检索结果-内蒙古大学图书馆

癌症 2002年第7期21卷 740-744页

作者：方瑾宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

背景与目的:单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特点,日益成为肿瘤诊断和治疗的良好导向载体。本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的重链可变区VH和轻链可变区VL基因借助一短肽序列(Gly4Ser)3进行重组... 详细信息

背景与目的:单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特点,日益成为肿瘤诊断和治疗的良好导向载体。本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的重链可变区VH和轻链可变区VL基因借助一短肽序列(Gly4Ser)3进行重组,构建单链抗体基因ND-1scFv,并使其在大肠杆菌中表达。方法:采用RT-PCR技术从能够分泌ND-1单抗的鼠杂交瘤细胞中扩增VH和VL基因,通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,体外构建ND-1scFv基因,经过常规转化和筛选,将其克隆至PET-28a(+)表达载体,由IPTG诱导在大肠杆菌BL21中表达为ND-1scFv与His-Tag的融合蛋白。表达产物用Ni-NTAresin亲和层析方法纯化,并采用ELISA方法检测其免疫活性。结果:序列分析表明,ND-1scFv基因全长732bp,VH354bp位于上游;VL330bp位于下游。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子量30kDa,与预期结果一致。scFv表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯化后蛋白纯度达94%。ELISA结果显示scFv保留了与亲本抗体ND-1相似的免疫活性,结论:成功地构建了抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv,并在大肠杆菌中获得了较高水平的功能性表达。

关键词：克隆单链抗体大肠肿瘤基因表达

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Cyclin G2抑制肿瘤细胞增殖的研究

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癌症 2002年第6期21卷 577-581页

作者：田玉楼刘芙蓉刘洁姜莉罗阳张学中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

背景与目的:周期蛋白(cyclin)是调节细胞周期活动的重要蛋白质,是细胞增殖的正调节因子。CyclinG2可能不同于其它周期蛋白,其表达可被DNA损伤和抑癌基因VHL诱导,对细胞增殖可能起负性调节作用。此外,我们在对口腔鳞癌进行基因表达谱研... 详细信息

背景与目的:周期蛋白(cyclin)是调节细胞周期活动的重要蛋白质,是细胞增殖的正调节因子。CyclinG2可能不同于其它周期蛋白,其表达可被DNA损伤和抑癌基因VHL诱导,对细胞增殖可能起负性调节作用。此外,我们在对口腔鳞癌进行基因表达谱研究时发现,癌组织中cyclinG2表达降低。本研究的目的是为了弄清cyclinG2表达究竟是促进还是抑制肿瘤细胞体外增殖。方法:应用RT-PCR扩增获得cyclinG2基因cDNA,将其插入到真核表达载体pIRESneo的BamHI和BstXI酶切位点处,获得重组表达质粒,命名为pIRES-G2。通过脂质体介导将pIRES-G2转染肿瘤细胞系HeLa,经G418筛选2周,观察细胞集落形成情况并计数形成的集落数。结果:实验组集落的数量显著少于对照组,而且所形成的集落大小也明显比对照组小,细胞皱缩、形态不规则,胞质内颗粒增多、出现空泡。pIRESneo空载体对照组的集落数为76.7±24.8;实验组的集落数为18±10.4,占对照组的23.4%。结论:CyclinG2基因高表达对HeLa细胞的体外增殖和生长有显著抑制作用。

关键词： CyclinG2 肿瘤细胞增殖基因转染

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小鼠DOC-1R反义重组载体的构建及表达的研究

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癌症 2002年第3期21卷 240-244页

作者：周伟强姜莉生秀杰张学中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

背景与目的:DOC-1R(deletedinoralcancer-1related)基因是一个候选的抑癌基因,它与CDK2特异性结合后,抑制CDK2与cyclin形成复合物,进而对细胞周期进行调控。本研究拟构建DOC-1R反义重组质粒,并研究该基因表达受到抑制后对正常细胞增殖... 详细信息

