检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2012年第3期28卷 237-239页

作者：沈涛李妍杨礼庆梁爽巴根付勤中国医科大学附属盛京医院骨科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 明尼苏达大学实验病理系美国艾波利斯55455

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉... 详细信息

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。

关键词： ArgBP2 Western blot 免疫沉淀

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球孢白僵菌侵染玉米螟的电镜观察

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电子显微学报 2019年第2期38卷 144-149页

作者：刘忱郭志红中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110122 国家林业局森林病虫害防治总站辽宁沈阳110034

为了解球孢白僵菌对玉米螟的致病机理,本研究应用扫描电子显微镜和透射电子显微镜技术,观察了球孢白僵菌sfzz003对玉米螟的侵染过程及其超微结构变化。结果表明,接种后24 h,分生孢子已萌发,并以芽管或菌丝的形式穿透体壁,普遍侵染。接种... 详细信息

为了解球孢白僵菌对玉米螟的致病机理,本研究应用扫描电子显微镜和透射电子显微镜技术,观察了球孢白僵菌sfzz003对玉米螟的侵染过程及其超微结构变化。结果表明,接种后24 h,分生孢子已萌发,并以芽管或菌丝的形式穿透体壁,普遍侵染。接种后48 h,穿透菌丝在虫体内大量繁殖,穿透过程中,菌丝与表皮层片层结构平行或垂直生长,也可侧向出芽。表皮层及皮细胞层因穿透而发生形变,菌丝周围出现组织溶解现象,这是机械压力与酶的联合作用。穿透菌丝周围可见白色絮状物,有的部位表皮层与皮细胞层分离,细胞器溶解。侵入血腔的菌丝以出芽的方式大量繁殖,至腔内充满菌丝。接种后72 h,菌丝已在寄主体表形成大量网状结构。球孢白僵菌发育进入晚期,虫体内大部分形成孢子,少量形成菌丝,可见由于营养耗尽而凋亡的菌体。本研究为更好地了解昆虫病原真菌与寄主的关系提供了理论基础,对应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。

关键词：球孢白僵菌玉米螟侵染过程电镜观察

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Flag标签MORC2-677丝氨酸位点突变载体构建及表达

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生命科学研究 2012年第1期16卷 1-5页

作者：王桂玲王孝会程正国宋艳艳李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部细胞生物学重点实验室中国辽宁沈阳110001

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MOR... 详细信息

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MORC2-WT野生型质粒为模板,在S677突变位点两侧设计重叠突变引物,进行三轮重叠延伸PCR完成定点突变,获得MORC2全长编码序列的S677位点的定点突变体载体(pcDNA3.1A-MORC2-S677A/S677E);再通过KpnⅠ和XhoⅠ酶切把pcDNA3.1A-MORC2-WT/S677A/S677E各载体定向克隆到已构建好的pcDNA3.1-Flag空载体中,酶切鉴定及测序正确后,转染到SGC-7901细胞中,利用Flag–标签抗体,Western blot检测其各突变载体的表达.成功构建了人Flag标签MORC2全长编码序列S677位点突变体真核表达载体并在SGC-7901细胞中获得带Flag标签融合蛋白表达产物,为进一步研究MORC2的功能奠定了基础.

关键词： MORC2 突变体真核表达载体基因表达胃癌细胞

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miRNAs调控E2F5在癌症发生发展中的作用及其机制研究进展

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现代肿瘤医学 2023年第2期31卷 367-373页

作者：李婷婷朱心怡李思浓邵阳光中国医科大学辽宁沈阳110122 中国医科大学生命科学学院分子细胞生物学教研室国家卫生和计划生育委员会细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

E2F转录因子5(E2F transcription factor 5,E2F5)是腺病毒E2启动子结合因子(adenovirus E2 promoter binding factor,E2F)转录因子家族的一员,参与细胞增殖、分化和凋亡等多种重要细胞过程。由于E2F5在细胞周期调控中发挥重要作用,因此... 详细信息

E2F转录因子5(E2F transcription factor 5,E2F5)是腺病毒E2启动子结合因子(adenovirus E2 promoter binding factor,E2F)转录因子家族的一员,参与细胞增殖、分化和凋亡等多种重要细胞过程。由于E2F5在细胞周期调控中发挥重要作用,因此它与多种癌症的发生,发展和预后密切相关。近来随着对微小RNA(microRNAs,miRNAs)研究的进展,发现多种miRNAs通过靶向E2F5来影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和耐药。本文结合最新研究报道,对E2F5在癌症中的研究进展,特别是不同肿瘤中miRNAs与E2F5之间的关系作一综述,为制定癌症的治疗策略提供新的思路。

