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核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗原基因克隆表达及其抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的价值初探

中华检验医学杂志 2005年第11期28卷 1120-1125页

作者：李永哲刘镭孙庆国曾常茜赵振国佟大伟张蜀澜高扬于孟学朱立平 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北华大学医学院免疫学教研室北华大学医学院免疫学教研室吉林北方肝胆医院吉林北方肝胆医院中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达... 详细信息

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21、M15中表达;融合蛋白经NiNAT树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)及免疫印迹法(WB)进行免疫活性鉴定;应用表达蛋白建立间接ELISA,检测60名健康体检者、68例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、60例病毒性肝炎、60例结缔组织病患者血清中抗gp210、p62和LBR抗体。结果经重组质粒测序和酶切结果证实,gp210、p62和LBR目的基因已正确插入原核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架;SDSPAGE检测表达产物分别在69000、62000和27000处有一明显的蛋白表达条带,WB分析表明重组蛋白具有人gp210、p62和LBR抗原反应性。ELISA检测标本血清结果显示,PBC中,抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体阳性率分别为36.8%、30.9%和5.9%;而病毒性肝炎组、结缔组织病组和健康体检组中,除抗gp210抗体在结缔组织病患者中阳性率为1.7%外,3种自身抗体检测结果均为阴性。PBC组3种自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论本研究成功克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,并将其在大肠杆菌中成功表达。应用纯化融合蛋白建立的ELISA检测抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体,对PBC具有较好特异性,为PBC的特异性临床诊断提供了有效的工具。

关键词：肝硬化,胆汁性自身抗原核包膜蛋白

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临床病理讨论第326例——口眼干、发热、黄疸

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中华内科杂志 2005年第10期44卷 799-800页

作者：王迁李梦涛曾小峰中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100730

临床病理讨论　第326例——口眼干、发热、黄疸

关键词：临床病理讨论眼干发热 γ-谷氨酰转肽酶 mol/L 黄疸皮肤黄染抗体阳性直接胆红素腮腺肿大

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系统性红斑狼疮并急性胰腺炎15例临床分析

引用

中国实用内科杂志 2005年第6期25卷 520-521页

作者：陈伟光史群中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化内科 100032 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100032

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)合并急性胰腺炎的临床特点、病因、发病机制和治疗方法。方法回顾性分析1983-01～2003-03北京协和医院住院治疗的SLE合并急性胰腺炎患者15例。结果急性轻型胰腺炎12例,重型胰腺炎3例。所有患者均给予中到大... 详细信息

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)合并急性胰腺炎的临床特点、病因、发病机制和治疗方法。方法回顾性分析1983-01～2003-03北京协和医院住院治疗的SLE合并急性胰腺炎患者15例。结果急性轻型胰腺炎12例,重型胰腺炎3例。所有患者均给予中到大剂量糖皮质激素治疗,病情痊愈5例,好转5例,死亡5例。结论(1)急性胰腺炎是SLE病情活动的表现;(2)胰腺血管病变是导致胰腺炎的主要致病机制;(3)糖皮质激素可能不是导致胰腺炎的病因;(4)中到大剂量糖皮质激素治疗是安全有效的。

关键词：系统性红斑狼疮急性胰腺炎

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嗜酸性血管中心性纤维化的研究现状

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中华医学杂志 2005年第44期85卷 3166-3168页

作者：周佳鑫唐福林中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫内科 100730

嗜酸性血管中心性纤维化(eosinophilic angiocentric fibrosis,EAF)是一种主要累及鼻中隔和鼻外侧壁的慢性进展性纤维样损害的疾病,亦可累及声门以下的部位.该病最早于1983年由Holmes和Panje报导,当时称为"鼻内面部肉芽肿"(in... 详细信息

嗜酸性血管中心性纤维化(eosinophilic angiocentric fibrosis,EAF)是一种主要累及鼻中隔和鼻外侧壁的慢性进展性纤维样损害的疾病,亦可累及声门以下的部位.该病最早于1983年由Holmes和Panje报导,当时称为"鼻内面部肉芽肿"(intranasal granuloma faciale)[1].1985年Roberts和McCann报导了3个病例,并首先定义为"嗜酸性血管中心性纤维化"[2].直至今日,文献总共报导了28例.国内尚无相关报道.但近来北京协和医院已发现1例年轻男性患者,正在诊治中.为提高对该病的认识,现将该病的研究状况综述如下。

