber法观察EGF浓度梯度对hAMSCs定向迁移的影响.Transwell小室测定EGF对hAMSCs迁移的作用,及EGFR抑制剂AG1478、PI3K抑制剂LY294002、ERK抑制剂U0126对EGF作用的影响.蛋白免疫印迹法检测EGF处理后EGFR、AKT、ERK的磷酸化水平的变化,分析其与细胞迁移的关系.结果：使用Dunn chemotaxis chamber对EGF刺激后的hAMSC进行超过两小时的细胞运动研究,发现经线性浓度梯度的EGF刺激hAMSC后,其表现为特异性的定向迁移,平均迁移率为6.45μm/h.同时EGF还能增加表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白酶B(AKT)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK)的磷酸化水平.EGF诱导的ERK活性能被EGFR阻滞剂AG1478和PI3K阻滞剂LY-294002所抑制.我们还发现EGF调节PAK1信号通路很可能与hAMSC的定向迁移相关.此外,AG1478、LY-294002、U0126(ERK阻滞剂)能够减弱EGF促进的hAMSC定向迁移.结论：我们的研究表明EGF诱导的hAMSC增殖和迁移受EGFR调控—EGFR激活下游PI3K/AKT和ERK信号通路,并且hAMSC的迁移与PAK1相关.

关键词：

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聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞和导入siRNA的研究

聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞...

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王瑞施萍张殿宝刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRN... 详细信息

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRNA干扰目的基因.方法：1.颗粒来源：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒购买于东纳生物科技有限公司.2.实验方法：原代分离人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),向人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)中加入10％胎牛血清,含20ug/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱培养,待细胞达到80％-90％融合时用胰酶消化传代.取传至第三代的细胞放入含DMEM/F12培养基的六孔板中.设立2个实验组和1个对照组,分别向两个实验组培养基中加入终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH,对照组仅加入DMEM/F12培养基.3.实验评估：实验组于标记24h后,分别用普鲁士蓝染色和Western-blot方法检测PEI-siGAPDH进入细胞和siGAPDH干扰情况.结果：光镜下观察,发现终浓度为8ug/L的聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒普鲁士蓝染色几乎为100％.Western-blot方法检测,发现终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH干扰组较对照组GAPDH表达减低.结论：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒能标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和导入小干扰RNA.为进一步应用人羊膜间充质干细胞移植治疗提供活体示踪方法奠定实验基础.

关键词：人羊膜间充质干细胞聚乙烯亚胺四氧化三铁磁性纳米颗粒标记转染

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