检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

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病毒载体与造血干细胞基因治疗

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Acta Genetica Sinica 2003年第4期30卷 383-388页

作者：董文吉祖振响刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干... 详细信息

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干细胞转导条件 ,其介导的腺苷脱氨酶缺陷引起的严重联合免疫缺陷和X染色体连锁的严重联合免疫缺陷的基因治疗已经获得初步成功 ;其他整合型病毒载体如慢病毒和腺相关病毒载体 ,也在临床前造血干细胞基因治疗研究中得到广泛应用。从病毒载体。

关键词：造血干细胞反转录病毒载体慢病毒载体腺相关病毒载体基因治疗

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X-连锁肾上腺脑白质营养不良患者成纤维细胞系MnSOD基因表达增强

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基础医学与临床 2003年第2期23卷 146-149页

作者：胡兰 Kirby DSmith 黄尚志中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所 JohnsHopkins大学医学院

探讨X 连锁肾上腺脑白质营养不良 (X linkedAdrenoleukodystrophy,X ALD)个体的MnSOD表达的变化与发病机理的相关性。应用免疫组化、免疫荧光、定量PCR法 ,观察锰过氧化物岐化酶 (Mnactivatedsuperoxidedismutase ,MnSOD)表达的差异。... 详细信息

探讨X 连锁肾上腺脑白质营养不良 (X linkedAdrenoleukodystrophy,X ALD)个体的MnSOD表达的变化与发病机理的相关性。应用免疫组化、免疫荧光、定量PCR法 ,观察锰过氧化物岐化酶 (Mnactivatedsuperoxidedismutase ,MnSOD)表达的差异。免疫组化的结果显示X ALD小鼠脑组织中MnSOD的含量高于野生型小鼠 ;免疫荧光显示CCER(X ALD中最严重的一种 )患者成纤维细胞中的MnSOD含量高于健康人 ;定量PCR显示CCER患者成纤维细胞中MnSODmRNA量高于健康人 ,并且MnSOD能被 4PBA诱导。推测氧化应激升高可能是造成X ALD患者神经系统退行性改变的原因之一。而MnSOD增加则有助于细胞清除氧自由基 ,缓解氧化应激 ,为应用 4PBA治疗X

关键词： X-连锁肾上腺脑白质营养不良成纤维细胞 MnSOD 基因表达发病机理隐性遗传代谢病

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糖原累积症Ⅰa型-纯合G727T突变患儿的表型分析

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中华儿科杂志 2003年第4期41卷 252-255,T003页

作者：邱正庆魏珉刘歌刘国仰中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科100730 中国医学科学院基础医学研究所遗传室

目的　对临床诊断为糖原累积症Ⅰa型的患儿及其父母进行葡萄糖 6 磷酸酶 (G6Pase)的基因突变筛查 ,并对基因突变完全相同的患儿进行临床特点的比较分析。方法　提取患儿及其父母外周血DNA ,分别进行G6Pase基因五个外显子的PCR扩增 ,纯... 详细信息

目的　对临床诊断为糖原累积症Ⅰa型的患儿及其父母进行葡萄糖 6 磷酸酶 (G6Pase)的基因突变筛查 ,并对基因突变完全相同的患儿进行临床特点的比较分析。方法　提取患儿及其父母外周血DNA ,分别进行G6Pase基因五个外显子的PCR扩增 ,纯化后进行DNA直接测序 ;对基因突变相同的 6家系 7例患儿进行临床表现、生化改变及对治疗反应的比较分析。结果　所有 7例患儿均为G6Pase基因外显子 5核苷酸位点第 72 7处纯合子型G→T的单个碱基突变 (G72 7T) ,而其父母均为此杂合突变的携带者。基因突变完全相同的 7例患儿临床表现的严重性、对治疗的反应不全相同 ,除经典的低血糖、生长发育落后、肝脏肿大、肾脏肿大、代谢性酸中毒和乳酸血症外 ,尚有脾大 (1例 ) ,轻度肝功能受损 (6例 ) ,多发肝腺瘤 (1例 )等。结论　G72 7T突变很可能是中国人种糖原累积症Ⅰa型的较常见突变 ;具有相同突变的患儿不仅临床表现轻重不同 ,而且 ,对生玉米淀粉治疗的反应也各有差异 ;通过典型的临床及生化表现辅以外周血基因分析。