背景与目的:DOC-1R(deletedinoralcancer-1related)基因是一个候选的抑癌基因,它与CDK2特异性结合后,抑制CDK2与cyclin形成复合物,进而对细胞周期进行调控。本研究拟构建DOC-1R反义重组质粒,并研究该基因表达受到抑制后对正常细胞增殖产生的影响。方法:小鼠DOC-1R基因筛选后构建pcDNA3-DOC-1R反义重组质粒,经细胞转染,通过细胞增殖能力测定、软琼脂培养观察DOC-1R对细胞生长状态的影响。结果:小鼠DOC-1R基因转染的NIH3T3细胞较空载体转染的细胞生长速度有较明显的差异。正义重组体pcDNA3-DOC-1R+可明显抑制细胞增殖,而反义重组体pcDNA3-DOC-1R-则促进细胞的增殖。在软琼脂培养中,正义重组体在软琼脂培养基中成集落能力下降,一方面克隆形成率下降,另一方面形成的集落也普遍较小;而反义重组体明显增加了成集落能力,克隆形成率也较正义重组体有明显的增加。结论:小鼠DOC-1R基因可明显抑制细胞的生长速度和成集落能力,这一作用有助于进行正常细胞生长、增殖规律和肿瘤治疗、预防方面的研究。

关键词： DOC-1R 细胞周期调控反义核酸小鼠重组载体肿瘤

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基质金属蛋白酶及其组织抑制物在卵巢肿瘤中的表达

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癌症 2002年第1期21卷 91-94页

作者：蔡威宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

背景与目的:有研究表明,基质金属蛋白酶(metalloproteinases,MMPs)与肿瘤的发生发展,尤其是肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关。本研究探讨基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其组织抑制物(tissueinhibitorofmetalloproteinases-2,TIMP-2)与卵巢癌侵袭及卵巢癌生物学行为的关系。方法:采用免疫组化S-P法对128例卵巢肿瘤组织MMP-2、MMP-9及TIMP-2蛋白表达进行检测,并用χ2检验进行统计学分析。结果:免疫组化结果表明,MMP-2、MMP-9及TIMP-2在卵巢癌组织中阳性表达率明显高于卵巢囊腺瘤(P<0.01)。MMP-2及MMP-9在卵巢癌临床分期Ⅲ-Ⅳ期病例中的阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期者,病理学分级3级病例中的表达率明显高于1-2级者(P<0.01),有淋巴结转移病例中的表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.01)。而TIMP-2的阳性表达与MMP-2及MMP-9相反。结论:MMP-2、MMP-9及TIMP-2的表达与卵巢癌的临床分期、病理分级及淋巴结转移有关,MMP-2及MMP-9蛋白的高表达可作为判断卵巢癌具有转移倾向的临床参考指标。

关键词：卵巢肿瘤基质金属蛋白酶金属蛋白酶组织抑制物免疫组织化学

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抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达

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世界华人消化杂志 2006年第24期14卷 2395-2400页

作者：严丹丹杨福辉方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁省沈阳市110001

目的:构建抗人大肠癌重组双价单链抗体ND- 1sc(Fv)2的融合基因,并在大肠杆菌中表达．方法:采用基因重组技术借助GGGGS Linker序列,将2个相同的ND-1scFv基因共价连接,构建pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2表达载体,并在大肠杆菌中表达双价单链抗体... 详细信息

