检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：郎宏鑫施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室千细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过...

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过对孕中期和孕晚期胎儿皮肤角质形成细胞总RNA进行mRNAs和microRNAs第二代测序分析,得到孕中期胎儿皮肤中呈现高表达的microRNAs,我们发现microRNA-149在孕中期呈高表达,并通过实时荧光定量PCR对其相对表达情况进行验证.通过生物信息学分析与双荧光素酶报告基因验证mcroiRNA-149的靶基因.用Lipo2000将microRNA-149的mimic转染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),设置阴性对照组和空白对照组,通过Elisa检测细胞培养液中IL-6的表达改变.并通过Transwell实验和MTS实验检测microRNA-149mimic对HaCaT的迁移和增殖情况.并且通过Transwell将转染microRNA-149mimic的HaCaT与人真皮成纤维细胞进行共培养,检测转染microRNA-149mimic的HaCaT对人真皮成纤维细胞的迁移影响,并检测人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况.结果：实时荧光定量PCR检测到mcroiRNA-149在孕中期的表达高于孕晚期,提示可能参与胎儿皮肤无瘢痕愈合过程.通过***和TargetScan分析确定microRNA-149的靶基因为IL-6,并经过双荧光素酶报告基因实验进行验证.将microRNA-149的mimic转染HaCaT后,Elisa检测到转染后的培养液中IL-6表达明显下调,结果有统计学意义(P＜0.05).microRNA-149mimic对HaCaT的增殖无明显影响;而可以促进HaCaT的迁移,差异有统计学意义(P＜0.05).转染microRNA-149mimic的HaCaT对与其共培养的人真皮成纤维细胞的影响以及人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况结果还有待于进一步探讨研究.

关键词：

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Cornelia de Lange综合征致病基因突变分析

Cornelia de Lange综合征致病基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的:Cornelia de Lange综合征(Cornelia de Lange Syndrome)是一类罕见的累及多器官系统的遗传异质性疾病,该病有65%的患者由NIPBL,SMC1A和SMC3这三个基因突变所导致,其中NIPBL基因突变占50-60%。主要临床表现为特殊面容,上睑下垂,近... 详细信息

目的:Cornelia de Lange综合征(Cornelia de Lange Syndrome)是一类罕见的累及多器官系统的遗传异质性疾病,该病有65%的患者由NIPBL,SMC1A和SMC3这三个基因突变所导致,其中NIPBL基因突变占50-60%。主要临床表现为特殊面容,上睑下垂,近视、胎儿宫内及出生后生长迟滞,多器官发育异常,癫痫并常伴有严重的智力障碍。本实验室收集到临床诊断为Cornelia de Lange综合征的患儿9例,对致病基因NIPBL进行突变分析,旨在为患儿基因诊断和遗传学咨询提供依据。方法:经知情同意后采集患儿外周血并提取基因组DNA,Trizol法提取总RNA,利用聚合酶链式反应(PCR)、反转录PCR、DNA测序对NIPBL基因编码序列进行突变分析,并应用限制性内切酶片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)对100名正常人进行该突变位点的检测。结果:在9名患儿中发现4种NIPBL基因突变,分别为三个国际尚未报道的突变IVS13-3C>G,c.1639C>T(***547*),c.6621G>A(***2207lle)和一个已知突变c.1644dupA(***549Argfs*20。且IVS13-3C>G突变导致NIPBL基因在转录过程中出现外显子跳跃,使基因第1 4外显子缺失,形成新的转录本。结论:在9名Cornelia de Lange综合征患儿中,NIPBL基因突变的阳性率为44%,3种NIPBL基因新突变的发现丰富了突变数据库,为临床诊断提供依据。

关键词： Cornelia de Lange综合征 NIPBL基因突变分析

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野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达

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吉林大学学报（医学版） 2014年第1期40卷 27-30页

作者：刘彤李丹妮李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段... 详细信息

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。

关键词： p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签

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miR-136通过靶向PPP2R2A调节TGF-β1对角质形成细胞增殖的抑制作用

miR-136通过靶向PPP2R2A调节TGF-β1对角质形成细胞增殖的抑制作用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：张殿宝王竞王暂张涛施萍王喜良赵峰刘晓玉林学文庞希宁中国医科大学卫生部暨教育部医学细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院肛肠外科沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的:角质形成细胞的增殖能力对于伤口愈合至关重要,而由成纤维细胞和角质形成细胞分泌的TGF-β1对角质形成细胞的增殖具有阻滞作用.越来越多的研究表明,microRNA参与调节角质形成细胞的增殖,而其中的分子机制仍有待阐明.本文旨在明确mi...

目的:角质形成细胞的增殖能力对于伤口愈合至关重要,而由成纤维细胞和角质形成细胞分泌的TGF-β1对角质形成细胞的增殖具有阻滞作用.越来越多的研究表明,microRNA参与调节角质形成细胞的增殖,而其中的分子机制仍有待阐明.本文旨在明确miR-136在TGF-β1诱导的角质形成细胞增殖阻滞中的作用,并探索其机制.方法:以HaCaT细胞系和人包皮皮片中分离的角质形成细胞为实验对象,建立TGF-β1诱导角质形成细胞发生上皮间充质转化的模型,相差显微镜下观察细胞形态,使用Realtime PCR检测其中标志性基因水平,通过western blot和免疫荧光进一步验证.

