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医学综述 2014年第22期20卷 4155-4157页

作者：王羽佳(综述) 陈思娇宋今丹(审校) 中国医科大学沈阳110001 中国医科大学附属第一医院老年科沈阳110001 中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

单核苷酸多态性(SNP)是第三代分子标记技术,成为当今医学研究最常用的方法之一。随着遗传学、分子生物学的发展,SNP的检测和分析方法趋于多样化,并逐步深入到临床疾病的研究和防治过程中,如代谢综合征。以SNP为基础的基因芯片技术用于... 详细信息

单核苷酸多态性(SNP)是第三代分子标记技术,成为当今医学研究最常用的方法之一。随着遗传学、分子生物学的发展,SNP的检测和分析方法趋于多样化,并逐步深入到临床疾病的研究和防治过程中,如代谢综合征。以SNP为基础的基因芯片技术用于筛查代谢综合征快速而准确,得到广泛应用,正逐步取代传统的DNA检测。将SNP检测结果作为参数来构建代谢综合征风险预测模型,从而起到风险预测评估,指导预防疾病发生的作用。同时,代谢综合征关联基因的确定有助于治疗方案的制订。

关键词：单核苷酸多态性代谢综合征脂联素基因芯片风险预测模型

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铅对星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响及其机制的研究

铅对星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响及其机制的研究

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中国生理学会第24届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：林琳廖英俊中国医科大学基础医学院细胞生物学卫生部重点实验室染色质生物学研究室中国医科大学基础医学院生理学教研室

铅是具有很强神经毒性的重金属污染物。迄今为止,铅对学习记忆损害方面的研究主要以神经元作为研究对象,而以神经胶质细胞作为研究对象的相关研究却少有报道。星形胶质细胞(astrocyte,AS)是脑内数量最多、分布最广的一类细胞,它对神经... 详细信息

铅是具有很强神经毒性的重金属污染物。迄今为止,铅对学习记忆损害方面的研究主要以神经元作为研究对象,而以神经胶质细胞作为研究对象的相关研究却少有报道。星形胶质细胞(astrocyte,AS)是脑内数量最多、分布最广的一类细胞,它对神经元起支持、营养及促进神经再生与修复等作用。谷氨酸(glutamate,Glu)是主要的兴奋性神经递质。细胞外液中过量Glu的累积,将导致谷氨酸能受体的过度刺激,引起神经元的兴奋性毒性损伤。AS上表达两种高亲和力的谷氨酸转运体GLAST(Glutamate/Aspartate transporter)和GLT-1(Glutamate transporter-1),同时AS内具有谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)。因此,AS不仅能快速清除突触间隙的Glu,而且能对摄入的Glu进行代谢转化。本研究主要探讨铅暴露对AS谷氨酸代谢的影响及其可能机制。实验以原代培养的AS为研究对象,经细胞纯度鉴定后,进行铅暴露72 h。实验结果显示,随铅暴露浓度的增加细胞形态发生改变,且各铅暴露组的AS活力均显著降低。各铅暴露组AS内GS活力与对照组相比均明显下降;GLT-1和GS蛋白表达呈下降趋势,但GLAST蛋白表达无显著性差异;GLT-1和GS的m-RNA水平与蛋白表达趋势一致。各铅暴露组转运体功能与对照组相比均显著下降。实验结果提示铅对GLT-1蛋白表达的影响可能是导致AS对Glu转运能力下降的主要原因,铅对GLT-1和GS蛋白表达的影响可明显抑制突触间隙Glu的转运与代谢,导致Glu在突触间隙的蓄积。

关键词：铅星形胶质细胞谷氨酸转运体 GLT-1

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舒洛地特对SUMO_4介导的2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

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心血管康复医学杂志 2014年第1期23卷 45-48页

作者：李红燕徐锦春陈思娇郭英华杨文超李馨慧蒋光烈范一宁顾舒扬宋今丹中国医科大学附属第一医院老年病教研室辽宁沈阳110001 赤峰学院附属医院心内科中国医科大学中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室

目的:探讨舒洛地特对小泛素养修饰蛋白(SUMO)4介导的2型糖尿病大鼠肾脏功能的保护作用。方法:将20只GK大鼠按数字表法随机均分为糖尿病组(DM组)、舒洛地特治疗组(DM+S组),SPF级同龄雄性Wistar大鼠10只作为健康对照组,DM+S组给予舒洛地特... 详细信息