关键词： E2F5 E2F转录因子 miRNAs 癌症

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全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用

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中国现代医学杂志 2006年第11期16卷 1646-1648,1650页

作者：王昕陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观... 详细信息

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞的损伤作用。方法以不同浓度的PFOS处理脑血管内皮细胞(HBMEC),30min后观察细胞形态;用免疫荧光染色的方法观察细胞骨架微管蛋白α-tubulin的表达;不同剂量PFOS连续腹腔内注射14d观察大鼠行为学改变。结果随着PFOS浓度的增高细胞形态发生变化,细胞变圆、部分细胞不再贴壁、细胞骨架微管解聚细胞形态变圆,微管逐渐向细胞核周围聚集;动物实验表明高浓度PFOS可导致大鼠脑损伤、出现偏瘫的体征。结论全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)对脑血管内皮细胞有损伤作用。

关键词：人脑微血管内皮细胞(FIBMEC) PFOS 微管蛋白 α-tubulin

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磁性纳米颗粒与脂质体介导REST-siRNA转染hADSCs的比较

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基础医学与临床 2013年第12期33卷 1549-1553页

作者：王瑞庞希宁施萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的对聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(PEI-SPIO)与脂质体(lipofectamineTM2000)作为基因载体转染人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的可行性及转染后细胞的增殖、转染效率及基因瞬时干扰效率进行比较分析。方法分别将PEI-SPIO和lipofectamineTM2... 详细信息

目的对聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(PEI-SPIO)与脂质体(lipofectamineTM2000)作为基因载体转染人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的可行性及转染后细胞的增殖、转染效率及基因瞬时干扰效率进行比较分析。方法分别将PEI-SPIO和lipofectamineTM2000作为基因载体连接REST-siRNA体外转染hADSCs,用MTT法检测hADSCs增殖和功能;用荧光显微镜观察转染效率;分别用Real-time PCR和Western blot检测REST的表达。结果用磁性纳米颗粒和脂质体作为基因载体转染细胞后,细胞成活率分别为99%和79%(P<0.05);磁纳米颗粒和脂质体的转染效率无差异,分别为75%和71%;磁纳米颗粒和脂质体作为基因载体时RNA表达量分别为(0.46±0.04)和(0.53±0.05),蛋白水平表达量分别为(0.501±0.006)和(0.523±0.004)。结论磁性纳米颗粒因其具有低细胞毒性可代替脂质体作为转染干细胞的基因载体。

关键词：磁性纳米颗粒聚乙烯亚胺脂质体脂肪间充质干细胞转染

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TGF-β/Smads信号传导通路与microRNA相互作用的研究进展

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1426-1429页

作者：赵峰庞希宁施萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

TGF-β/Smads信号传导通路与微小RNA之间具有广泛的相互作用。TGF-β/Smads信号传导通路在microRNA基因的表观遗传学、转录及转录后加工等过程都具有调控作用;而microRNA也从转录后水平抑制TGF-β/Smads信号传导通路的相关基因表达。二... 详细信息

TGF-β/Smads信号传导通路与微小RNA之间具有广泛的相互作用。TGF-β/Smads信号传导通路在microRNA基因的表观遗传学、转录及转录后加工等过程都具有调控作用;而microRNA也从转录后水平抑制TGF-β/Smads信号传导通路的相关基因表达。二者的相互关系与人类多种疾病包括组织纤维化、瘢痕愈合和肿瘤的发生发展密切相关。

关键词：转化生长因子β Smads 微小RNA 调控

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人脂肪间充质干细胞对皮肤创伤修复的作用

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1377-1381页

作者：刘晓玉王瑞张涛庞希宁施萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨人脂肪间充质干细胞（hADSCs）皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CID0、CD105、C... 详细信息

目的探讨人脂肪间充质干细胞（hADSCs）皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CID0、CD105、CD34和CD45的表达，并分别置于骨、软骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化，检测其多向分化潜能。在实验小鼠背部制备一个面积为1cm×1 cm的皮肤创面，将磁性纳米颗粒标记的hADSCs以皮内注射方式移植到小鼠创面四周。分别于伤后0、7和14d观察创面愈合情况，并与对照组进行比较分析。结果人脂肪间充质干细胞表达CD90和CD105，不表达CD34和CD45，具有骨，软骨，脂肪诱导分化潜能；实验小鼠皮肤创伤后3d开始，可见各组创面逐渐缩小，伤后21d创面愈合。移植组于创伤后第7天创面愈合率为（74．6％±4．1％），14d为（96．5％±1．5％），均显著高于对照组7d的（26．7％±1．9％），14d的（47．3％±2．3％），（P〈0．05）。结论hADSCs移植能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。