关键词：血管中心性纤维化嗜酸性北京协和医院男性患者鼻中隔纤维样进展性外侧壁报导

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B淋巴细胞克隆清除治疗类风湿关节炎的研究进展

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中华医学杂志 2005年第42期85卷 3021-3024页

作者：李鸿斌张奉春中国医学科学院北京协和医科大学北京协和医院风湿免疫内科 100730

类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症为主要病理改变的慢性进展性自身免疫性疾病.有较高的致残率.随着对滑膜中各种炎症细胞包括巨噬细胞、纤维母细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞以及相关细胞因子在致病机理的深入认识,针对免疫细胞或... 详细信息

类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症为主要病理改变的慢性进展性自身免疫性疾病.有较高的致残率.随着对滑膜中各种炎症细胞包括巨噬细胞、纤维母细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞以及相关细胞因子在致病机理的深入认识,针对免疫细胞或免疫分子的靶向治疗将RA引入了生物治疗的新阶段.目前,针对肿瘤坏死因子α(TNFα)的单克隆抗体(etanercept,infliximab,adalimummab)、白介素1受体拮抗物(IL-1Ra ,anakina)已经上市,并取得了较好的疗效.近来研究发现,B淋巴细胞在RA滑膜炎的免疫致病机理中有非常重要的作用,B淋巴细胞克隆清除对于RA的治疗是又一项新的生物治疗的突破[1].本文旨在就B淋巴细胞在RA滑膜炎发病机理、B淋巴细胞克隆清除对RA的治疗作用以及其安全性方面的研究进展进行综述。

关键词：类风湿关节炎清除治疗淋巴细胞克隆肿瘤坏死因子α(TNFα) infliximab 自身免疫性疾病白介素1受体拮抗物 B淋巴细胞滑膜炎症相关细胞因子

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CD_4^+CD_(25)^+T免疫调节细胞在疾病发生和临床应用中的意义

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中华医学杂志 2005年第41期85卷 2948-2951页

作者：陈万军张烜美国国立卫生院NIDCR黏膜免疫实验室中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

在正常人和小鼠体内,存在着一种T淋巴细胞亚群.由于此类细胞同时表达CD4和白细胞介素-2受体的α链(IL-2R或称CD25)表面抗原,故被命名为CD4+CD25+免疫调节T细胞(简称Treg).此类免疫调节细胞主要产生于胸腺,却能够在外周淋巴器官中抑制免... 详细信息

在正常人和小鼠体内,存在着一种T淋巴细胞亚群.由于此类细胞同时表达CD4和白细胞介素-2受体的α链(IL-2R或称CD25)表面抗原,故被命名为CD4+CD25+免疫调节T细胞(简称Treg).此类免疫调节细胞主要产生于胸腺,却能够在外周淋巴器官中抑制免疫反应,维持正常免疫反应和免疫耐受的平衡.已经发现,Treg在预防和抑制自身免疫性疾病、炎症、变态反应和移植排斥中有非常重要的作用.另一方面,此类细胞对肿瘤、免疫缺陷及病毒感染等疾病却有潜在的消极作用.因此,对Treg免疫调节细胞的研究是近年来免疫学及整个医学界最活跃的领域之一,有非常广泛的临床应用前景.现将Treg在疾病发生和临床应用中前景及研究进展综述如下。

关键词：免疫调节细胞疾病发生临床应用白细胞介素-2受体抑制免疫反应 T淋巴细胞亚群免疫调节T细胞自身免疫性疾病外周淋巴器官 IL-2R

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靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控的实验研究

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国际输血及血液学杂志 2006年第4期29卷 292-296页

作者：赵声明彭明婷顾惜春常乃柏中国协和医科大学研究生院卫生部北京医院血液科100730 卫生部临床检验中心卫生部北京医院血液科

目的探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性。方法构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成。AP20187可与F36v特异结... 详细信息