目的:探讨舒洛地特对小泛素养修饰蛋白(SUMO)4介导的2型糖尿病大鼠肾脏功能的保护作用。方法:将20只GK大鼠按数字表法随机均分为糖尿病组(DM组)、舒洛地特治疗组(DM+S组),SPF级同龄雄性Wistar大鼠10只作为健康对照组,DM+S组给予舒洛地特10mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续8周,其余两组给予等体积生理盐水注射。分别于用药前1d和用药结束后次日测定24h尿微量白蛋白量,光镜下观察肾脏组织的结构变化,免疫组化法检测三组大鼠肾脏组织中核转录因子-κB(NF-κB)、SUMO4、NF-κB抑制剂(IκB)的表达。结果:(1)用药前DM组与DM+S组大鼠的血糖及24h尿白蛋白排泄率显著高于健康对照组(P<0.01);用药后DM+S组24h尿白蛋白排泄率显著低于DM组[(146.90±10.92)%比(314.63±20.42)%,P<0.01];(2)与健康对照组相比,光镜下GK大鼠的肾脏肾小球毛细血管球肥大,基底膜轻度增厚,肾小球系膜细胞增生、肥大,肾小管上皮细胞肥大。未见典型的结节性肾小球硬化,似为糖尿病肾损害的早期改变,DM+S组肾脏组织病理改变较DM组明显减轻;(3)免疫组化示:DM+S组和DM组SUMO4、NF-κB、IκB表达显著高于健康对照组;与DM组比较,DM+S组SUMO4[(29.8±0.6)比(34.2±0.7)]、IκB[(25.5±0.7)比(37.3±0.6)]表达显著增加,NF-κB[(43.9±0.9)比(27.0±0.6)]表达显著减少,P均<0.05。结论:(1)小泛素养修饰蛋白4、NF-κB抑制剂在糖尿病GK大鼠肾脏组织表达增多;(2)舒洛地特对糖尿病GK大鼠肾脏组织有一定的保护作用。

关键词：小泛素样修饰蛋白类 NF-κB 舒洛地特

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遗传代谢病基因诊断和遗传学分析

遗传代谢病基因诊断和遗传学分析

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第九届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会暨产前诊断和医学遗传学新技术研讨会

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的:遗传代谢性疾病(inherited metabolic diseases,IMD)是由于基因突变引起酶缺陷、细胞膜功能异常或受体功能缺陷,从而导致机体生化代谢紊乱,造成中间或旁路代谢产物蓄积或终末代谢产物缺乏而引起一系列临床症状的一组疾病。迄今发... 详细信息

目的:遗传代谢性疾病(inherited metabolic diseases,IMD)是由于基因突变引起酶缺陷、细胞膜功能异常或受体功能缺陷,从而导致机体生化代谢紊乱,造成中间或旁路代谢产物蓄积或终末代谢产物缺乏而引起一系列临床症状的一组疾病。迄今发现的遗传代谢疾病已经超过1000种。包括代谢大分子类疾病,包括溶酶体贮积症、线粒体病等;代谢小分子类疾病,包括氨基酸代谢病,有机酸代谢病和脂肪酸代谢病等。多为单基因遗

关键词：遗传代谢性疾病基因诊断突变分析遗传咨询

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X连锁低磷酸盐血症性佝偻病致病基因突变分析

X连锁低磷酸盐血症性佝偻病致病基因突变分析

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2014全球华人遗传学大会全国第十三次医学遗传学学术会议

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的:低磷酸盐血症性佝偻病,发病率约为1/20000,包含5个主要的亚型,其中最常见的是X连锁低磷酸盐血症性佝偻病,该病是由PHEX基因突变所致,以错义突变,无义突变和剪切位点突变为主。PHEX基因编码749个氨基酸的跨膜内肽酶。本实验室收集... 详细信息

目的:低磷酸盐血症性佝偻病,发病率约为1/20000,包含5个主要的亚型,其中最常见的是X连锁低磷酸盐血症性佝偻病,该病是由PHEX基因突变所致,以错义突变,无义突变和剪切位点突变为主。PHEX基因编码749个氨基酸的跨膜内肽酶。本实验室收集到临床诊断为X连锁低磷酸盐血症性佝偻病患儿18例,旨在对致病基因进行突变分析,

关键词：基因突变分析低磷酸盐血症性佝偻病剪切位点突变

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正常与糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的比较

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解剖科学进展 2014年第5期20卷 420-424页

作者：王哲张殿宝刘晓玉王瑞王秋实中国医科大学附属盛京医院输血科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的比较正常和糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)移植促进皮肤创伤愈合疗效差别。方法无菌条件下获取正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型... 详细信息

