检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2003年第2期34卷 162-167页

作者：尚德淑陈誉华宋今丹中国医科大学发育生物学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的　研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。　方法　应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别... 详细信息

目的　研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。　方法　应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别用RT PCR和Westernblot方法检测模型中UPR分子的表达。　结果　RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irelα的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降 ,但未经RA处理组中Irelα的表达始终低于同一时间RA处理组细胞 ;Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升 ,但在未经RA处理组Grp 78的表达未见上升。Irelα和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。　结论　以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统 ,可作为研究神经发育的初步模型 ,其模型中UPR分子的表达变化提示。

关键词：未折叠蛋白反应维甲酸诱导胚胎干细胞细胞分化

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人pEGFP-PKARIIβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达

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世界华人消化杂志 2011年第14期19卷 1446-1450页

作者：王桂玲姜佩佳王孝会陈薇中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁省沈阳市110001

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序... 详细信息

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序列,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达载体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Westernbolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARIIβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARIIβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72000Da.并观察到GFP-PKARIIβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARIIβ编码序列的pEGFP-PKARIIβ真核表达载体,证实GFP-PKARIIβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARIIβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.

关键词： PKARIIβ 真核表达绿色荧光蛋白基因转染胃癌细胞

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维甲酸Ro 40-8757对人肿瘤细胞系的作用及其机制探讨

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癌症 2002年第10期21卷 1051-1056页

作者：吕晶宋今丹卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学分子生物学研究所辽宁沈阳110001

背景与目的:维甲酸类化合物对多种恶性肿瘤具有诱导分化、抑制增殖、诱导凋亡等作用。本文旨在研究一种新合成的维甲酸Ro40-8757对4种体外培养的人肿瘤细胞系生长增殖、形态结构及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法:用MTT法测定Ro40-8... 详细信息

背景与目的:维甲酸类化合物对多种恶性肿瘤具有诱导分化、抑制增殖、诱导凋亡等作用。本文旨在研究一种新合成的维甲酸Ro40-8757对4种体外培养的人肿瘤细胞系生长增殖、形态结构及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法:用MTT法测定Ro40-8757对4种人肿瘤细胞系(人结肠癌细胞系CCL-187和CCL-229、人胰腺癌细胞系JF-305和AsPC-1)的增殖抑制作用;用光镜和电镜观察其对敏感细胞系CCL-187细胞形态的影响;用流式细胞术研究其对细胞周期的影响;最后,用Westernblot法检测在给药前后CCL-187细胞周期蛋白p16、p21和p27的变化情况,以探讨其可能的机制。结果:Ro40-8757对4种细胞系均有显著的生长抑制作用,并具有时间、浓度依赖性;显微镜观察未见细胞有明显的细胞毒性、凋亡和分化特征性改变;药物作用后4种肿瘤细胞系细胞周期阻滞于G0/G1期;Ro40-8757作用12h后CCL-187细胞系p21和p27同时升高,24、48h逐渐下降,72h又再次升高144h升至最高;p16在加药前后始终阴性表达。结论:Ro40-8757对人结肠癌细胞系CCL-187和CCL-229、人胰腺癌细胞系JF-305和AsPC-1有明显的增殖抑制作用,并呈时间、浓度依赖性;这种抑制作用是通过将细胞周期阻滞于G0/G1期发挥作用的,细胞周期蛋白p21和p27在其中起作用引起细胞周期阻滞。

关键词：维甲酸 Ro40-8757 肿瘤增殖抑制细胞周期 MTT法结肠癌胰腺癌

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一种简便实用的RNA制备方法

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中国医科大学学报 1997年第5期26卷 547-549页

作者：陈誉华宋今丹沈阳中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室110001

一种简便实用的ＲＮＡ制备方法陈誉华宋今丹（细胞生物学卫生部重点实验室，沈阳１１０００１）关键词核糖核酸；核酸杂交；反转录—多聚酶链反应ｃＤＮＡ克隆或从ｍＲＮＡ来分析细胞内某蛋白表达的首要步骤是提纯细胞的总ＲＮＡ。迄今... 详细信息

一种简便实用的ＲＮＡ制备方法陈誉华宋今丹（细胞生物学卫生部重点实验室，沈阳１１０００１）关键词核糖核酸；核酸杂交；反转录—多聚酶链反应ｃＤＮＡ克隆或从ｍＲＮＡ来分析细胞内某蛋白表达的首要步骤是提纯细胞的总ＲＮＡ。迄今有关细胞总ＲＮＡ的制备方法虽已常规...

