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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：朱戈李晓东郭冰玉柯强董明李丰中国医科大学细胞生物学系卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳市沈北新区蒲河路77号110122

PAK5在进展期肿瘤中高表达,转录因子E47能够直接抑制E钙黏素表达并引起上皮间质转化,但是PAK5与E47直接的关系尚不清楚.本研究发现,在进展期结肠癌中,PAK5介导的E47磷酸化促进结肠癌细胞上皮间质转化.PAK5能够与E47相互作用.在肝细胞生... 详细信息

PAK5在进展期肿瘤中高表达,转录因子E47能够直接抑制E钙黏素表达并引起上皮间质转化,但是PAK5与E47直接的关系尚不清楚.本研究发现,在进展期结肠癌中,PAK5介导的E47磷酸化促进结肠癌细胞上皮间质转化.PAK5能够与E47相互作用.在肝细胞生长因子刺激下,PAK5磷酸化E47的第39位丝氨酸,削弱细胞间的黏着,增强细胞的迁移和侵袭,并在小鼠转移模型中能够促进结肠癌转移.而且,E47的磷酸化促进E47以依赖于入核因子α的方式在细胞核内聚集,增加E47与E钙黏素启动子的直接结合,导致E钙黏素的转录抑制.反之,敲除PAK5阻滞了肝细胞生长因子引发的E47磷酸化,削弱E47与入核因子α的结合,减少了E47与E钙黏素启动子的直接结合.此外,本研究证实了PAK5和E47在结肠癌中密切相关.更重要的是,磷酸化的E47高表达与侵袭表型的结肠癌相关,并且在发生转移的结肠癌中发现了细胞核分布的磷酸化E47.综上结果提示,47是新发现的PAK5底物,PAK5介导的E47磷酸化促进了结肠癌的上皮间质转化和转移,E47第39位丝氨酸可能是进展期结肠癌潜在的治疗靶点.

关键词： PAK5 E47 上皮间质转化结肠癌转移

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MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

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现代肿瘤医学 2015年第2期23卷 157-162页

作者：王金行丁奇周雯雯刘柏新刘芙蓉宋鉴清中国医科大学附属第一医院检验科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21... 详细信息

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P<0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P<0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)%、(38.6±1.56)%]、siRNA组[(27.3±1.72)%、(37.3±1.59)%]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)%、(22.1±1.63)%],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P<0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P<0.05)。结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据。

关键词：多发性骨髓瘤 miR-21 SPRY2 增殖侵袭

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调节性B细胞的发现、起源和分化及激活

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医学综述 2015年第4期21卷 608-609页

作者：张怡舜陈思娇宋今丹中国医科大学附属第一医院老年病教研室沈阳110001 中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

B细胞的主要功能是分泌抗体和呈递抗原,并以此起始和活化免疫系统发挥正性调节作用。新近研究表明,一类具有负性免疫调节功能的B细胞亚群——调节性B细胞(Gregs)可通过细胞间直接接触和分泌白细胞介素10等方式下调免疫应答。Bregs在许... 详细信息

B细胞的主要功能是分泌抗体和呈递抗原,并以此起始和活化免疫系统发挥正性调节作用。新近研究表明,一类具有负性免疫调节功能的B细胞亚群——调节性B细胞(Gregs)可通过细胞间直接接触和分泌白细胞介素10等方式下调免疫应答。Bregs在许多疾病中发挥着重要的调节作用。Bregs的发现、起源、分化将为全面、深入了解自身免疫病免疫耐受的机制,及寻找更合理的自身免疫病治疗方法提供理论依据和新的研究方向。

关键词：调节性B细胞来源分化自身免疫病

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PAKs--胃癌治疗的靶点?

PAKs--胃癌治疗的靶点?

