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细胞与分子免疫学杂志 2013年第4期29卷 414-417页

作者：陈航方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠... 详细信息

目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,GSTrap FF亲和层析纯化出具有生物活性的NspA融合蛋白。采用纯化得到的NspA融合蛋白检测流脑恢复期患者血清中的抗NspA抗体。结果成功表达了功能性NspA蛋白,相对分子质量(Mr)为44 000。并用NspA融合蛋白检测到患者恢复期血清中存在有抗NspA抗体,且滴度为1∶40时,阳性率为90%。结论成功表达了NspA重组蛋白,并检测到自然感染流脑患者恢复期血清中的NspA抗体。

关键词：脑膜炎奈瑟氏菌脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A抗体血清学分析

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激光共聚焦扫描显微镜观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞内的共定位

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电子显微学报 2011年第3期30卷 244-249页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞内的共定位。方法:在有无雌激素或拮抗剂刺激下,利用激光共聚焦扫描显微镜观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞系MCF-7中的共定位。结果:在无雌激素刺激下两者共定位于细胞浆和细胞核,而在雌激素刺激后两者则共... 详细信息

目的:观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞内的共定位。方法:在有无雌激素或拮抗剂刺激下,利用激光共聚焦扫描显微镜观察ERα和MTA1在乳腺癌细胞系MCF-7中的共定位。结果:在无雌激素刺激下两者共定位于细胞浆和细胞核,而在雌激素刺激后两者则共定位于细胞核内。在雌激素受体拮抗剂刺激下,两者在细胞浆内定位增加。结论:雌激素和雌激素受体拮抗剂刺激乳腺癌细胞改变ERα和MTA1的共定位。

关键词： ERα MTA1 共定位激光共聚焦扫描显微镜

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人SCG10基因原核质粒构建及其重组蛋白表达

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 491-493页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李家滨李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用... 详细信息

目的构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至pGEX-5X-1载体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆菌中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10融合蛋白表达,利用GST-beads纯化诱导的融合蛋白,经Western blot印迹鉴定。结果 SCG10全长编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在BL21大肠杆菌中IPTG诱导融合蛋白的表达分子量为47 kDa,成功纯化出GST及GST-SCG10蛋白,Wstern blot检测到蛋白表达。结论构建了SCG10基因原核表达载体,鉴定了GST-SCG10融合蛋白表达。

关键词： SCG10蛋白纯化融合蛋白 Western blot

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Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 202-206页

作者：张红艳王春玉姚远李彦姝王迪李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 辽宁省人民医院消化内科辽宁沈阳110016

目的:构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内表达。方法:以pcDNA3.1-Smad2/3和pGEX2T-Smad4质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Smad2/3/4全长编码基因,亚克隆至含有pcDNA3.1myc-HisA标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测。结果:Smad2/3/4全长基因序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1myc-HisA中,酶切鉴定片段为1 401、1 275和1 656 bp。Western blotting检测到融合蛋白pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4的表达。结论:成功构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达。

关键词： Smad 蛋白免疫印记融合蛋白

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核酸适配体在三阴性乳腺癌诊疗中的研究进展

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中国生物工程杂志 2022年第7期42卷 62-68页

作者：姚芷昕李婉明中国医科大学生命科学学院沈阳110122 中国医科大学生命科学学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室分子细胞生物学教研室沈阳110122

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性程度极高,且发病机制复杂,是乳腺癌分型中预后最差的类型,但目前其早期筛查和诊断的敏感度仍处在较低水平。因此,亟须通过应用具有高度特异性的肿瘤标... 详细信息

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性程度极高,且发病机制复杂,是乳腺癌分型中预后最差的类型,但目前其早期筛查和诊断的敏感度仍处在较低水平。因此,亟须通过应用具有高度特异性的肿瘤标志物分子探针,实现其早期诊断和治疗。核酸适配体是在人工合成的随机单链核酸序列文库中,通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选获得的寡核苷酸序列。高效的分子识别能力使其成为最具潜力的生物靶向分子,在肿瘤诊断及治疗中具有广阔的应用前景。目前,通过筛选已获得了多种靶向TNBC细胞的核酸适配体。重点综述基于SELEX及其衍生技术筛选TNBC相关核酸适配体的新进展,以及核酸适配体在TNBC诊断和治疗中的应用,为相关研究提供参考。

关键词：三阴性乳腺癌核酸适配体指数富集的配体系统进化技术肿瘤诊断肿瘤治疗

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SCG10基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

