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第六届全国优生科学大会

目的建立一种基于多重实时荧光相对定量 PCR 技术并应用之于唐氏综合征分子诊断。方法选择21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧... 详细信息

目的建立一种基于多重实时荧光相对定量 PCR 技术并应用之于唐氏综合征分子诊断。方法选择21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的 TaqMan 探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标ΔCT 值区分唐氏综合征患者与正常人。采用 EB 病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血 B 淋巴细胞转化成永生细胞系作为标准品。结果通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在30ng/μl 时,变异系数最小(＜ 10%),以该浓度的 DNA 作为模板进行批内和批间实验的ΔCT 值重复性好。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P＜0．001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功。结论实时荧光定量 PCR 比较ΔCT 值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。

关键词：实时荧光 PCR 相对定量法唐氏综合征模板浓度先天愚型快速诊断永生细胞系

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RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究

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中华病理学杂志 2005年第3期34卷 150-153页

作者：马琳张军航刘芙蓉张学中国医科大学附属第二医院(盛京医院)妇产科沈阳110004 卫生部细胞生物学重点实验室中国协和医科大学基础医学院医学遗传研究室

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RA... 详细信息

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RASSF1A mRNA在卵巢癌SK OV3细胞中表达缺失;RASSF1A和RASSF1C在人卵巢癌组织中的表达率分别为40.0%(32/80)和91.3%(73/80)。RASSF1AmRNA的表达在浆液性癌、黏液性癌和内膜样癌组织中分别是41.2%(20/48),38.1%(8/21)和36.4%(4/11),P>0.05;临床Ⅰ期和Ⅱ期分别为71.4%和75.0%(10/14,9/12),明显高于临床Ⅲ期和Ⅳ期(26.7%、12/45和14.1%,1/9),P<0.05;高和中分化组分别为58.6%和50.0%(17/29,10/20),明显高于低分化组(16.1%,5/31),P<0.05。结论卵巢癌细胞和人原发卵巢癌组织中存在RASSF1AmRNA表达的缺失,RASSF1A的表达与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关,可能作为一种新的抑癌基因在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用,RASSF1AmRNA的缺失提示预后不良。

关键词：卵巢癌细胞系癌组织中表达率基因转录 RNA 原发临床分化 RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应

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转人载脂蛋白Eε4和突变淀粉前体蛋白基因小鼠的建立

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基础医学与临床 2005年第1期25卷 79-81页

作者：杨鹏薛越强廖峥嵘屠亚军琦祖和中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 河北医科大学基础医学院细胞生物室石家庄050017

将人载脂蛋白 (ApoEε4 )转基因鼠和突变前体蛋白 (APP)转基因小鼠交配 ,以建立h ApoEε4 /突变APP双转基因小鼠。共产出仔鼠 2 3只 ,经PCR初步筛选 ,并用Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA作进一步鉴定 ,得到 3只双转基因小鼠。该双转... 详细信息

将人载脂蛋白 (ApoEε4 )转基因鼠和突变前体蛋白 (APP)转基因小鼠交配 ,以建立h ApoEε4 /突变APP双转基因小鼠。共产出仔鼠 2 3只 ,经PCR初步筛选 ,并用Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA作进一步鉴定 ,得到 3只双转基因小鼠。该双转基因鼠的建立为进一步阐明ApoEε4的致病作用以及对AD的研究提供了理想的研究模型。

关键词：突变转基因小鼠前体蛋白载脂蛋白Eε4 转基因鼠阳性仔鼠交配基因组DNA Southern杂交

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肺癌组织p16基因启动子区甲基化的研究

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中华结核和呼吸杂志 2005年第3期28卷 201-202页

作者：张军航马琳刘芙蓉张林张学中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属第二医院妇产科中国医科大学附属第一医院胸外科中国协和医科大学基础医学院医学遗传研究室

DNA甲基化可以引起染色体结构、DNA构型和稳定性及DNA与蛋白质分子相互作用方式的改变,从而控制基因表达[1].研究发现,基因缺失和启动子区异常甲基化是p16基因失活的主要原因[2].我们联合应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation spec... 详细信息

DNA甲基化可以引起染色体结构、DNA构型和稳定性及DNA与蛋白质分子相互作用方式的改变,从而控制基因表达[1].研究发现,基因缺失和启动子区异常甲基化是p16基因失活的主要原因[2].我们联合应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSPCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化方法检测肺癌组织中p16基因的异常改变,以了解p16基因在肺癌发生发展中的作用.