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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：李晓东王桂玲李妍刘福囝邵阳光王春玉郭启强程振国李丰中国医科大学细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳市沈北新区蒲河路77号 110122

胃癌是全世界范围内引起死亡的重要因素之一,P21-活化蛋白激酶(PAKs)作为肿瘤细胞信号网络中的关键调节因子,通过其广泛存在的下游结合蛋白或激酶底物,在胃癌进程中发挥重要作用.PAK家族共有6个成员,根据结构特点和活化方式及生物学功... 详细信息

胃癌是全世界范围内引起死亡的重要因素之一,P21-活化蛋白激酶(PAKs)作为肿瘤细胞信号网络中的关键调节因子,通过其广泛存在的下游结合蛋白或激酶底物,在胃癌进程中发挥重要作用.PAK家族共有6个成员,根据结构特点和活化方式及生物学功能的不同可分为两类：Ⅰ类包括PAK1-3,Ⅱ类包括PAK4-6.两类PAK结构上最大的差别是Ⅱ类PAK缺乏Ⅰ类PAK具有的自我抑制域.Ⅰ类PAK可被Rho家族小GTPase活化后具有激酶活性,包括Cdc42、Rac等,而Ⅱ类PAK目前没有发现经典的活化途径,并且认为在细胞中具有持续的活性.综合目前的研究进展,PAK在众多肿瘤中存在过表达、基因扩增及基因的突变.特别是PAK1和PAK4在胃癌细胞中均存在过表达且与肿瘤的TNM分期密切相关.在国际上发现了PAK新的相互作用蛋白：MORC2,SCG10,DGCR6L,Smad2/3及β-catenin等,从分子、细胞、小动物及临床组织样本等不同层次阐述了PAK通过调控细胞骨架、TGF-β/Smad及Wnt等信号通路,促进胃癌细胞的侵袭转移.表明PAK新的信号通路在胃癌发生发展过程中发挥重要作用,可能成为胃癌治疗靶点.

关键词： PAK 胃癌治疗靶点

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hβ-arrestin2基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

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现代肿瘤医学 2015年第9期23卷 1198-1200页

作者：刘彩红毛琪郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞病理生物学研究室细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 哈尔滨医科大学大庆校区医学检验与技术学院免疫教研室黑龙江大庆163319

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测... 详细信息

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测序公司检测正确后瞬时转染人胚肾细胞HEK293,Western blot检测融合蛋白表达。激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在HEK293细胞中的分布。结果:hβ-arrestin2编码序列被成功克隆至p EGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为77k Da,p EGFP-C1-β-arrestin2定位于HEK293细胞的细胞质中。结论:成功构建hβ-arrestin2基因真核表达载体,证实了融合蛋白定位在HEK293的细胞质中。

关键词： hβ-arrestin2基因蛋白质印记绿色荧光蛋白

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胚胎表皮角质形成细胞抑制CD4+/CD8+T细胞增殖的体外研究

胚胎表皮角质形成细胞抑制CD4+/CD8+T细胞增殖的体外研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王哲张殿宝刘晓玉赵峰王喜良张涛林学文王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的：建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对CD4+/CD8+T细胞增殖的作用及机制。方法：分离培养表皮KCs,并将其分为妊娠中期(孕18-24w)、妊娠晚期(孕30-33w)和成年(20-30y)组;将各组细... 详细信息

目的：建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对CD4+/CD8+T细胞增殖的作用及机制。方法：分离培养表皮KCs,并将其分为妊娠中期(孕18-24w)、妊娠晚期(孕30-33w)和成年(20-30y)组;将各组细胞分别与经CFSE标记的第三方健康献血CD4+/CD8+T细胞共培养5d,流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测各组KCs条件培养液中细胞因子IL-6的浓度。结果妊娠中期胚胎表皮KCs具有比妊娠晚期胚胎表皮KCs和成年表皮KCs更强的抑制CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力;妊娠中期胚胎表皮KCs条件培养液中IL-6的浓度明显低于妊娠晚期胚胎表皮KCs和成年表皮KCs条件培养液中IL-6的浓度;用激动剂上调胚胎表皮KCs中IL-6表达时,其抑制CD4+/CD8+T细胞增殖能力减弱。结论妊娠中期胚胎表皮KCs能够抑制CD4+/CD8+T细胞增殖,机制与其IL-6分泌不足有关,其有望成为皮肤组织修复和预防皮肤移植排斥反应发生的理想细胞来源。

