检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究与临床康复 2011年第23期15卷 4312-4315页

作者：李彩虹施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001

背景:人羊膜间充质干细胞移植可促进皮肤创伤的愈合。目的:观察表皮生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法:人羊膜间充质干细胞经分离、鉴定并培养至第3代。细胞经过不同浓度的表皮生长因子处理后,用MTT法测量吸... 详细信息

背景:人羊膜间充质干细胞移植可促进皮肤创伤的愈合。目的:观察表皮生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法:人羊膜间充质干细胞经分离、鉴定并培养至第3代。细胞经过不同浓度的表皮生长因子处理后,用MTT法测量吸光度值从而计算出细胞存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定表皮生长因子对细胞迁移能力的影响;并用表皮生长因子受体的抑制剂AG1478及PI3K的抑制剂LY294002检测其对细胞迁移能力的影响。结果与结论:表皮生长因子处理后细胞的吸光度值升高1.55倍,穿过膜的数量增高1.5倍;AG1478、LY294002对表皮生长因子引起的迁移有抑制作用。提示表皮生长因子处理后细胞增殖和迁移能力均增强,迁移与EGFR-PI3K信号通路有关。

关键词：人羊膜间充质干细胞表皮生长因子增殖迁移信号通路

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EGF促进人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的信号转导机制研究

EGF促进人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的信号转导机制研究

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：李彩虹施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110000

目的探究EGF影响体外培养人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)增殖和迁移的信号转导机制.方法 hAMSCs经分离、培养至第3代后,细胞用不同浓度的EGF处理,用MTr法测量吸光度值从而计算细胞的存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定EGF对细... 详细信息

目的探究EGF影响体外培养人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)增殖和迁移的信号转导机制.方法 hAMSCs经分离、培养至第3代后,细胞用不同浓度的EGF处理,用MTr法测量吸光度值从而计算细胞的存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定EGF对细胞迁移能力的影响;之后在培养液中分别加入EGFR的抑制剂AG1478、PI3K的抑制剂LY294002、ERK的抑制剂U0126,检测其对细胞增殖和迁移能力的影响.结果 EGF处理后细胞的吸光度值升高至1.33倍,穿过膜的细胞数量增至1.5倍;AG1478、LY294002、U0126对EGF引起的增殖和迁移活动有抑制作用,其中U0126对细胞增殖的抑制作用最弱.结论 EGF可通过活化EGFR及其下游的PI3K和ERK信号通路,使hAMSCs增殖和迁移能力增强.

关键词：人羊膜间充质干细胞 EGF 增殖迁移

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REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第32期15卷 6036-6040页

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室辽宁省沈阳市110031 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁省沈阳市110001

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退... 详细信息

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果与结论:PCR和测序证实,构建出了REST/NRSFshRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%。4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显。结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

关键词：慢病毒载体 REST/NRSF shRNA 基因骨髓间充质干细胞

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正向、负向调节子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

正向、负向调节子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分...

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：李宏图施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳 110031 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110001

目的重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化.方法原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染,并培养10d,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基因... 详细信息

目的重编程诱导大鼠MSCs向胰岛素分泌细胞分化.方法原代培养的大鼠MSCs经分离、培养至第三代后,用负向调节子REST/NRSF、SHH慢病毒干扰载体以及正向调节子PDX1慢病毒过表达载体共转染,并培养10d,实时定量PCR检测胰岛细胞分化相关基因的表达,免疫荧光检测胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达.ELISA检测胰岛素分泌.结果慢病毒转染后胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达明显升高,胰岛内分泌细胞分化的相关基因SLc2a2,Nkx6.1,NeuroD1,ngn3,Mafa的表达均有不同程度的升高;并检测到胰岛素的分泌.结论通过用shREST/NRSF、shSHH及PDX1慢病毒载体转染大鼠MSCs,能够使其重编程分化为胰岛素分泌细胞.

关键词：间充质干细胞重编程分化胰岛素分泌细胞

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不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

不同胎龄人脐带血间充质干细胞研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：马兰兰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室中国医科大学基础医学院生理教研室中国医科大学附属第一医院全科医学教研室

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单... 详细信息

目的:比较不同胎龄脐带血中MSCs数量和生长特性的差别,分析脐带血成功培养山MSCs的影响因素,探讨脐带血MSCs生物学特性。方法:应用单管多色荧光技术分析了不同胎龄脐带血中CD44、CD105阳性而CD34、CD45阴性细胞的数量,并提取脐带血中单个核细胞进行培养和培养后免疫荧光染色。结果:52例脐带血中CD44(+)、CD105(+)/CD34(-)、CD45(-)细胞在10例28周～30周脐带血中的数量为15±0.2个/百万有核细胞;在12例31周～33周脐带血中为11±0.3个/百万有核细胞;在10例34周～36周脐带血中为10±0.1个/百万有核细胞;在10例37周～39周脐带血中为6±0.5个/百万有核细胞;在10例40周～42周脐带血中,为2±0.3个/百万有核细胞。37周～40周脐带血12份,28周～36周脐带血12例培养分别有1份和3份出现旋涡状排列的间充质样的细胞且免疫荧光染色呈CD45(-)和CD90(+)。结论:脐血中含有MSCs,随胎龄增加数量减少:胎龄小脐带血MSCs接种成功率高于胎龄大脐带血的接种成功率。

关键词：脐带血间充质干细胞流式细胞术

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NRSF与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究

NRSF与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究

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华北地区第十七届职业卫生学术交流会

作者：庞希宁李宏图张涛刘晓玉中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110001

神经限制性沉默因子(NRSF)是一种锌指蛋白转录因子，能与神经元终末分化基因启动子区域的神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列结合，从而在转录水平抑制许多与神经元发育及功能相关基因的表达。本文用改良的“序贯诱导法”在体外将... 详细信息

神经限制性沉默因子(NRSF)是一种锌指蛋白转录因子，能与神经元终末分化基因启动子区域的神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列结合，从而在转录水平抑制许多与神经元发育及功能相关基因的表达。本文用改良的“序贯诱导法”在体外将胚胎干细胞诱导分化为神经细胞。通过基因表达芯片检测诱导分化前后含有NRSE/RE-1序列基因，用实时定量PCR进行验证。将化学合成的RE-1/NRSE dsRNA转染小鼠胚胎干细胞(mESCs )，进一步证实其在mESCs向神经细胞分化中的诱导作用。研究结果表明：在mESCs诱导分化为神经细胞过程中，基因表达芯片筛选出11种与促进神经元发育相关的含有NRSE/RE-1序列基因，即P2ry12，Nptxr，Syp，BDNF，Syt2，Syt7，Ntrk3，Cdh4，Atp262，Rgs7，Cacna2d3。

关键词：胚胎干细胞神经细胞诱导分化神经限制性沉默因子锌指蛋白转录因子序贯诱导法

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