关键词：

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晚期糖基化终产物对人脂肪间充质干细胞功能影响的体外研究

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中国病理生理杂志 2014年第5期30卷 897-901页

作者：王哲刘晓玉张殿宝王秋实中国医科大学盛京医院输血科辽宁沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室、干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的:探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脂肪来源的间充质干细胞(hADSCs)促进创伤修复功能的影响。方法:体外培养hADSCs,实验分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、低浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)效应组和高浓度AGE-BSA效应组。采用WS... 详细信息

目的:探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脂肪来源的间充质干细胞(hADSCs)促进创伤修复功能的影响。方法:体外培养hADSCs,实验分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、低浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)效应组和高浓度AGE-BSA效应组。采用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况。应用实时定量PCR和ELISA检测各组细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达。结果:与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力和迁移能力明显下降(P<0.05),VEGF、HGF和IGF-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:AGEs能损伤hADSCs的促进创伤修复功能,因而能够影响hADSCs治疗糖尿病皮肤溃疡病的治疗效果。

关键词：晚期糖基化终产物人脂肪间充质干细胞细胞增殖伤口愈合

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利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：陈晨卢超霞王琼曹丽华罗阳张学中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分... 详细信息

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分,因此上述基因的突变,均可影响Ⅳ型胶原的折叠、分泌及基质形成等分子生物学功能,从而引起AS。方法:我们利用Ion AmpliseqTM Inherited Disease Panel,通过靶向二代测序技术进行包括COL4A3,COL4A4和COL4A5基因在内的328个基因的突变筛查,针对可疑突变进行Sanger测序验证及进一步的RNA水平分析。结果:靶向二代测序区域未直接检测到致病突变,但我们在分析原始数据中发现COL4A5基因外显子4,10,17,20,21,37和45未被Disease Panel的探针完全覆盖,Sanger测序验证以上区域,发现先证者COL4A5基因内含子9存在剪接突变c.547-3C>A,其母亲该位点为杂合突变。经RNA提取及cDNA测序分析显示先证者发生COL4A5基因外显子1 0跳跃,整码缺失21个氨基酸。结论:本研究首次发现COL4A5基因的一个新剪接突变,导致外显子10缺失,据此分析在蛋白水平Ⅳ型胶原α5链将丢失7个典型的Gly—X-Y结构,很可能影响胶原分子的构象、弹性及组装。综上,我们利用二代测序技术检测到X连锁Alport综合征家系的致病突变,并在RNA水平验证了该突变导致的外显子跳跃,帮助确定临床诊断,并为后续的遗传咨询和产前诊断提供可靠依据。

关键词：先证者靶向二代测序 Alport 综合征基因突变分析

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普罗布考对高糖诱导的脂肪间充质干细胞损伤的保护作用

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中国医科大学学报 2014年第7期43卷 615-620页

作者：王哲刘晓玉张殿宝王喜良林学文王秋实中国医科大学盛京医院输血科沈阳110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 沈阳202医院生殖中心沈阳11003

目的探讨普罗布考在保护人脂肪间充质干细胞（hADSCs）对抗高糖引起损伤中的作用及机制.方法原代培养人脂肪间充质干细胞hADSCs,应用免疫荧光对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定.将hADSCs分为正常糖对照组（CO... 详细信息

目的探讨普罗布考在保护人脂肪间充质干细胞（hADSCs）对抗高糖引起损伤中的作用及机制.方法原代培养人脂肪间充质干细胞hADSCs,应用免疫荧光对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定.将hADSCs分为正常糖对照组（CON组）、高糖组（GLU组）、普罗布考＋高糖组（PRO＋GLU组）、抑制剂SB203580＋高糖组（SB＋GLU组）、普罗布考组（PRO组）、抑制剂SB203580组（SB组）.MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平.Western blot技术检测p-p38MAPK蛋白的表达水平.结果与CON组比较,GLU组hADSCs细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,凋亡细胞比例、ROS水平显著增加（P＜0.05）;与GLU组比较,PRO＋GLU组和SB＋GLU组hADSCs细胞细胞增殖活性都明显增加（P＜0.05）,凋亡细胞比例、ROS水平表达水平均显著降低（P＜0.05）;与CON组比较,GLU组p-p38MAPK表达水平明显上升,普罗布考预处理能明显抑制高糖诱导的p-p38MAPK表达水平上调.结论普罗布考能帮助hADSCs对抗高糖引起的损伤;p38MAPK通路参与高糖对hADSCs的损伤作用;普罗布考可通过抑制p38MAPK通路的激活保护hADSCs对抗高糖诱导的损伤.