关键词：脂肪间充质干细胞创伤愈合

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肝癌HepG2和Hep3B细胞系SNF5表达及定位

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中华肿瘤防治杂志 2018年第14期25卷 985-989页

作者：尹中波霍云龙王春玉赵越江苏省南通市第六人民医院病理科江苏南通226011 中国医科大学盛京医院病理科辽宁沈阳110011 中国医科大学基础医学院染色质生物学研究室.教育部医学细胞生物学重点实验室.卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的染色质重塑因子SNF5在肝细胞肝癌中的生物学功能仍有待深入研究,本研究检测SNF5在HepG2和Hep3B肝癌细胞系中的表达及亚细胞定位,并构建Flag-SNF5真核表达质粒。方法提取HepG2和Hep3B两种肝癌细胞系的总蛋白,蛋白质印迹法检测SNF5内... 详细信息

目的染色质重塑因子SNF5在肝细胞肝癌中的生物学功能仍有待深入研究,本研究检测SNF5在HepG2和Hep3B肝癌细胞系中的表达及亚细胞定位,并构建Flag-SNF5真核表达质粒。方法提取HepG2和Hep3B两种肝癌细胞系的总蛋白,蛋白质印迹法检测SNF5内源性表达;应用共聚焦激光扫描显微镜观察Hep3B细胞SNF5蛋白定位;提取HepG2总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增SNF5全长编码序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中;将构建的重组质粒测序并转染到Hep3B细胞中,提取细胞蛋白进行蛋白质印迹检测,验证其表达情况;使用免疫沉淀的方法纯化Flag-SNF5融合蛋白。结果在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中,均检测到了SNF5蛋白的内源性表达。在Hep3B细胞中,SNF5主要定位于细胞核。将SNF5蛋白全长编码区成功克隆到pcDNA3-Flag载体中。重组质粒转染入Hep3B细胞后,检测到融合蛋白Flag-SNF5的表达,相对分子质量约为39×103,并对Flag-SNF5融合蛋白进行了纯化。结论 SNF5蛋白在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中均有表达,且在Hep3B细胞中主要定位于细胞核。成功地构建了Flag-SNF5的真核表达质粒,验证了重组质粒的表达,并纯化了该融合蛋白。

关键词：肝细胞癌重组质粒蛋白质印迹法 SNF5

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核酸适配体W3介导靶向乳腺癌的量子点成像

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基础医学与临床 2023年第1期43卷 76-82页

作者：王群李鑫马俊李婉明中国医科大学、卫生部细胞生物学重点实验室、医学细胞生物学教育部重点实验室、分子细胞生物学教研室辽宁沈阳110122

目的利用核酸适配体W3对乳腺癌细胞的结合特异性,对乳腺癌细胞以及临床乳腺癌组织石蜡切片标本进行量子点(QDs)成像。方法利用流式细胞测量术检测核酸适配体W3对乳腺癌细胞系的结合特异性,基于生物素与链霉亲和素的结合反应原理,通过荧... 详细信息

目的利用核酸适配体W3对乳腺癌细胞的结合特异性,对乳腺癌细胞以及临床乳腺癌组织石蜡切片标本进行量子点(QDs)成像。方法利用流式细胞测量术检测核酸适配体W3对乳腺癌细胞系的结合特异性,基于生物素与链霉亲和素的结合反应原理,通过荧光显微镜观察核酸适配体W3对乳腺癌细胞系以及临床乳腺癌患者组织标本的量子点靶向成像,并进一步分析其临床意义。结果核酸适配体W3能特异性结合恶性程度较高的乳腺癌细胞,偶联量子点QD605形成量子点探针(W3-QDs),能够对恶性程度较高的乳腺癌细胞系以及乳腺癌组织实现靶向成像,并且具有高恶性程度的乳腺癌组织的荧光强度明显高于恶性程度低的乳腺癌组织。结论核酸适配体W3偶联量子点后能够实现乳腺癌的靶向成像,可用于乳腺癌的早期诊断。

关键词：适配体乳腺癌量子点靶向成像

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