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2016中国转化医学大会

作者：李婉明方瑾医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

核酸适配子(aptamer)是利用指数富集的系统进化技术(SELEX)从一个库容量达1018的随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶细胞高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列.W3是前期利用Cell-SELEX技术筛选到的能够特异性识别转移性大肠癌细胞系... 详细信息

核酸适配子(aptamer)是利用指数富集的系统进化技术(SELEX)从一个库容量达1018的随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶细胞高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列.W3是前期利用Cell-SELEX技术筛选到的能够特异性识别转移性大肠癌细胞系LoVo的核酸适配子，与量子点QD605偶联制备分子探针(W3-QD).W3-QD能够特异性识别混合细胞中的LoVo细胞，并能够对不同类型的细胞进行定量成像.

关键词：核酸适配子转移性大肠癌靶向成像量子点多靶点

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基于转移性乳腺癌特异性核酸适配子的循环肿瘤细胞靶向捕获研究

基于转移性乳腺癌特异性核酸适配子的循环肿瘤细胞靶向捕获研究

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第三届中国核酸适配体学术研讨会

作者：李婉明周琳琳方瑾教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学基础医学院细胞生物教研室沈阳110001

在肿瘤转移的过程中,脱离原发肿瘤、侵袭并进入循环系统的肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)。许多研究表明,对外周血中的CTCs进行检测分析,有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断,以及评估预后和...

在肿瘤转移的过程中,脱离原发肿瘤、侵袭并进入循环系统的肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)。许多研究表明,对外周血中的CTCs进行检测分析,有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断,以及评估预后和监测复发[1]。高效富集外周血中含量稀少的CT℃是临床应用的关键问题,但目前基于CTC上皮特性的富集方法难以富集到失去上皮特性如发生上皮间质转化(EMT)的细胞群体,有可能遗失最具有诊断意义的信息[2]。因此,发现新的特异性更高的肿瘤转移相关标志物以提高CTC的检测有效性,对于转移性肿瘤的早期诊断和早期治疗具有重要的科学意义和临床价值。

关键词：

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CUEDC2通过上皮-间质转化促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移

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现代肿瘤医学 2016年第11期24卷 1681-1683页

作者：李彦姝汤丽娜张红艳高云凌李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:探讨CUE结构域2(CUE domain-containing 2,CUEDC2)蛋白对人乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染的Myc-CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测上皮-间质转化... 详细信息

目的:探讨CUE结构域2(CUE domain-containing 2,CUEDC2)蛋白对人乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染的Myc-CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)和转录因子SLUG的表达。结果:过表达CUEDC2蛋白能够下调E-cadherin蛋白和基因的表达,而上调转录因子SLUG基因和蛋白的表达。结论:CUEDC2可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮-间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生,CUEDC2可能是人乳腺肿瘤侵袭转移的治疗靶点。

关键词：乳腺肿瘤 CUE结构域2 上皮-间质转化侵袭转移

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p21活化激酶4在乳腺癌细胞中的表达及定位

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现代肿瘤医学 2016年第19期24卷 3010-3012页

作者：李彦姝张红艳汤丽娜高云凌李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:研究p21激活激酶4(PAK4)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法:蛋白印迹法检测PAK4在人乳腺癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源PAK4在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果:PAK4在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和... 详细信息

目的:研究p21激活激酶4(PAK4)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法:蛋白印迹法检测PAK4在人乳腺癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源PAK4在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果:PAK4在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和基因表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜观察发现PAK4主要定位于MCF-7细胞质中。结论:PAK4在人乳腺癌细胞系中高表达,主要定位于乳腺癌组织细胞质内,可能是人乳腺癌重要的调节因子。

关键词： p21激活激酶4 乳腺癌免疫印迹分析定位

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王瑞庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs... 详细信息

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs 的标记;用台盼蓝染色法检测不同浓度的磁纳米颗粒对hADSCs 活性的影响;用荧光显微镜观察磁纳米颗粒作为基因载体时的转染效率;分别用 Real-time PCR 和 Western-blot 检测转染后 REST 、SHH 的表达;用 Real-time PCR 检测hADSCs 共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后胰岛分化相关基因的表达情况.结果：磁性纳米颗粒可以作为基因载体转染细胞;用磁性纳米颗粒作为基因载体后,未标记组活细胞比率为 97.12％,铁浓度为 6 和 8mg/L 活细胞比率分别为96.28％和 96.21％,与未标记组无差异;铁浓度为 10 和 12mg/L 活细胞比率分别为 79.03％和 70.23％,显著低于未标记组;荧光显微镜观察转染效率为71％;磁纳米颗粒作为基因载体时REST RNA表达量为(0.46±0.04),蛋白水平表达量为(0.501±0.006);SHH RNA 表达量为(0.53±0.05),蛋白水平表达量为(0.523±0.004);磁纳米颗粒作为基因载体共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后,通过Real-time PCR 相对定量法检测胰岛分化相关基因的表达,结果显示,insulin、pdx1、pax4、ngn3 的表达都呈不同程度的升高.

关键词：糖尿病人脂肪间充质干细胞磁纳米颗粒转染胰岛素分泌细胞

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人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王贵玲庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊... 详细信息

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊膜上皮细胞融合度达90％时,换新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,培养24h 后收集培养液,离心后取上清分装冻存,与新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基1：1 混合后作为条件培养基(conditioned medium,CM),即50％CM.应用孔径为8.0um 的24 孔板transwell 检测细胞迁移,实验组下室放600ml50％HAEC-CM,对照组下室放600ml 新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,上室接种100ul 无血清DMEM/F12 的人成骨细胞hOB1.19 悬液,接种细胞数为1x105,培养2h 后HE 染色,显微镜下拍照计数.