关键词：表皮角质形成细胞 T细胞皮肤移植胚胎细胞因子

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胚胎表皮角质形成细胞对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用

胚胎表皮角质形成细胞对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王哲刘晓玉张殿宝王喜良张涛赵峰林学文王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的探讨不同胎龄胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用方法原代培养表皮KCs和成纤维细胞,体外应用Transwell系统观察胚胎表皮KCs共培养后真皮成纤维细胞增殖和迁移情况,应用RT-PCR和Western bl... 详细信息

目的探讨不同胎龄胚胎表皮角质形成细胞(KCs)对20-30岁成人真皮成纤维细胞功能和表型的调节作用方法原代培养表皮KCs和成纤维细胞,体外应用Transwell系统观察胚胎表皮KCs共培养后真皮成纤维细胞增殖和迁移情况,应用RT-PCR和Western blotting技术检测成纤维细胞中TGF-β家族, precollagen,collagen,MMPs和TIMPs基因和蛋白表达.结果与晚期妊娠组相比,中期妊娠胚胎表皮KCs更能促进成人真皮成纤维细胞增殖和迁移.中期妊娠胚胎表皮KCs共培养能上调成纤维细胞precollagen 1,collagen 1,TGF-β1,TGF-β2,TIMP-2和TIMP-3表达,同时下调成纤维细胞precollagen 3,collagen 3,TGF-β 3,MMP-2,MMP-3,MMP-9和MMP-14表达.晚期妊娠胚胎表皮KCs共培养能下调成纤维细胞中precollagen 3, TGF-β1,TIMP-2和TIMP-3表达,上调collagen 1,TGF-β2,TGF-β3,MMP-2,MMP-3,MMP-9和MMP-14表达.中期妊娠和晚期妊娠共培养组成纤维细胞precollagen 1,precollagen 3,collagen 1,collagen 3,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β 3,MMP-1,-3,MMP-14,TIMP-1和TIMP-2表达水平差异显著(p＜0.05).结论胎儿表皮KCs能够调节成纤维细胞表型和功能,从而在无瘢痕愈合中发挥重要作用.

关键词：表皮角质形成细胞成纤维细胞创伤愈合胎儿细胞因子

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Doc-1r蛋白参与小鼠卵母细胞成熟过程的研究

Doc-1r蛋白参与小鼠卵母细胞成熟过程的研究

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中国细胞生物学学会2015年全国学术大会

作者：刘琦申育奇郑瑞王述森罗阳中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室医学基因组学教研室沈阳110001

Doc-1r(deleted in oral cancer-1 related)为小鼠卵母细胞减数分裂调节因子,参与MⅡ期纺锤体形态结构的维持。我们的前期结果提示,Doc-1r可能参与卵母细胞成熟过程的调控。为了探讨Doc-1r蛋白在哺乳动物卵母细胞成熟过程中的作用,我们... 详细信息

Doc-1r(deleted in oral cancer-1 related)为小鼠卵母细胞减数分裂调节因子,参与MⅡ期纺锤体形态结构的维持。我们的前期结果提示,Doc-1r可能参与卵母细胞成熟过程的调控。为了探讨Doc-1r蛋白在哺乳动物卵母细胞成熟过程中的作用,我们以孕马血清常规对昆明雌性小鼠进行腹腔注射,48 h处死小鼠分离含有生发泡的第一次减数分裂双线期(GV期)卵母细胞;将约10 pl的Doc-1r抗体显微注射导入GV期卵母细胞后常规进行培养,在不同的时间点对卵母细胞的成熟情况进行观察。

关键词： Doc-1r 卵母细胞减数分裂 GVBD MⅡ期

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早期胎儿表皮microRNAs调控TGF-β/Smads传导通路促进皮肤创伤无瘢痕愈合机制的研究

早期胎儿表皮microRNAs调控TGF-β/Smads传导通路促进皮肤创伤无...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：赵峰施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究...

