检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2008年第7期28卷 702-706页

作者：马怡然尚德淑赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室发育生物学教研室

目的为进一步研究T细胞在阿尔茨海默病(AD)患者脑内发挥的作用,探讨CCR5在6T-CEM穿过人脑微血管内皮细胞(HBMECs)过程中所发挥的生物学功能。方法应用免疫荧光和Western blot等技术,集中探讨了HBMECs膜受体CCR5在6T-CEM细胞穿过HBMECs... 详细信息

目的为进一步研究T细胞在阿尔茨海默病(AD)患者脑内发挥的作用,探讨CCR5在6T-CEM穿过人脑微血管内皮细胞(HBMECs)过程中所发挥的生物学功能。方法应用免疫荧光和Western blot等技术,集中探讨了HBMECs膜受体CCR5在6T-CEM细胞穿过HBMECs过程中作用。结果在6T-CEM细胞与HBMECs单层单独孵育过程中,引起HBMECs膜受体CCR5表达变化;HBMECs膜受体CCR5的高表达使6T-CEM细胞穿过HBMECs单层能力增强。结论HBMECs膜受体CCR5参与了6T-CEM细胞穿过HBMECs单层过程。

关键词：趋化因子受体5 人T淋巴细胞白血病细胞系人脑微血管内皮细胞

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内质网分子伴侣GRP78在小鼠脑发育过程中的时空表达

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实验生物学报 2003年第2期36卷 137-144页

作者：李波陈誉华中国医科大学发育生物学研究室沈阳110001 卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑... 详细信息

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑组织中GRP78的表达和定位分布随时间变化的情况。结果发现GRP78在小鼠脑发育过程中呈时空性表达:胚胎早期表达较高,胚胎发育末期逐渐下降,出生后逐渐升高,至生后一周时达到成年鼠的水平;在胚胎期GRP78蛋白在脑组织的表达呈现从端脑到后脑逐渐降低的趋势。研究结果还表明GRP78蛋白的免疫染色阳性产物在神经细胞中出现的时间早于神经胶质细胞。这些首次观察到的结果提示GRP78与脑的早期发生和形态建成有一定的关系。

关键词：内质网分子伴侣GRP78 脑发育过程时空性表达葡萄糖调节蛋白形态建成

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hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定

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中国医科大学学报 2012年第1期41卷 24-27页

作者：刘彩红王利利冯艳玲朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室沈阳110001

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过S... 详细信息

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X-1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力。结果酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin1A、B蛋白亚型的结合能力。结论成功构建pGEX-5X-1-β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础。

关键词： hβ—arrestin1 克隆重组亚型表达蛋白互作

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SCG10基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

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中国组织化学与细胞化学杂志 2011年第3期20卷 271-274页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李丰中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。... 详细信息

目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-SCG10在HEK293细胞内定位。结果 SCG10全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小540bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为48kD。pEGFP-SCG10在细胞内定位以细胞浆为主,在细胞核少量表达。结论成功构建了SCG10全长基因真核表达载体,pEGFP-SCG10蛋白主要定位于HEK293细胞浆内。

关键词： SCG10 Westernblot 质粒构建

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高GC hTwist融合蛋白载体构建及其表达条件优化

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中国医科大学学报 2012年第3期41卷 204-207页

作者：王利利刘彩红朱亚勤教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的构建高GC基因Twist融合蛋白表达载体;高效表达并纯化GST/TWIST融合蛋白,为GST-Pulldown等实验做准备。从而进一步研究其生物学功能。方法以胃癌细胞系SGM7901 cDNA为模板,依据高GC含量基因Twist分子结构特点和高GC含量基因引物设计... 详细信息