关键词：羊膜上皮细胞旁分泌成骨细胞

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人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁移和血管生成的影响

人羊膜来源上皮及间充质细胞旁分泌作用对主动脉内皮细胞增殖、迁...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：吴倩倩庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充... 详细信息

背景：在体研究表明，人羊膜组织产生的生长因子参与血管生成、再上皮化和免疫调节等多种疾病.尽管上皮细胞(hAECs)和间充质干细胞(hAMSCs)均可以从羊膜获得，关于它们的生物功能对比鲜有提及.实验方法：羊膜组织通过酶消化法产生间充质干细胞和上皮细胞两类细胞，并通过流式细胞方法进行鉴定.hAECs 或hAMSCs 收集的条件培养基(CDM)用于培养人主动脉内皮细胞(hAoECs)：我们使用细胞划痕实验及Transwell 小室，以评估迁移能力;细胞增殖试剂盒(CCK-8)和细胞周期检测来评估增殖能力;基质胶血管生成实验，以评估血管生成的能力.为了检测血管生成相关基因的表达，使用定量PCR 和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行分析.

关键词：人羊膜上皮细胞人羊膜间充质干细胞旁分泌血管新生

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PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张殿宝李莹苏航王竟施萍庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞... 详细信息

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞在植入体内后的存活、迁移和分化等进行活体动态监测。本研究探索使用PEI-Fe3O4 纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞,以期为人羊膜上皮细胞的体内示踪提供新的方法和思路。方法：原代培养人羊膜上皮细胞,本研究经中国医科大学第一临床学院伦理委员会审批;使用透射电子显微镜和动态光散射表征PEI-Fe3O4 纳米颗粒;使用纳米颗粒标记原代培养的人羊膜上皮细胞,应用普鲁士蓝染色评价其标记效率;使用台盼蓝染色法和CCK-8 法检测细胞存活率和细胞毒性。结果：PEI-Fe3O4 纳米颗粒呈紧凑的球形,平均粒径为14 nm,水动力学半径为18 nm,zeta电位为+35 mV;浓度大于20 μg/mL 的纳米颗粒能够有效标记人羊膜上皮细胞,镜下可见细胞内着蓝色的纳米颗粒,细胞摄取的纳米颗粒随着浓度的增大而增多,具有浓度依赖性;本研究通过检测纳米颗粒对细胞存活率的影响,评价纳米颗粒标记羊膜上皮细胞的安全性,浓度大于50 μg/mL 的纳米颗粒能够显著降低细胞的存活率,细胞毒性显著高于对照组。结论：PEI-Fe3O4 纳米颗粒可用于标记人羊膜上皮细胞,并且在其工作浓度下未表现出显著的细胞毒性。

关键词： PEI-Fe3O4纳米颗粒人羊膜上皮细胞标记

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microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

microRNA-149-5p 对皮肤无瘢痕创伤修复作用机制的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：郎宏鑫庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p... 详细信息

目的：探讨microRNA-149-5p 对人皮肤创伤无瘢痕修复的作用,为microRNA 作为一种新型治疗手段应用于临床创伤修复提供科学理论基础.方法：通过高通量测序得到在人胚胎早中期(人孕28 周前)和晚期(人孕28 周后)皮肤组织中microRNA-149-5p 显著差异表达,并通过qRT-PCR 的方法对胚胎早中期和晚期的皮肤样本进行验证.并且通过双荧光素酶报告基因的方法验证microRNA-149-5p 的靶基因.将外源性microRNA-149-5p 的mimics 转染人永生化表皮细胞系(HaCaT),观察其对HaCaT的生物学作用.以及通过与人真皮成纤维细胞共培养检测其对成纤维细胞增殖、迁移以及无瘢痕修复相关基因的表达的情况.结果：人胚胎早中期的皮肤样本中microRNA-149-5p 的表达为晚期的1.8 倍(p＜0.05),并且qRT-PCR 验证此结果.将microRNA-149-5p 与含有IL-1β 3'UTR 的重组质粒报告载体共转染HaCaT,结果显示microRNA-149-5p 可以下调IL-1β 的表达.并且,过表达microRNA-149-5p 可以促进HaCaT 迁移,将转染microRNA-149-5p mimics 的HaCaT 通过与人真皮成纤维细胞共培养后,划痕实验证实且转染mimics 组可以促进成纤维细胞迁移;同时,qRT-PCR 检测到共培养后成纤维细胞中促进皮肤无瘢痕修复的TGFβ-3 和Collagen3表达量升高约1.5 倍(p＜0.05),α-SMA 表达量下降.结论：microRNA-149-5p 可以通过调控其靶基因IL-1β 的表达,而调控成纤维细胞无瘢痕修复相关因子的表达,从而参与皮肤创伤修复的过程.

关键词： microRNA 无瘢痕创伤修复

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新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作用研究

新microRNA N-70在EGF 调控人羊膜间充质干细胞增殖和迁移中的作...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：李莹张殿宝庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可... 详细信息

人羊膜间充质干细胞具有多项分化潜能、无伦理学争议、移植后免疫排斥少、易于在宿主体内成活等特点，在再生医学领域备受关注.表皮生长因子(EGF)是一种活性多肽物质，可以促进人羊膜间充质干细胞迁移，人羊膜负载hAMSCs 应用于创面可明显缩短创面愈合时间.MMP14 是一种细胞内激活的膜锚定蛋白，主要成分PEX 与CD44 相互作用形成异二聚体，并引起胞内细胞骨架重排，促进细胞的迁移.MMP14 还可以激活pro-MMP2 增加细胞外基质的降解，引导细胞迁移.

关键词：新microRNA N-70 人羊膜间充质干细胞迁移

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