关键词：糖原累积症Ia型 G727T 突变患儿表型分析纯合子

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鼻咽癌患者外周血γδT细胞的体外扩增及对鼻咽癌细胞的体外杀伤活性

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临床耳鼻咽喉科杂志 2003年第3期17卷 155-158页

作者：王小路何维张连山张素梅何洪彬姜鸿中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫研究室

目的 :通过体外扩增鼻咽癌 (NPC)患者外周血γδT细胞 ,研究对NPC细胞体外细胞毒作用 ,以探讨γδT细胞在NPC免疫机制中的作用。方法 :用抗体固相法体外扩增 7例NPC患者 (NPC组 )及 6例健康者(对照组 )的外周血γδT细胞 ,以流式细胞仪... 详细信息

目的 :通过体外扩增鼻咽癌 (NPC)患者外周血γδT细胞 ,研究对NPC细胞体外细胞毒作用 ,以探讨γδT细胞在NPC免疫机制中的作用。方法 :用抗体固相法体外扩增 7例NPC患者 (NPC组 )及 6例健康者(对照组 )的外周血γδT细胞 ,以流式细胞仪检测γδT细胞亚型 ,用MTT法观察不同来源的γδT细胞在不同效靶比条件下 ,对Daudi、CNE1和CNE2细胞的细胞毒作用。结果 :对照组与NPC组外周血γδT细胞经体外扩增 ,纯度可达到 82 %以上 ,其中 90 %为Vγ9/Vδ2亚型 ;γδT细胞对Daudi、CNE 1和CNE 2细胞显示出作用强度相同的细胞毒作用 (P >0 .0 5 )。随效靶比升高 ,γδT细胞对CNE 1和CNE 2的细胞毒作用明显增强 ,在相同效靶比时对Daudi细胞的细胞毒作用最强。结论

关键词：鼻咽肿瘤 γδT淋巴细胞细胞毒作用 T细胞扩增

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奇静脉逆行灌注在主动脉手术中对脊髓保护的解剖学研究

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中国临床解剖学杂志 2003年第1期21卷 49-52页

作者：张平王乃利寇印华张晓东中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院解剖学教研室北京100005

目的 :为主动脉手术中脊髓保护提供形态基础和术式设计。方法 :解剖观察了 3 1例成人标本的奇静脉系、椎静脉丛 ,以及脊髓静脉回流途径。结果 :观测奇静脉系及相关静脉 ,其直径为 ( x±s) :奇静脉为 (9.2± 1.9)mm ,半奇静脉为 ... 详细信息

目的 :为主动脉手术中脊髓保护提供形态基础和术式设计。方法 :解剖观察了 3 1例成人标本的奇静脉系、椎静脉丛 ,以及脊髓静脉回流途径。结果 :观测奇静脉系及相关静脉 ,其直径为 ( x±s) :奇静脉为 (9.2± 1.9)mm ,半奇静脉为 (5 .5± 1.2 )mm ,副半奇静脉为 (3 .8± 0 .9)mm ,左最上肋间静脉为 (2 .0±0 .4)mm ,右最上肋间静脉为 (1.9± 0 .4)mm ,左腰升静脉为 (2 .3± 0 .5 )mm ,右腰升静脉为 (2 .2± 0 .6)mm。根据奇静脉属支的配布和肋间静脉汇入形式 ,将奇静脉系分为 4种类型。奇静脉及其属支中存在静脉瓣 ,有个体差异。脊髓静脉密集 ,与椎内静脉丛有丰富的网络连接 ,并通过神经根静脉与椎外静脉丛、奇静脉系相交通。结论 :在主动脉手术中应用奇静脉逆行灌注脊髓保护 ,是一种行之有效的新术式。

关键词：解剖学研究主动脉手术脊髓保护逆行灌注奇静脉

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顺式调控元件NF-κB在尼古丁诱导ICAM-1表达中的作用

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中国病理生理杂志 2003年第2期19卷 145-149页