目的：哺乳动物妊娠早期,胎儿皮肤创伤可以快速愈合,并不伴有瘢痕和炎症反应.妊娠晚期,胎儿皮肤对创伤的反应从再生修复转变为成人的纤维化修复,并最终导致瘢痕形成.研究孕早、中期胎儿皮肤创伤无瘢痕愈合机制一直是创伤修复领域的研究重点.表皮角质形成细胞在胎儿皮肤再生过程中起到了一定的作用.妊娠早期,皮肤创伤后再上皮化过程迅速,角质形成细胞的增殖及迁移能力显著高于妊娠晚期.并且,角质形成细胞能够通过对成纤维细胞的作用进而调控瘢痕形成过程.我们通过本研究检测人孕中、晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达差异并探讨表皮角质形成细胞中差异表达的miRNAs对皮肤创伤无瘢痕愈合的作用.方法：我们应用Solexa二代测序分别检测3例孕中期及3例孕晚期胎儿表皮角质形成细胞中miRNAs的表达.在去除低质量序列并与人类基因组数据库及已知非编码RNA数据库比对后,应用mirTools 2.0网站运行miRDeep 2.0在测序结果原始数据中预测候选新miRNAs.实时定量PCR技术验证测序得到的miRNAs相对表达结果.RNAfold及UCSC预测候选新miRNAs的二级结构及其在基因组中的定位.将候选新miRNAs与已知miRNA数据库比对预测候选新miRNAs的保守性.生物信息学分析方法预测候选新miRNAs的靶基因及靶向传导通路.结果：我们检测出106个高度可能成为新miRNA的候选新miRNAs.将测序与实时定量PCR的检测结果进行相关性分析得出测序结果具有很高的可重复性,可以代表不同胎龄的人角质形成细胞中miRNAs的基本相对表达情况.通过RNAfold,我们获得候选新miRNAs前体序列的二级结构等相关信息.我们预测出25个与已知各物种miRNAs具有相同种子序列的候选新miRNAs.其中,获得了19个保守性高的候选新miRNAs,8个是与已知人miRNAs有高度保守性的.孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.不同胎龄的表皮角质形成细胞中,6对miRNAs存在成簇表达的现象.生物信息学预测差异表达的miRNAs能够广泛调控TGF-β/Smads传导通路.结论：与孕中期相比,孕晚期胎儿角质形成细胞中miRNAs的表达总体呈降低趋势.孕中期角质形成细胞中高表达的miRNAs通过显著抑制TGF-β/Smads传导通路促进胎儿无瘢痕愈合.

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛前体细胞...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王瑞施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的:观察用聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)包被的SPIO(PEI-SPIO)作为基因载体时对细胞的毒性以及将REST-siRNA、SHH-siRNA共转染hADSCs后其分化为胰岛前体细胞的能力.方法:台盼蓝染色、MTT、免疫荧光、Real-time PCR、Western-blot、普鲁士蓝染色实验结果一、hADSCs的分离和培养原代培养hADSCs 24小时后,少量细胞贴壁.传代细胞很快贴壁,细胞形态较均匀一致,呈长梭形均匀贴壁分布.二、hADSCs细胞表面抗原标志物流式细胞学鉴定流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测结果显示,hADSCs不表达CD34,主要表达CD105和CD90.表明所分离的hADSCs不包含造血干细胞及成熟的造血细胞,是一群高表达间质细胞表面分子的细胞..

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