目的探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性。方法构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成。AP20187可与F36v特异结合引起JAK2二聚化而激活细胞内信号传导。该载体同时含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,用作检测细胞增殖的标记。应用MiniMACS免疫磁珠分选系统纯化分离脐血CD34+细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34+细胞。转导后的CD34+细胞在SCF、FL、TPO、IL-6细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187分别作为对照组和实验组。定期检测CD34+细胞基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养和裸鼠致瘤试验。结果分选的CD34+细胞纯度为91%以上,基因转移率为49．3%±6．2%；实验组AP20187+SCF+FL+TPO+IL-6(ASFTI)与对照组SCF+FL+TPO+IL-6(SFTI)组均可获得CD34+细胞大量扩增。随着培养时间的延长,实验组扩增的CD34+细胞GFP阳性率由基线水平逐渐上升于第11周时达到95%以上,而对照组GFP阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失。在培养6周左右,实验组CD34+CD38-、CD34+CD38+细胞亚群扩增倍数分别为(228．26±32．31)、(321．48±40．52),分别与对照组相比,差异有显著性。ASFTI组转基因CD34+细胞于12周后仍可产生造血祖细胞集落(BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix)。扩增后CD34+细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论转染JAK2基因的人脐血CD34+细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值。

关键词：酪氨酸激酶JAK2 基因治疗脐血CD34+细胞扩增

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夏秋季花粉症患者合并变应性鼻炎和变应性哮喘情况及其相互关系的研究

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中华医学杂志 2005年第24期85卷 1683-1687页

作者：尹佳岳凤敏王良录何海娟徐涛张宏誉李宏文利平孙劲旅顾建青韩少梅叶世泰中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院变态反应科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学统计室

目的探讨夏秋季花粉症患者中变应性鼻炎和变应性哮喘的关系。方法对2001年8月至2003年12月确诊为夏秋季花粉症的1120例患者进行吸入变应原皮内试验和血清特异性IgE检测(法玛西亚公司UinCAP100荧光酶联免疫法),同时对变应性鼻炎和变应性... 详细信息

目的探讨夏秋季花粉症患者中变应性鼻炎和变应性哮喘的关系。方法对2001年8月至2003年12月确诊为夏秋季花粉症的1120例患者进行吸入变应原皮内试验和血清特异性IgE检测(法玛西亚公司UinCAP100荧光酶联免疫法),同时对变应性鼻炎和变应性哮喘患者的发病年龄、发病时间、临床症状特点及哮喘的严重程度进行标准临床问卷调查和研究。结果夏秋季花粉诱发的变应性鼻炎的平均发病年龄27.9岁,变应性哮喘的平均发病年龄32.6岁,两者差异有统计学意义(P<0.001);在全部夏秋花粉症患者中,变应性鼻炎占97.9%(1096/1120),单纯变应性鼻炎占45.6%(511/1120);变应性哮喘占53.8%(602/1120),单纯变应性哮喘占0.9%(10/1120)。在变应性鼻炎患者中53.4%(585/1096)合并季节性变应性哮喘;在季节性变应性哮喘患者中97.2%(585/602)合并变应性鼻炎,30.8%(183/602)需要急诊治疗。结论变应性鼻炎合并哮喘的状况在夏秋季花粉症患者中不容忽视,夏秋季花粉是中国北方地区夏秋季哮喘的重要原因。

关键词：夏秋季花粉症相互关系季节性变应性哮喘荧光酶联免疫法变应性鼻炎患者法玛西亚公司发病年龄对变应性鼻炎临床问卷调查中国北方地区哮喘患者 IgE检测血清特异性吸入变应原 2003年 2001年皮内试验发病时间

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系统性红斑狼疮患者血清γ干扰素诱导的蛋白10表达水平与疾病活动的关系

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中华检验医学杂志 2005年第1期28卷 46-49页

作者：刘中娟林嘉友倪安平宋耀虹沈瑛张时民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730 中国医学科学院基础医学研究所免疫室

目的　探讨血清γ干扰素诱导的蛋白 10 (IP 10 )水平 ,与红斑狼疮 (SLE)疾病活动的关系及其在SLE肾损伤中的可能作用。方法　收集了 112例SLE患者及 4 0名正常健康人和 30例类风湿性关节炎 (RA)患者血清。应用ELISA测定血清IP 10水平。... 详细信息