关键词：肺癌肿瘤组织 p16基因启动子区甲基化聚合酶链反应

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SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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解剖学报 2005年第2期36卷 221-223页

作者：蒋毅陈实平董红燕冯长访王保君中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室北京100005 北京科卫临床诊断试剂有限公司北京100039

目的　制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。　方法　以重组SARS CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。... 详细信息

目的　制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。　方法　以重组SARS CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。　结果　共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS CoV呈阳性反应。 10株单抗的相对亲和常数在108～109mol L-1之间;10株中有1株为IgG2b、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B 有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg L。　结论　获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。

关键词： SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体双抗体夹心

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中国人群中STK15基因内两种非同义SNP的连锁不平衡和单体型分析

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遗传学报 2005年第4期32卷 331-336页

作者：陈立敖雪任群王振宁鲁翀徐岩姜莉罗阳徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→... 详细信息

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→T与人类肿瘤遗传易感性相关.应用PCR-RFLP技术确定了91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)两种SNP在中国人群中的基因型和单体型.采用巢式PCR方法扩增了193例正常个体的DNA样品,通过错配正向巢式内引物引入EcoRⅠ酶切位点.巢式PCR扩增产物用限制性内切酶EcoRⅠ和AccⅡ双酶切消化,其中EcoRⅠ能酶切91A,AccⅡ能切开169G,用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法鉴定双酶切结果,发现了4种可能的单体型中的3种,其单体型频率分别为:p(91A-169G)=68.65%,p(91T-169A)= 10.88%,p(91T-169G)=20.47%,p(91A-169A)=0%;它们组成的6种基因型及频率分别为: 91A-169G/91A-169G (46.11%),91A-169G/91T-169A(14.51%),91A-169G/91T-169G(30.57%),91T-169G/91T-169G(3.11%),91T-169G/91T-169A (4.15%),91T-169A/91T-169A(1.55%).等位基因及单体型数据分析结果表明,91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)之间存在连锁不平衡.

关键词： STK15基因单核苷酸多态单体型连锁不平衡

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质粒纯化利用离子交换柱的再生方法

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基础医学与临床 2005年第6期25卷 561-563页

作者：董敏王小竹李继红王恒中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原学研究室北京100005 河北北方学院细胞生物系河北075000

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质... 详细信息

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。

关键词：再生方法离子交换 mol/L NaOH溶液凝胶电泳分析 PCR扩增质粒DNA 提取纯化实验成本重复利用实用价值使用率 HCl 一次性琼脂糖

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进行性肌营养不良患者Myostatin基因的表达分析

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遗传学报 2005年第8期32卷 779-783页

作者：张勇陈岩陈嘉薇朱大海哈尔滨医科大学医学遗传学实验室哈尔滨150086 哈尔滨工业大学分子与细胞发育生物学实验室哈尔滨150001 哈尔滨工业大学分子与细胞发育生物学实验室哈尔滨150001 上海市第一人民医院病理科上海200080 哈尔滨医科大学医学遗传学实验室哈尔滨150086 哈尔滨工业大学分子与细胞发育生物学实验室哈尔滨150001 中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所北京100005

进行性肌营养不良是一组以进行性骨骼肌萎缩和无力为特征的肌源性肌病.肌肉抑制素(Myostatin)是最近发现的骨骼肌生长发育抑制因子.为探讨Myostatin基因与进行性肌营养不良病理发生的相关性,采用RT-PCR方法克隆了患者的Myostatin基因并... 详细信息

进行性肌营养不良是一组以进行性骨骼肌萎缩和无力为特征的肌源性肌病.肌肉抑制素(Myostatin)是最近发现的骨骼肌生长发育抑制因子.为探讨Myostatin基因与进行性肌营养不良病理发生的相关性,采用RT-PCR方法克隆了患者的Myostatin基因并测序、分析肌营养不良患者是否存在Myostatin基因突变;然后采用半定量RT-PCR方法检测患者中Myostatin基因的表达水平是否发生改变,同时用Western blot方法分析了肌营养不良患者中Myostatin蛋白的表达情况.结果发现,所研究的肌营养不良患者中没有携带Myostatin基因突变,但一些患者的Myostatin基因转录水平降低,部分患者Myostatin蛋白加工障碍.结果提示,一些类型(亚型)的进行性肌营养不良可能与肌肉抑制素Myostatin基因表达异常、蛋白加工障碍有关.