关键词： RNA 制备核酸杂交聚合酶链反应反转录

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结直肠癌相关细胞膜表面抗原检测试剂盒的研制

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中华检验医学杂志 2001年第3期24卷 148-150页

作者：刘戈飞宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的　探讨以结直肠癌相关细胞膜表面抗原作为标志物的结直肠癌诊断方法。方法　分别应用生物素氨基己酰肼和辣根过氧化物酶标记能识别该抗原的单克隆抗体ND 1,研制采用生物素链霉亲和素技术的一步夹心酶联免疫法检测血清中该抗原的试... 详细信息

目的　探讨以结直肠癌相关细胞膜表面抗原作为标志物的结直肠癌诊断方法。方法　分别应用生物素氨基己酰肼和辣根过氧化物酶标记能识别该抗原的单克隆抗体ND 1,研制采用生物素链霉亲和素技术的一步夹心酶联免疫法检测血清中该抗原的试剂盒 ,并用临床收集的健康人与结直肠癌患者血清对试剂盒诊断的有效性进行评价。结果　健康人组吸光度值 (A4 0 5)为 0 .0 5 6± 0 .0 38,结直肠癌患者组A值为 0 .5 5 3± 0 .44 1,两组差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;用接受器性能曲线分析确定试剂盒诊断临界值为 0 .2 48,灵敏度、特异度和有效性分别为 89.2 9% ,87 5 % ,88.5 4% ,ROC值为0 95 ;试剂盒检测的批内变异小于 5 % ,批间变异小于 10 % ;诊断结果与病理诊断结果差异无显著意义 (P <0 .0 1)。该抗原在血清中的含量与结直肠癌的分化程度相关 (P <0 .0 5 ) ,而与结直肠癌的分期无相关 (P >0 .0 5 )。结论　该抗原作为新发现的肿瘤标志物对结直肠癌的诊断有一定的应用价值。

关键词：肿瘤标记生物学结肠肿瘤酶联免疫吸附测定细胞膜表面抗原直肠肿瘤

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SARS冠状病毒S蛋白候选细胞受体氨基肽酶N的基因变异研究

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Acta Genetica Sinica 2003年第7期30卷 687-692页

作者：罗阳姜莉敖雪吕志刘恒丹徐岩敖杨任群鲁翀徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

氨基肽酶N是人类冠状病毒HCoV 2 2 9E的细胞受体 ,可能为SARS冠状病毒 (SARS CoV)S蛋白的受体。应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查了正常无关个体中氨基肽酶N编码基因ANPEP的全部外显子及其两侧部分内含子序列。对筛查中DHPLC峰型... 详细信息

氨基肽酶N是人类冠状病毒HCoV 2 2 9E的细胞受体 ,可能为SARS冠状病毒 (SARS CoV)S蛋白的受体。应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查了正常无关个体中氨基肽酶N编码基因ANPEP的全部外显子及其两侧部分内含子序列。对筛查中DHPLC峰型提示有基因变异存在的DNA片段行PCR产物直接测序 ,共发现 9种单核苷酸多态 (SNP) ,其中 4种为非同义SNP ,分别为T32 1M(96 2C >T)、S6 5 1L(195 2C >T)、S75 2N(2 2 5 5G >A)和G76 4R(2 2 90G >A) ;其余 5种SNP为T795T(2 385C >T)、IVS7+17G >A、IVS14 16A >G、IVS17+12C >G和IVS17+44C >T。这些SNP的发现 ,为SARS CoV的宿主遗传因素研究 ,特别是发现SARS CoV感染和SARS发病的易感基因或抗病基因 ,提供了遗传标记。

