检索结果-内蒙古大学图书馆

PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放

基础医学与临床 2013年第8期33卷 960-965页

作者：王淳李波方文刚陈誉华辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HB... 详细信息

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HBMEC间紧密连接相关蛋白质occludin和ZO-1的表达及分布,用蛋白激酶抑制剂干预和Western blot法检测Rho蛋白活性。结果 25 ng/mL PLGF 30 min显著降低体外血脑屏障模型TEER,使其通透性增高(P<0.05);增加S-occludin表达的同时降低了IS-occludin的表达,使ZO-1蛋白在细胞周边分布减少;此外,ROCK蛋白激酶抑制剂Y27632抑制了PLGF引起的体外血脑屏障透过性增高(P<0.05),并激活细胞内Rho激酶活性。结论 PLGF通过激活HBMEC内Rho/ROCK信号通路,影响HBMEC间紧密连接完整性,进而改变血脑屏障的通透性。

关键词：胎盘生长因子血脑屏障紧密连接 Rho ROCK

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术在悬浮细胞中获得基因沉默效应

引用

基础医学与临床 2012年第2期32卷 226-232页

作者：王淳方文刚李波辽宁中医药大学基础医学院卫生生物教研室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院发育生物教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组... 详细信息

目的利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA(shRNA),使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法分别将含有人胎盘生长因子(PLGF)的干扰序列及阴性对照序列(scramble)连入pRNAT-H1.1/Adeno载体,获得重组穿梭质粒;将线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架重组;将重组子转染HEK 293细胞,经过3轮病毒包装,收获病毒颗粒并测定滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞(NCI-H 250和NCI-H 209),通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应,并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果成功构建带有靶基因干扰序列及scramble、空载体的3种腺病毒重组子(AD-shuttle-shPLGF、AD-shuttle-scramble和AD-shuttle)。经过HEK 293细胞包装,最终获得3株病毒颗粒,病毒滴度分别为1.5×1011、1.6×1011和1.6×1011。NCI-H 250和NCI-H 209细胞感染腺病毒颗粒48 h后,大部分细胞表达GFP,感染率接近100%;且两株细胞感染AD-shuttle-shPLGF病毒48 h后,PLGF mRNA表达水平降低(P<0.01),肿瘤细胞侵袭能力明显下降(P<0.01)。结论携带shRNA的腺病毒表达载体可以代替电转、脂质体介导等方法,使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。

关键词： RNA干扰 shRNA 腺病毒载体悬浮细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用二维电泳和质谱技术鉴定乳腺癌相关蛋白

引用

中国现代医学杂志 2011年第1期21卷 23-27页

作者：蔡鑫泽乔莹陈洋于爽李丰姜奕中国医科大学附属一院中心实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室(卫生部细胞生物学重点实验室) 辽宁沈阳110001

目的通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7... 详细信息

目的通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7中明显差异表达的蛋白点,进行质谱和生物信息学分析。结果建立了MCF7和MCF10A两种细胞系的二维凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为(960±44)和(1 128±29);对选择的35个差异表达蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中16个点,包括过氧化氢酶-6(PRDX6)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)、60 kD热休克蛋白(CH60)、谷氨酰胺转移酶-2(TGM2)等。结论乳腺癌细胞MCF7相对于乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白可能作为乳腺癌早期诊断和预后评价的候选肿瘤标志物。

关键词：蛋白质组学乳腺癌肿瘤标志物二维凝胶电泳

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析

引用

基础医学与临床 2013年第11期33卷 1391-1397页

作者：庞希宁李彩虹施萍王竟刘晓玉张涛张殿宝赵峰中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-... 详细信息

目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-PCR检测进行验证。结果筛选出差异表达基因104个(FDR≤0.001和|log2Ratio|≥1),其中上调差异表达基因56个,下调差异表达基因48个;GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异(P≤0.05);KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异(Q≤0.05),RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致。结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化,显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复过程中具有重要作用。

关键词：表皮生长因子人羊膜间充质干细胞基因表达谱测序生物信息学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人羊膜间充质干细胞储备库的构建

引用

基础医学与临床 2013年第11期33卷 1410-1417页

作者：庞希宁刘晓玉施萍王竟林学文张殿宝谭丽萍中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使... 详细信息

目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力,细胞周期等鉴定其生物学特性,将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价。结果羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染。细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105,不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR。在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化。细胞大多数处于G1期,仅少数细胞处于活跃的增殖期G2;建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合(P<0.05)。结论所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞。羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性。初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系。

关键词：人羊膜间充质干细胞生物学特性细胞分化表面标记细胞库

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

EGF促进人羊膜间充质干细胞迁移上调MMP14和IL-1β表达

引用

基础医学与临床 2013年第11期33卷 1404-1409页

作者：谭丽萍庞希宁施萍王竟王喜良中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肛肠外科辽宁沈阳110001

目的研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制。方法贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF... 详细信息