目的　探讨血清γ干扰素诱导的蛋白 10 (IP 10 )水平 ,与红斑狼疮 (SLE)疾病活动的关系及其在SLE肾损伤中的可能作用。方法　收集了 112例SLE患者及 4 0名正常健康人和 30例类风湿性关节炎 (RA)患者血清。应用ELISA测定血清IP 10水平。结果　SLE活动组血清IP 10水平 (5 0 8 7± 2 5 2 4 ) μg/L较非活动组 (32 2 2± 95 9) μg/L和对照组 (12 4 9± 4 1 3) μg/L明显升高 (P<0 0 0 1)。活动性狼疮肾炎 (LN)组IP 10水平 (5 5 0 9± 2 0 6 1) μg/L与活动性无肾损伤组 (35 4 8±10 5 3) μg/L及对照组比较其差异均具有统计学意义 (P <0 0 0 1)。特别是Ⅲ型和Ⅳ型LN患者血清IP 10水平 (6 2 9 85± 16 4 ) μg/L升高最为显著 ,与Ⅱ型和Ⅴ型LN(30 2 9± 2 0 7 1) μg/L相比其差异具有统计学意义 (P <0 0 1)。另外 ,血清IP 10水平随着SLE疾病活动水平明显升高 ,与总的SLEDAI评分密切相关 (r=0 6 312 ,P <0 0 0 1) ,与SLEDAI肾评分亦密切相关 (r =0 6 880 ,P <0 0 0 1)。结论　以上结果表明IP 10可能在SLE肾损伤中起着十分重要的作用 ,血清IP 10水平与SLE疾病活动密切相关 ,可作为SLE疾病活动、尤其是监测狼疮肾损伤的重要指标。

关键词： IP-10 血清 SLE 肾损伤患者疾病 γ干扰素活动水平结论

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外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠过继免疫治疗中的作用

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中华外科杂志 2005年第11期43卷 726-729页

作者：戴梦华何维赵玉沛许春萍中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 中国医学科学院基础医学研究所免疫教研室

目的探讨外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠种植瘤体内过继免疫治疗中的作用。方法用胰腺癌细胞株Cap1注入BALB/c裸鼠皮下建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型。裸鼠随机分为3组,每组10只。A组为γδT细胞治疗,B组为αβT细胞治疗,C组给以无血清RPMI164... 详细信息

目的探讨外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠种植瘤体内过继免疫治疗中的作用。方法用胰腺癌细胞株Cap1注入BALB/c裸鼠皮下建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型。裸鼠随机分为3组,每组10只。A组为γδT细胞治疗,B组为αβT细胞治疗,C组给以无血清RPMI1640作为对照。从胰腺癌患者外周血中提取淋巴细胞,体外特异性扩增γδT细胞后注入裸鼠腹腔内,观察种植瘤裸鼠生存时间、肿瘤体积和肿瘤病灶坏死程度。结果A组成瘤率9/10,B、C组均为8/10(P>0.05)。当肿瘤生长到16、37和52d时,A组与B、C组肿瘤体积差别具有统计学意义(P值分别为0.019和0.022)。120d时C组8只种植瘤裸鼠全部死亡,B组有5只死亡,A组有3只死亡,3组之间死亡率差异具有统计学意义(P=0.023);KruskalWallis检验生存时间存在统计学差异(P=0.036)。γδT细胞治疗组中有4只肿瘤病灶出现坏死脱落,B和C组中各有1只肿瘤出现坏死;肿瘤生长到1个月后,B组和C组中裸鼠发生头部、眼眶、尾部、会阴部和对侧腹股沟区转移,A组仅1例发生对侧腹股沟部转移;A组中有1例裸鼠种植瘤脱落消失,而B组和C组均无肿瘤脱落、坏死消失发生。结论外周血γδT细胞对胰腺癌裸鼠种植瘤具有显著的抑瘤作用。

关键词： γδT细胞过继免疫治疗外周血 Kruskal-Wallis检验 BALB/c裸鼠胰腺癌细胞株细胞治疗生存时间肿瘤病灶肿瘤体积肿瘤生长种植瘤胰腺癌患者统计学差异淋巴细胞腹股沟区腹股沟部抑瘤作用 C组 B组坏死瘤体内

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