关键词：进行性肌营养不良肌肉抑制素基因蛋白加工

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氦氖激光穴位照射后缺氧缺血新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

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中国临床康复 2005年第23期9卷 196-197页

作者：李宛青陈雪梅吴爱群刘伟刘华郑州师范高等专科学校生命科学系河南省郑州市450044 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室河南省郑州市450052 解放军第二军医大学解剖学教研室上海市200433 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所解剖与组织胚胎学系北京市100005 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室河南省郑州市450052

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄... 详细信息

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄不拘。随机分为3组,即假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组,每组10只。缺氧缺血组与激光穴位照射组动物均制作成缺氧缺血模型,在清醒状态下实施左侧颈总动脉结扎术,术后在室温中恢复1～4h后,置于常压缺氧仓中,通入8mL/L氧气、920mL/L氮气(体积比)的混合气体,2h后将动物取出。缺氧缺血组不加任何治疗。激光穴位照射组于缺氧缺血后第2天,采用氦氖激光照射百会、大椎两穴,功率4mW,光斑直径3mm,每次照射10min,1次/d,同一时间进行,10d为1个疗程,共3个疗程,各疗程间隔2d。百会穴在颅顶正中,大椎穴在C7～T1之间,背部正中。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧。各组大鼠常规饲养34d后,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性,比色法测定丙二醛含量。结果:因缺氧缺血对动物造成了伤害,缺氧缺血组死亡3只,激光穴位照射组死亡2只。进入结果分析,假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组分别为10,7和8只。①大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性:缺氧缺血组显著低于假手术对照组和激光穴位照射组[(59.70±4.03)NU/mL,(76.24±2.43)NU/mL,(72.56±5.60)NU/mL,(t=5.03,4.83,P<0.05)]。②大鼠脑组织丙二醛含量:缺氧缺血组显著高于假手术对照组和激光穴位照射组[(267.58±30.55)mmol/L,(99.87±15.48)mmol/L,(135.29±32.76)mmol/L,(t=10.68,8.81,P<0.05)]。结论:氦氖激光穴位照射能提高、诱发缺氧缺血大鼠脑组织中超氧化物歧化酶的生成和活力,降低丙二醛水平。新生大鼠未成熟脑的可塑性较大,如果利用此关键时期进行氦氖激光穴位照射,可能对脑功能的恢复有一定帮助。

关键词：脑缺氧脑缺血氦氖激光超氧化物歧化酶丙二醛

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鸡caveolin-3 cDNA克隆与表达分析

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农业生物技术学报 2004年第5期12卷 543-547页

作者：余方陈岩张勇杨威朱大海哈尔滨150001 哈尔滨工业大学分子与细胞发育生物学实验室中国协和医科大学基础医学院中国协和医科大学基础医学院北京100005

用 RT-PCR 法克隆了鸡(Gallus gallus)caveolin-3cDNA。测序结果显示,克隆的鸡 cavoolin-3 cDNA 与 GenBank 已发表的序列一致。序列相似性比较表明,鸡与大鼠、小鼠和人的 caveolin-3cDNA 有78%左右的相似性,而氨基酸序列相似性约为80%... 详细信息

用 RT-PCR 法克隆了鸡(Gallus gallus)caveolin-3cDNA。测序结果显示,克隆的鸡 cavoolin-3 cDNA 与 GenBank 已发表的序列一致。序列相似性比较表明,鸡与大鼠、小鼠和人的 caveolin-3cDNA 有78%左右的相似性,而氨基酸序列相似性约为80%。对鸡 caveolin-3的组织特异性和体内不同发育阶段的 Northern blot 分析结果表明,鸡的 caveolin-3为横纹肌特异性表达,同时在1～10周的不同发育阶段中没有表现出明显的变化。

关键词：鸡 cayeolin-3 肌肉组织基因表达

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