关键词：普罗补考脂肪间充质干细胞 p38MAPK 活性氧

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基于微流控芯片的胃癌SGC-7901细胞高侵袭亚系筛选

基于微流控芯片的胃癌SGC-7901细胞高侵袭亚系筛选

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第九届全国微全分析系统学术会议、第四届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、2014国际微流控芯片与微纳尺度生物分离分析学术会议

作者：陈哲周张宇李婉明袁德峥于敏方瑾医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学细胞生物学教研室沈阳 110001

转移是肿瘤的重要生物学特征，研究显示，同一瘤体或肿瘤细胞系中，含有生物学特性和转移行为不完全相同的亚细胞克隆，而具有转移潜能的细胞亚群在肿瘤转移中起主导作用[1]。因此，从肿瘤细胞群体中分离鉴定高侵袭、高转移潜能的细胞... 详细信息

转移是肿瘤的重要生物学特征，研究显示，同一瘤体或肿瘤细胞系中，含有生物学特性和转移行为不完全相同的亚细胞克隆，而具有转移潜能的细胞亚群在肿瘤转移中起主导作用[1]。因此，从肿瘤细胞群体中分离鉴定高侵袭、高转移潜能的细胞亚系，不仅对研究肿瘤的发生、发展，而且对于指导肿瘤临床治疗及抗肿瘤药物的筛选和评价均具有重要意义[2]。目前，筛选高侵袭高转移亚系大多采用体内种植(裸鼠、SCID鼠)建立转移模型法[3]，该方法存在操作复杂，实验周期长且易受宿主影响等缺点。微流控芯片技术能够模拟体内微环境，且具有实验条件可控、结果重现性好等优势，已有多项研究建立微流控体系进行肿瘤细胞侵袭力的分析，但目前未见用于高侵袭肿瘤细胞亚系筛选的相关报道。

关键词：微流控芯片亚系筛选肿瘤侵袭

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铅对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

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环境与健康杂志 2014年第3期31卷 193-196,F0003页

作者：林琳廖英俊赵凤红王艳唐漫许亚婷王达金亚平中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院染色质生物学研究室细胞生物学卫生部重点实验室中国医科大学公共卫生学院劳动卫生学教研室中国医科大学药学院临床药理学教研室

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞（AS）中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1-3dWistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养，以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色鉴定细胞纯度后，进行0（对照组）、50、100、200及400μmol... 详细信息

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞（AS）中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1-3dWistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养，以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色鉴定细胞纯度后，进行0（对照组）、50、100、200及400μmol／L乙酸铅染毒，染毒时间为72h。倒置显微镜下观察细胞形态并采集图像；以AlamarBlue法检测细胞活力；以Westernblot法检测GLAST和GLT-1蛋白的表达；以同位素标记法测定谷氨酸转运体功能。结果50和100μmol／L铅暴露组的细胞形态与对照组相比，未见明显改变；200μmol／L铅暴露72h后，少量细胞开始脱壁，细胞间隙增大；400μmol／L铅暴露组细胞变大，突起变短或消失，脱壁细胞数量明显增多。与对照组相比，各浓度铅暴露组的AS活力均降低（P〈0．05），100、200和400μmol／L铅暴露组的GLT-1蛋白含量下降（P〈0．05），但各浓度铅暴露组的GLAST蛋白含量无显著改变。100、200和400μmol／L铅暴露组的3FI—Glu放射性低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论铅暴露可明显抑制AS中GLT-1蛋白的表达，并导致AS的Glu转运体功能下降。

关键词：星形胶质细胞铅谷氨酸谷氨酸转运体-1

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普罗布考对糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞功能的影响

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中国动脉硬化杂志 2014年第12期22卷 1207-1212页

作者：王哲刘晓玉张殿宝王秋实中国医科大学盛京医院输血科辽宁省沈阳市110004 细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001

目的探讨普罗布考对糖尿病鼠脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）功能的影响.方法体外分离培养ADSC,应用流式细胞术对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定.将ADSC分为：①正常ADSC对照组;②正常ADSC＋普罗布考组;③糖... 详细信息

目的探讨普罗布考对糖尿病鼠脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）功能的影响.方法体外分离培养ADSC,应用流式细胞术对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定.将ADSC分为：①正常ADSC对照组;②正常ADSC＋普罗布考组;③糖尿病ADSC对照组;④糖尿病ADSC＋普罗布考组;⑤正常ADSC＋高糖（30 mmol/L）组;⑥正常ADSC＋高糖＋普罗布考组.应用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况.应用ELISA和实时定量PCR检测各组细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）蛋白和mRNA表达水平.应用二氯醋酸荧光素探针检测各组细胞活性氧（ROS）含量.结果 ADSC表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;与正常ADSC对照组相比,糖尿病ADSC增殖能力和迁移能力下降,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平降低.与糖尿病ADSC对照组相比,糖尿病ADSC＋普罗布考组增殖能力和迁移能力增加,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平上升.结论糖尿病能损伤ADSC的生物学特性.普罗布考对糖尿病鼠ADSC增殖、迁移和分泌能力具有保护作用.

关键词：普罗布考脂肪间充质干细胞细胞增殖细胞迁移活性氧

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