关键词： SARS冠状病毒氨基肽酶N 变性高效液相色谱单核苷酸多态

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人大肠癌与早幼粒白血病细胞中内质网分子伴侣Grp94的差异表达

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科学通报 1997年第16期42卷 1773-1776页

作者：陈誉华宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

内质网分子伴侣Grp（Glucose regulated protein）94属HSP（Heat shock protein）90家族,是正常细胞内质网腔中含量较丰富的蛋白质,在多种应激条件下其表达水平可明显升高。Grp94的主要功能是参与由内质网合成的蛋白质的折叠装配和跨膜... 详细信息

内质网分子伴侣Grp（Glucose regulated protein）94属HSP（Heat shock protein）90家族,是正常细胞内质网腔中含量较丰富的蛋白质,在多种应激条件下其表达水平可明显升高。Grp94的主要功能是参与由内质网合成的蛋白质的折叠装配和跨膜转运。人Grp94编码基因的cDNA长度为2780bp,与编码基因相比,它的两个假基因均有不同程度的插入、缺失与点突变。这些结果均是从非癌细胞研究中获得的。在癌细胞研究中了解到。

关键词：内质网分子伴铝 Grp94 大肠癌白血病癌细胞

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人盆部淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

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解剖学杂志 2001年第3期24卷 261-264页

作者：蔡威宋今丹等中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳110001

目的　研究人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。方法 :采用电镜酶细胞化学方法观察 7例人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。结果 :Mg2 + ATP酶主要定位在淋巴细胞膜内... 详细信息

目的　研究人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。方法 :采用电镜酶细胞化学方法观察 7例人盆部淋巴结淋巴细胞Mg2 + ATP酶、G 6 P酶、5′ Nase的定位与活性。结果 :Mg2 + ATP酶主要定位在淋巴细胞膜内侧 ,G 6 P酶主要定位在内质网、线粒体膜相结构 ,5′ Nase定位在细胞膜外表面。结论 :3种酶定位准确 ,颗粒清晰 ,酶反应特异性强。应用电镜酶细胞化学方法可以检测酶活性变化 ,对判定机体免疫状态及对临床诊断与治疗具有一定意义。

关键词：盆部淋巴系统淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位活性研究

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分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进

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中国医科大学学报 2000年第5期29卷 325-328页

作者：李丰吴一迪王芸庆宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为... 详细信息

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。

关键词： mRNA差异显示技术丁酸钠大肠癌发病机理

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丁酸钠诱导的人大肠癌细胞成熟分化中的表型变化

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中国医科大学学报 2000年第6期29卷 404-407页

作者：李丰吴一迪王芸庆宋今丹中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001

目的 :探讨食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长、分化的影响。方法 :应用 MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术 ,观察经丁酸钠诱导后低分化人大肠癌细胞系 Clone- A细胞生长及形态学变化。结果 :经丁酸钠诱导后 ,Clone- A细胞生长... 详细信息

目的 :探讨食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长、分化的影响。方法 :应用 MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术 ,观察经丁酸钠诱导后低分化人大肠癌细胞系 Clone- A细胞生长及形态学变化。结果 :经丁酸钠诱导后 ,Clone- A细胞生长受到明显抑制 ;G0 / G1 期细胞百分比增加 ,S期细胞百分比减少 ,细胞增殖指数下降 ,诱导后 Clone- A细胞变长 ,出现胞浆突起 ,由圆形、不规则形变为扁平的成纤维细胞样形态。同时 ,丁酸钠作用 2 d后 ,细胞表面伸出丝状伪足 ,4d后明显变长。胞浆内质网、高尔基体数量及密度增加 ,内质网聚集核周围并铺展于胞质内 ,形态趋于正常。结论 :丁酸钠能够抑制低分化人大肠癌细胞生长 ,诱导其成熟分化 ,使其一些恶性表型逆转。

关键词：丁酸钠大肠癌分化表型

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