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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍张殿宝刘晓玉张涛庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫...

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫细胞化学法和流式细胞术检测细胞表面抗原;用骨软骨脂肪表皮诱导分化培养基进行诱导分化.EGF100ng/ml作用hAMSC,分别提取hAMSC和EGF作用hAMSC总RNA,进行RNA-Seq分析.用qRT-PCR检测验证.结果培养的人羊膜间充质干细胞呈梭形,旋涡样生长.通过流式细胞术检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD44,CD90,CD105;免疫细胞化学法检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD90,CD73,***在骨,软骨,脂肪,表皮诱导分化培养基中可向成骨细胞、软骨和脂肪细胞及表皮细胞分化.Seq-RNA表达谱测序涉及创伤修复12个相关的表达基因,其中,上调基因9个(BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2);下调基因3个(C3、NGF、OLR1).并经qRT-PCR检测验证得到证实.结论人羊膜间充质干细胞具有多向分化的潜能和干细胞的生物学特性,并能在一定诱导条件下分化为表皮细胞;表达伤口愈合相关蛋白BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2.这一结果支持了人羊膜间充质干细胞在创伤修复中的应用.

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EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达基因及基因功能富集分析

EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达基因及基因功能富集分析

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：施萍李彩虹张殿宝刘晓玉张涛庞希宁中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的研究EGF干预人羊膜间充质干细胞前后的基因表达差异,在基因水平上探讨EGF作用的分子生物学机制.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞提...

目的研究EGF干预人羊膜间充质干细胞前后的基因表达差异,在基因水平上探讨EGF作用的分子生物学机制.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞提取总RNA,用高通量Illumina测序RNA-Seq表达谱分析技术,对体外培养的用EGF干预人羊膜间充质干细胞,对干预前后mRNA进行测序,筛选差异表达基因并进行数字基因表达谱分析、聚类分析、Gene Ontology功能显著性富集分析、Pathway显著性富集分析和蛋白互作网络分析;采用qRT-PCR检测对上述结果进行验证.结果与人类基因组数据库(Hg18)进行比对,比较人羊膜间充质干细胞和EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达,发现差异表达基因104个,其中上调已知基因56个;下调已知基因48个.RNA-Seq的KEGG pathways的显著性富集分析,细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路为差异表达基因中显著富集的pathways(q≤0.05).该通路共涉及9个差异表达基因,其中上调差异表达基因7个(BMP2,CXCL3,IL1B,IL8,TNFRSF9,CCL2,CCL7),下调差异表达基因2个(INHBE,IFNE).经qRT-PCR检测验证获得证实.结论 EGF干预人羊膜间充质干细胞前后存在多组基因表达差异.细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路在启动人在羊膜间充质干细胞增殖和迁移过程中起着调节作用,有望成为促进羊膜间充质干细胞增殖和迁移的靶通路,对其应用于促进创面愈合具有指导意义.

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miRNA与皮肤瘢痕形成研究新进展

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解剖科学进展 2016年第2期22卷 210-213页

作者：王哲宋起滨赵峰张殿宝庞希宁中国医科大学附属盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院整形美容科沈阳110004 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001

异常的创伤愈合后发生的皮肤瘢痕形成以真皮成纤维细胞增殖和胶原的过多沉积为特征。Micro RNA(mi RNA)是一类由18-25核苷酸组成的单链非编码RNA,参与调控瘢痕形成的多种机制,包括调控TGF-β/Smads信号通路、ECM合成与降解、FBs增殖与... 详细信息

异常的创伤愈合后发生的皮肤瘢痕形成以真皮成纤维细胞增殖和胶原的过多沉积为特征。Micro RNA(mi RNA)是一类由18-25核苷酸组成的单链非编码RNA,参与调控瘢痕形成的多种机制,包括调控TGF-β/Smads信号通路、ECM合成与降解、FBs增殖与分化和上皮间质转化(EMT)。本文综述了mi RNA参与调控瘢痕形成的基础和临床研究进展,以期深入了解皮肤瘢痕形成的机制。

关键词：瘢痕形成 miRNA 皮肤成纤维细胞增殖非编码RNA 上皮间质转化 TGF-β 信号通路

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不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：马兰兰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室中国医科大学基础医学院生理教研室中国医科大学附属第一医院全科医学教研室

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单... 详细信息

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单个核细胞进行培养和培养后免疫荧光染色。结果:52例脐带血中CD44(+)、CD105(+)/CD34(-)、CD45(-)细胞在10例28周～30周脐带血中的数量为15±0.2个/百万有核细胞;在12例31周～33周脐带血中为11±0.3个/百万有核细胞;在10例34周～36周脐带血中为10±0.1个/百万有核细胞;在10例37周～39周脐带血中为6±0.5个/百万有核细胞;在10例40周～42周脐带血中,为2±0.3个/百万有核细胞。37周～40周脐带血12份,28周～36周脐带血12例培养分别有1份和3份出现旋涡状排列的间充质样的细胞且免疫荧光染色呈CD45(-)和CD90(+)。结论:脐血中含有MSCs,随胎龄增加数量减少:胎龄小脐带血MSCs接种成功率高于胎龄大脐带血的接种成功率。

关键词：脐带血间充质干细胞流式细胞术

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miR-136通过靶向PPP2R2A调节TGF-β1对角质形成细胞增殖的抑制作用

miR-136通过靶向PPP2R2A调节TGF-β1对角质形成细胞增殖的抑制作用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：张殿宝王竞王暂张涛施萍王喜良赵峰刘晓玉林学文庞希宁中国医科大学卫生部暨教育部医学细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院肛肠外科沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的:角质形成细胞的增殖能力对于伤口愈合至关重要,而由成纤维细胞和角质形成细胞分泌的TGF-β1对角质形成细胞的增殖具有阻滞作用.越来越多的研究表明,microRNA参与调节角质形成细胞的增殖,而其中的分子机制仍有待阐明.本文旨在明确mi...

目的:角质形成细胞的增殖能力对于伤口愈合至关重要,而由成纤维细胞和角质形成细胞分泌的TGF-β1对角质形成细胞的增殖具有阻滞作用.越来越多的研究表明,microRNA参与调节角质形成细胞的增殖,而其中的分子机制仍有待阐明.本文旨在明确miR-136在TGF-β1诱导的角质形成细胞增殖阻滞中的作用,并探索其机制.方法:以HaCaT细胞系和人包皮皮片中分离的角质形成细胞为实验对象,建立TGF-β1诱导角质形成细胞发生上皮间充质转化的模型,相差显微镜下观察细胞形态,使用Realtime PCR检测其中标志性基因水平,通过western blot和免疫荧光进一步验证.

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