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中国组织化学与细胞化学杂志 2011年第3期20卷 271-274页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李丰中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。... 详细信息

目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-SCG10在HEK293细胞内定位。结果 SCG10全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小540bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为48kD。pEGFP-SCG10在细胞内定位以细胞浆为主,在细胞核少量表达。结论成功构建了SCG10全长基因真核表达载体,pEGFP-SCG10蛋白主要定位于HEK293细胞浆内。

关键词： SCG10 Westernblot 质粒构建

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转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第2期24卷 112-116页

作者：李婉明周琳琳方瑾中国医科大学基础医学部卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110122

目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性。方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别... 详细信息

目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性。方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别在完全培养基和人血浆中孵育0.5、1、1.5、2、3、4、6 h,琼脂糖凝胶电泳检测W14的生物稳定性;用2、4、8、10μmol/L的W14处理LoVo细胞24、48、72 h,MTS实验测定W14的细胞毒性。结果:W14在不同温度和血浆环境中以及不同温度条件下都能特异性地识别和结合靶细胞LoVo,能稳定地存在于血浆中6 h不发生降解,且对细胞没有明显的毒性作用。结论:转移性大肠癌特异性核酸适配子W14具有良好的适应能力和特异性结合能力,有较好的生物稳定性和低毒性,适应于人体内应用。

关键词：核酸适配子 W14 大肠癌 LoVo细胞生物活性稳定性

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自噬的调控通路和肿瘤

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生命科学 2011年第1期23卷 19-25页

作者：张秀春李丹妮李丰中国医科大学临床医药学院沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

自噬是指胞浆内大分子物质和细胞器在膜包囊泡中大量降解的生物学过程,其具有独特的分子机制、形态改变和特有的调控通路,作为各种调控通路交汇点——mTOR复合体和Beclin1复合体发挥了至关重要的作用。对于人体而言,自噬具有维持细胞自... 详细信息

自噬是指胞浆内大分子物质和细胞器在膜包囊泡中大量降解的生物学过程,其具有独特的分子机制、形态改变和特有的调控通路,作为各种调控通路交汇点——mTOR复合体和Beclin1复合体发挥了至关重要的作用。对于人体而言,自噬具有维持细胞自我稳态,促进细胞生存的作用,然而,过度自噬则可以引起细胞死亡即"自噬性细胞死亡"。相关研究表明,自噬的这种特点与肿瘤的发生密切相关。对于肿瘤,自噬作用好似一把双刃剑,既促进其发生又抑制其形成。

关键词：自噬 mTOR Beclin1 肿瘤

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外泌体与乳腺癌的相关性研究进展

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生命科学 2018年第1期30卷 82-86页

作者：何晨风邢瑶韩馥伊李洋中国医科大学第二临床学院临床医学沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室/教育部医学细胞生物学重点实验室/细胞生物学教研室沈阳110122

外泌体在发现之初,被认为是细胞排泄废物。而如今外泌体的功能受到了医学界的广泛关注,尤其是在肿瘤的转移、早期诊断、分析预后以及靶向治疗等方面的功能成为研究热点。外泌体与乳腺癌关系的相关研究已被陆续报道。研究表明,外泌体对... 详细信息

外泌体在发现之初,被认为是细胞排泄废物。而如今外泌体的功能受到了医学界的广泛关注,尤其是在肿瘤的转移、早期诊断、分析预后以及靶向治疗等方面的功能成为研究热点。外泌体与乳腺癌关系的相关研究已被陆续报道。研究表明,外泌体对乳腺癌的发生、发展、早期诊断、临床治疗、药物抵抗、预后评估等有着重要的意义。现对外泌体在乳腺癌诊断、转移、治疗方面的研究进展进行综述。

关键词：外泌体乳腺癌转移生物标志物治疗

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ERα的辅调节因子与乳腺癌关系的研究进展

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生命科学 2011年第8期23卷 817-823页

作者：李丹妮赵越中国医科大学沈阳110001 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募... 详细信息

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募辅调节因子(共激活子和共抑制子)参与ERα介导的基因转录调控。辅调节因子主要通过乙酰化、磷酸化、甲基化等表观遗传机制参与转录调控,影响靶蛋白表达水平。ΕRα介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭转移等过程中发挥重要作用。综述在ERα介导的基因转录调控中几类辅调节因子对乳腺癌发生发展的影响。

关键词： ERα 辅调节因子转录调控表观遗传学乳腺癌

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