目的构建高GC基因Twist融合蛋白表达载体;高效表达并纯化GST/TWIST融合蛋白,为GST-Pulldown等实验做准备。从而进一步研究其生物学功能。方法以胃癌细胞系SGM7901 cDNA为模板,依据高GC含量基因Twist分子结构特点和高GC含量基因引物设计策略,合成PCR引物。本实验通过分析各种DNA聚合酶不同扩增效率及特异性,选择适合高GC基因扩增的DNA聚合酶,优化反应体系的离子强度,并且结合改良降落PCR等综合策略的实施,比较不同策略下高GC含量基因Twist PCR产物的特异性及效率,尝试高效扩增特异的高GC含量Twist全长编码基因,通过Bam HI和Xho I双酶切位点将Twist全长定向插入pGEX-5X-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-Twist,并转化*** DH5α,筛选富含GC的Twist阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测序正确后,转化*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果通过Platinum pfx DNA聚合酶配合PCRx加强缓冲液的使用及改良降落PCR策略的实施,独立可重复实验证实:我们获得了高效特异的高GC Twist全长编码基因,成功构建原核表达质粒pGEX-5X-1-Twist。诱导表达的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定,检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化,得到高纯度的融合蛋白。结论上述策略的实施可以成功完成高GC Twist原核表达载体的构建,并确定GST/TWIST融合蛋白表达的最适条件,获得了高纯度融合蛋白,为进一步研究TWIST蛋白的生物学功能奠定基础。

关键词：高GC hTwist 克隆融合蛋白原核表达

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PAK4促进人乳腺肿瘤细胞G1/S期转化机制探讨

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中华肿瘤防治杂志 2015年第3期22卷 165-168页

作者：李彦姝张红艳刘芙蓉李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的研究p21蛋白激活激酶4(p21protein activated kinase 4,PAK4)对人乳腺肿瘤细胞生长的影响。方法人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染不同剂量PAK4真核表达载体或慢病毒敲除PAK4表达,收集细胞提取蛋白进行蛋白质印迹法检测PAK4和Cyclin D1表达... 详细信息

目的研究p21蛋白激活激酶4(p21protein activated kinase 4,PAK4)对人乳腺肿瘤细胞生长的影响。方法人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染不同剂量PAK4真核表达载体或慢病毒敲除PAK4表达,收集细胞提取蛋白进行蛋白质印迹法检测PAK4和Cyclin D1表达。流式细胞仪检测PAK4过表达和敲除后对细胞生长周期影响。结果过表达PAK4明显上调人乳腺肿瘤细胞MCF-7中的Cyclin D1蛋白表达,引起G1期细胞减少(从80%下降到55%),导致G1/S期转化细胞增多。慢病毒敲除人乳腺肿瘤细胞MCF-7中的PAK4表达降低了的Cyclin D1蛋白表达,使G1期的细胞增加12%,而S期的细胞下调7%。结论 PAK4调节Cyclin D1表达,促进人乳腺肿瘤细胞MCF-7G1/S期转化,揭示PAK4可能是重要的人乳腺肿瘤治疗靶点。

关键词：乳腺肿瘤 p21蛋白激活激酶4 Cyclin D1 细胞周期慢病毒

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应用DHPLC技术检测非缺失型DMD致病基因的新突变

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中华儿科杂志 2007年第6期45卷 413-416页

作者：陈亚男周鑫金春莲徐岩林长坤曹丽华李宁张学罗阳中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因... 详细信息

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因组 DNA 为模板,通过 PCR反应,分别扩增 dystrophin 基因外显子及侧翼序列,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行突变筛查,对 DHPLC 峰形变异的外显子片段行 PCR 产物直接测序,确定突变的具体位点和类型。结果筛查了包括2个缺失热点区 dystrophin 基因的68个外显子和3′UTR 部分片段,分别在4例患儿中检测出该基因的4种致病突变:c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA,c.8656C>T 和 c.8608C>T。前两例引起移码突变分别导致 ***2270MeffsX9和 ***1654LysfsX5,后两例为无义突变分别导致 p.R2886X 和 p.R2870X。其中 c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA 和 c.8656C>T 为文献未曾报道的新突变。结论 DHPLC 可以作为有效地筛查 DMD 微小突变的检测方法。