目的比较正常和糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)移植促进皮肤创伤愈合疗效差别。方法无菌条件下获取正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。应用WST法和Transwell迁移实验检测细胞增殖和迁移情况。应用ELISA对正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量进行检测。建立小鼠皮肤创伤模型并随机分为3组,分别以皮内注射方式将3代正常小鼠或糖尿病小鼠来源ADSCs的细胞混悬液移植到小鼠创面四周,空白对照组注射生理盐水,于伤后14d观察创面愈合情况;Western blot检测伤后14d创面组织Bcl-2蛋白表达。结果小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45,与正常小鼠相比,糖尿病小鼠来源的ADSCs增殖和迁移能力下降,条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量明显降低。糖尿病小鼠ADSCs移植组于创伤后第14d伤口愈合率为(79.6%±6.2%),均显著低于正常小鼠移植组14d的(97.1%±4.1%),两者均高于对照组14d的(64.6%±2.9%,<0.05)。与正常小鼠移植组相比,糖尿病小鼠移植组伤后14d创面组织Bcl-2表达水平降低,高于对照组创面组织Bcl-2表达水平。结论正常小鼠来源ADSCs较糖尿病小鼠ADSCs更能促进小鼠皮肤创面愈合。

关键词：脂肪间充质干细胞细胞增殖细胞迁移创伤愈合小鼠

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一个丙酸血症患儿致病基因突变分析

一个丙酸血症患儿致病基因突变分析

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第九届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会暨产前诊断和医学遗传学新技术研讨会

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学附属盛京医院发育儿科

目的:丙酸血症(propionic acidemia,PA)是一种较常见的常染色体隐性遗传性有机酸血症,以支链氨基酸和偶数链脂肪酸代谢异常为主要特点。患病率有种族和地区差异。丙酸血症临床表现个体差异很大,患儿急性期典型临床表现为喂养困难、嗜睡... 详细信息

目的:丙酸血症(propionic acidemia,PA)是一种较常见的常染色体隐性遗传性有机酸血症,以支链氨基酸和偶数链脂肪酸代谢异常为主要特点。患病率有种族和地区差异。丙酸血症临床表现个体差异很大,患儿急性期典型临床表现为喂养困难、嗜睡、反复呕吐等症状,多在患儿摄入蛋白饮食后发作。丙酸血症的发病机制是在丙酰CoA转化为甲基丙二酰CoA过程中,催化酶丙酰CoA羧化酶活性丧失或减弱,导致体内丙酸及其代

关键词：丙酸血症 PCCA基因 PCCB基因突变分析体外剪切分析

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小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制

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解剖科学进展 2014年第2期20卷 105-108,111页

作者：张健刘彤李瑞娟刘奇李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科沈阳110001

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞... 详细信息

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。

关键词： E-039 人胃癌侵袭金属基质蛋白酶2 Cofilin

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X连锁低磷酸盐血症性佝偻病致病基因突变分析

X连锁低磷酸盐血症性佝偻病致病基因突变分析

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2014全球华人遗传学大会暨全国第十三次医学遗传学学术会议

作者：邢雪莎刘双黎芳麻宏伟罗阳中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院发育儿科沈阳110003

目的:低磷酸盐血症性佝偻病,发病率约为1/20000,包含5个主要的亚型,其中最常见的是X连锁低磷酸盐血症性佝偻病,该病是由PHEX基因突变所致,以错义突变,无义突变和剪切位点突变为主.PHEX基因编码749个氨基酸的跨膜内肽酶.本实验室收集到...

目的:低磷酸盐血症性佝偻病,发病率约为1/20000,包含5个主要的亚型,其中最常见的是X连锁低磷酸盐血症性佝偻病,该病是由PHEX基因突变所致,以错义突变,无义突变和剪切位点突变为主.PHEX基因编码749个氨基酸的跨膜内肽酶.本实验室收集到临床诊断为X连锁低磷酸盐血症性佝偻病患儿18例,旨在对致病基因进行突变分析,为该病的基因诊断和遗传学咨询提供依据.方法:PCR扩增PHEX基因编码区,直接测序分析,利用PCR-RFLP对100名正常人进行验证,排除SNP.应用mini-pCAS载体体外分析剪切位点突变的影响.

关键词：

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人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 437-440页

作者：刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 详细信息

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入*** BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。

关键词： P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白

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