目的:构建抗人大肠癌重组双价单链抗体ND- 1sc(Fv)2的融合基因,并在大肠杆菌中表达．方法:采用基因重组技术借助GGGGS Linker序列,将2个相同的ND-1scFv基因共价连接,构建pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2表达载体,并在大肠杆菌中表达双价单链抗体的融合蛋白．表达产物用Ni-NTA resin亲和层析方法纯化,SDS- PAGE和Western blotting检测表达的目的蛋白．间接免疫荧光和ELISA检测抗体的免疫活性．结果:序列测定表明:ND-1sc(Fv)2基因全长1473 bp,包含了2个729 bp的scFv序列和15 bp的GGGGS序列．SDS-PAGE和Western blotting检测显示,融合蛋白的Mr55 000,与预期值一致．ND-1sc(Fv)2表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯化后蛋白纯度达90％,间接免疫荧光及ELISA检测表明,ND-1sc(Fv)2保留了亲本抗体的免疫活性,对表达有相应抗原的靶细胞具有特异结合活性,其免疫活性明显高于ND-1scFv．结论:成功地构建了抗人大肠癌双价单链抗体ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌中高效表达．融合蛋白具有良好的免疫活性．

关键词：双价单链抗体 ND-1 大肠癌免疫活性

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人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 437-440页

作者：刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 详细信息

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入*** BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。

关键词： P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白

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诱导胚胎干细胞向神经细胞分化方法的研究与探讨

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细胞生物学杂志 2004年第2期26卷 145-148页

作者：顾文佳庞希宁中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室发育生物学教研室沈阳110001

胚胎干细胞(ES细胞)是一种能够在体外进行不断自我更新,并具有多种分化潜能的细胞。胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展迅速,相关实验技术和理论也不断发展。总结了近年来各国研究者诱导小鼠和人胚胎干细胞向神经细胞分化的方法,... 详细信息

胚胎干细胞(ES细胞)是一种能够在体外进行不断自我更新,并具有多种分化潜能的细胞。胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展迅速,相关实验技术和理论也不断发展。总结了近年来各国研究者诱导小鼠和人胚胎干细胞向神经细胞分化的方法,分析了一些方法的原理并初步探讨其相关的分子机制,并提出一些可行性新方法。胚胎干细胞向神经细胞诱导分化因其体外的可操作性、来源的广泛性及质量可控性将有可能成为临床上治疗神经系统疾病的有效方法。

关键词：诱导胚胎干细胞神经细胞分化 ES细胞神经系统疾病

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Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 202-206页

作者：张红艳王春玉姚远李彦姝王迪李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 辽宁省人民医院消化内科辽宁沈阳110016

目的:构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内表达。方法:以pcDNA3.1-Smad2/3和pGEX2T-Smad4质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Smad2/3/4全长编码基因,亚克隆至含有pcDNA3.1myc-HisA标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测。结果:Smad2/3/4全长基因序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1myc-HisA中,酶切鉴定片段为1 401、1 275和1 656 bp。Western blotting检测到融合蛋白pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4的表达。结论:成功构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达。

关键词： Smad 蛋白免疫印记融合蛋白

来源：评论

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缺氧内皮细胞介导肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子mRNA表达

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中华病理学杂志 1998年第6期27卷 425-428页

作者：李丰张燕车东媛邓仲端中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室同济医科大学病理学教研室

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和... 详细信息

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养的肺动脉平滑肌细胞有ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ弱表达；内皮细胞条件培养液明显增加肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达，两者分别为无血清培养组的１．８倍和１．７倍（Ｐ＜０．０１），为常氧内皮细胞条件培养液培养组的１．４倍和１．５倍（Ｐ＜０．０１）。结论缺氧时肺动脉内皮细胞可以介导肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ的自分泌。

关键词：缺氧肺动脉内皮细胞 PASMC PDGF mRNA

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GST／RIPX融合蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

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中国医科大学学报 2010年第12期39卷 987-988,994页

作者：王孝会王桂玲中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建GST/RIPX融合蛋白基因表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RIPX为模板,通过BamH1和Xho1酶切位点将RIPX定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性... 详细信息

目的构建GST/RIPX融合蛋白基因表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RIPX为模板,通过BamH1和Xho1酶切位点将RIPX定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入化*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-2-RIPX,并用SDS-PAGE方法证实了GST/RIPX融合蛋白的表达。结论成功构建了RIPX原核表达载体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化RIPX蛋白和研究RIPX的生物学功能奠定了基础。

关键词：质粒原核表达融合蛋白 RIPX

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