关键词：肌营养不良,杜氏色谱法,高效液相突变

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移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病的研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2007年第1期16卷 104-109页

作者：刘弘光夏鲲刘晓玉庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室

目的通过移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的方法试治疗大鼠糖尿病。方法贴壁生长的MSC与大鼠胰腺的细胞共培养以检测其向胰岛细胞分化的潜能。并将体外培养扩增的MSC移植入糖尿病大鼠体内,观测其能否改善糖尿病病情及... 详细信息

目的通过移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的方法试治疗大鼠糖尿病。方法贴壁生长的MSC与大鼠胰腺的细胞共培养以检测其向胰岛细胞分化的潜能。并将体外培养扩增的MSC移植入糖尿病大鼠体内,观测其能否改善糖尿病病情及其在大鼠体内微环境中的分化情况。结果共培养法可使MSC分化为胰岛样细胞。对大鼠的MSC移植能明显缓解糖尿病病情。结论MSC移植的方法对大鼠糖尿病有一定的治疗作用。

关键词：骨髓间充质干细胞胰腺细胞共培养糖尿病细胞移植

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爪蟾p21活化激酶2参与卵母细胞胞质分裂过程不依赖于Cdc42

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生物化学与生物物理进展 2007年第6期34卷 653-658页

作者：程大也梁彬李丰中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室中国医科大学附属第一医院输血科沈阳110001 中国医科大学高等职业技术学院沈阳110001

研究p21活化激酶2(p21-activated kinase2,PAK2)在卵母细胞成熟过程中的作用.以爪蟾卵母细胞为模型,分别向爪蟾卵母细胞显微注射PAK2-N端(PAK2-N-terminal,PAK2-NT)和PAK2-N端突变体(PAK2-N-terminal mutation,PAK2-NTm)mRNA,荧光显微镜下观察胚泡破裂发生.采用共聚焦显微镜,时间延迟摄影法观察正常卵母细胞、PAK2-NTmRNA注射组和PAK2-NTm mRNA注射组卵母细胞胞质分裂、极体形成及与Cdc42活性的关系.结果表明,PAK2-NTmRNA和PAK2-NTm mRNA注射组的卵母细胞与正常卵母细胞胚泡破裂发生相似,但PAK2-NTmRNA和PAK2-NTm mRNA注射组未见胞质分裂和极体形成.结果提示,PAK2参与卵母细胞胞质分裂和极体形成可能不依赖于Cdc42的调节过程.

关键词： p21活化激酶爪蟾卵母细胞胞质分裂极体 Cdc42

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外泌体与乳腺癌的相关性研究进展

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生命科学 2018年第1期30卷 82-86页

作者：何晨风邢瑶韩馥伊李洋中国医科大学第二临床学院临床医学沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室/教育部医学细胞生物学重点实验室/细胞生物学教研室沈阳110122

外泌体在发现之初,被认为是细胞排泄废物。而如今外泌体的功能受到了医学界的广泛关注,尤其是在肿瘤的转移、早期诊断、分析预后以及靶向治疗等方面的功能成为研究热点。外泌体与乳腺癌关系的相关研究已被陆续报道。研究表明,外泌体对... 详细信息

外泌体在发现之初,被认为是细胞排泄废物。而如今外泌体的功能受到了医学界的广泛关注,尤其是在肿瘤的转移、早期诊断、分析预后以及靶向治疗等方面的功能成为研究热点。外泌体与乳腺癌关系的相关研究已被陆续报道。研究表明,外泌体对乳腺癌的发生、发展、早期诊断、临床治疗、药物抵抗、预后评估等有着重要的意义。现对外泌体在乳腺癌诊断、转移、治疗方面的研究进展进行综述。

关键词：外泌体乳腺癌转移生物标志物治疗

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