目的研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制。方法贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF对hAMSCs迁移能力影响;Western blot和real-time PCR检测MMP14和IL-1β蛋白及mRNA表达。结果原代细胞表达间充质干细胞表面标记CD44,不表达CD45;不同浓度EGF作用hAMSCs 24 h 100μg/L EGF迁移指数最大为2.0;100μg/L EGF作用hAMSCs12、24和48 h迁移指数为1.6、2.0和1.7;MMP14蛋白表达12 h为(0.81±0.20)显著高于对照组的(0.63±0.12)(P<0.05);IL-1β蛋白表达48 h为(0.55±0.16)显著高于对照组的(0.30±0.05)(P<0.05)MMP14和IL-1βmRNA表达上调显著高于对照组(P<0.05)。结论 EGF促进hAMSCs迁移上调MMP14和IL-1β表达;MMP14、IL-1β和EGF协同激活MAPK/ERK、P13K/AKT信号通路参与调控EGF促进hAMSCs迁移。

关键词：基质金属蛋白酶14 白细胞介素1β 表皮生长因子羊膜间充质干细胞细胞迁移

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

胃癌组织MUC黏蛋白表达及其与胃癌分型关系的研究进展

引用

中华肿瘤防治杂志 2008年第13期15卷 1032-1035页

作者：陈亚男姜懿凌罗阳中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学 91期1班辽宁沈阳110001

目的:阐述黏蛋白在胃癌中表达变化的临床病理意义,探讨黏蛋白标记的胃癌分型在研究胃癌的生物学行为和发病机制方面的意义。方法:通过Pubmed文献检索系统、万方数据资源系统和维普信息资源系统,选择了43篇研究文献,内容涉及黏蛋白的研... 详细信息

目的:阐述黏蛋白在胃癌中表达变化的临床病理意义,探讨黏蛋白标记的胃癌分型在研究胃癌的生物学行为和发病机制方面的意义。方法:通过Pubmed文献检索系统、万方数据资源系统和维普信息资源系统,选择了43篇研究文献,内容涉及黏蛋白的研究概况,黏蛋白在胃癌中表达的变化以及黏蛋白标记的胃癌分型的最新研究进展。结果:黏蛋白MUC1、MUC5AC、MUC6在正常胃黏膜中呈强阳性表达而MUC2则不表达。在正常胃黏膜向肠上皮化生、胃癌演进过程中,MUC1、MUC5AC、MUC6表达呈下调趋势而MUC2表达上调。以黏蛋白为标记可对胃癌进行重新分型,弥补了Lauren分型的不足。结论:黏蛋白MUC质和量的变化可以反映胃上皮细胞癌变的情况。黏蛋白标记的胃癌分型有助于进一步研究胃癌的生物学行为及潜在的分子机制。

关键词：胃肿瘤/病理学黏蛋白类肿瘤标记生物学综述文献

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一磷酸腺苷激酶在肿瘤细胞增殖及自噬中的研究进展

引用

解剖科学进展 2010年第6期16卷 578-580,582页

作者：耿琛琛李丹妮李丰中国医科大学中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室暨医学细胞生物学教育部重点实验室辽宁沈阳110001

一磷酸腺苷激酶(AMPK)以异质三联体形式存在于所有真核细胞内,是维持机体能量稳态的感受器。AMPK的激活主要来自avicinD、LKB1等,而AMPK主要激活底物是TSC2、p53和p27kip1,其中TSC2是mTOR的负性调控元件,它的激活可以间接地抑制细胞增殖... 详细信息

一磷酸腺苷激酶(AMPK)以异质三联体形式存在于所有真核细胞内,是维持机体能量稳态的感受器。AMPK的激活主要来自avicinD、LKB1等,而AMPK主要激活底物是TSC2、p53和p27kip1,其中TSC2是mTOR的负性调控元件,它的激活可以间接地抑制细胞增殖;p53也可抑制mTOR通路,中断细胞增殖;活化的p27kip1可以诱导自噬,促进细胞死亡,抑制肿瘤生长。这些都表明AMPK在肿瘤细胞增殖和自噬中发挥作用。由于在许多肿瘤细胞中可以发现失活的AMPK,因而研究AMPK与肿瘤发展及细胞自噬的关系,将可能为肿瘤治疗找到新靶点。

关键词：肿瘤细胞增殖细胞自噬腺苷激酶磷酸 p27^kip1 AMPK 抑制细胞增殖抑制肿瘤生长

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗人大肠癌单链抗体与绿色荧光蛋白融合基因的构建和表达

引用

解剖科学进展 2012年第3期18卷 208-211页

作者：陈航廖生俊王蒴方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001 沈阳农业大学辽宁沈阳110001

目的构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体。方法将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a(+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌BL21中进行融合基因ND-1-scFv/GFP诱导表达。... 详细信息

目的构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体。方法将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a(+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌BL21中进行融合基因ND-1-scFv/GFP诱导表达。Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化,免疫印迹和荧光显微镜方法验证融合蛋白的表达。结果 ND-1scFv被克隆到表达载体pET28a(+)-GFP中,诱导表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量为58kDa。SDS-PAGE灰度扫描结果显示纯化后的蛋白纯度为90%,荧光显微镜检测显示,表达有目的蛋白的大肠杆菌BL21具有明显的绿色荧光。结论成功构建并表达融合基因ND-1-scFv/GFP,为该单抗的肿瘤特异成像研究奠定了基础。E.

关键词： ND-1单克隆抗体单链抗体Fv 绿色荧光蛋白大肠癌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

引用

中国医科大学学报 2011年第11期40卷 961-963,978页

作者：顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟中国医科大学附属盛京医院实验研究中心沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室细胞生物学教育部、卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pG... 详细信息

目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。

关键词： LMO1 截短突变体质粒原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：