作者：周卫辉陈祥银中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测... 详细信息

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测尼古丁刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果 :成功构建了 6种含有不同长度ICAM - 1基因启动子序列以及启动子中NF -κB和Sp - 1位点突变序列的荧光素酶报告基因质粒。与对照组相比尼古丁可促进含有启动子序列 - 579bp(pGL3E - 579/ +36) (P <0 .0 5) ,- 2 30bp (pGL3E - 2 30 / +36) (P<0 .0 5)以及启动子Sp- 1位点突变体 (pGL3E -Sp - 1 -MU) (P <0 .0 5)的荧光素酶基因表达 ,而下游NF -κB位点的删切重组体 (pGL3E - 1 34/ +36)和含有NF -κB位点突变体 (pGL3E -NF -κB -MU)的重组荧光素酶报告基因质粒在尼古丁诱导下与对照组相比荧光素酶表达量无明显差异。结论 :ICAM - 1基因启动子顺式作用元件下游NF -κB位点在尼古丁诱导ICAM -

关键词：烟碱 NF-κB 细胞粘着因子

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RSD-7的克隆及其在睾丸组织中的定位

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中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 289-293,T002页

作者：张晓东苟大为缪时英张建超宗书东王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 NationalFamilyPlanningResearchInstitute

目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制。方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northernblot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术。结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7。全长1238bp,编码... 详细信息

目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制。方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northernblot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术。结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7。全长1238bp,编码232个氨基酸,GenBank接收号为AF315467。序列分析显示,RSD-7基因编码蛋白质含有1个Ubiquitin-like结构域。(2)Northernblot结果显示,在8种成鼠组织中,RSD-7基因仅在睾丸组织中有明显表达。不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northernblot结果显示,出生后30d的大鼠RSD-7基因开始表达,一直到120d仍有表达。(3)RSD-7cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了GST-RSD-7融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗RSD-7蛋白的多克隆抗体。(4)通过免疫组织化学方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli细胞胞浆和质膜上。结论初步分析了RSD-7基因的表达特征并制备了抗RSD-7多克隆抗体,为进一步研究RSD-7蛋白在精子发生过程中的功能提供了条件。

关键词：精子发生基因克隆 RSD-7cDNA Sertoli细胞

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抗异质性胞核核糖核蛋白A2/RA33抗体酶联免疫吸附法的建立及临床应用

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中华检验医学杂志 2003年第7期26卷 428-430页

作者：杨玲于孟学林嘉友高杨尹宏恩中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基础医学研究所免疫室 100730

目的　探讨酶联免疫吸附法 (ELISA)检测抗异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNPA2 ) /类风湿关节炎 (RA) 33抗体在不同风湿性疾病患者中的阳性率及对RA早期诊断的意义。方法　以纯化的重组蛋白hnRNPA2为抗原 ,用ELISA检测RA 179例、系统性红... 详细信息

目的　探讨酶联免疫吸附法 (ELISA)检测抗异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNPA2 ) /类风湿关节炎 (RA) 33抗体在不同风湿性疾病患者中的阳性率及对RA早期诊断的意义。方法　以纯化的重组蛋白hnRNPA2为抗原 ,用ELISA检测RA 179例、系统性红斑狼疮 (SLE) 14 1例、其他弥漫性结缔组织病 (CTD) 97例、血清阴性脊柱关节病 (SPA) 30例、骨关节炎 (OA) 10例、关节痛 /关节炎5 9例、正常对照 4 0名 ,比较抗hnRNPA2 /RA33抗体在各组人群中的阳性率 ,并评价其与RA患者临床和实验室检查指标间的关系及早期诊断的价值。结果　抗hnRNPA2 /RA33抗体在RA患者中的敏感性为 36 9%、特异性为 87 1% ,在SLE、其他CTD、SPA和OA患者中阳性率分别为 19 2 %、7 2 %、6 8%和 0。抗hnRNPA2 /RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为 4 3 3%。结论　以纯化的重组蛋白hnRNPA2为抗原的ELISA是检测抗hnRNPA2 /RA33抗体 ,早期诊断RA的可靠方法。

关键词：类风湿关节炎酶联免疫吸附法抗异质性胞核核糖核蛋白A2 33抗体临床应用

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断层皮片成纤维细胞原代培养法

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中华整形外科杂志 2003年第6期19卷 450-451页

作者：赵玉明左瑾曹蕊王佳琦中国医学科学院中国协和医科大学整形外科医院北京100041 中国医学科学院基础医学研究所国家分子生物学重点实验室

目的　在人成纤维细胞的生物学特性观察研究中 ,进行成纤维细胞的原代培养 ,以获得足够量的成纤维细胞。方法　我们采用整形外科断层取皮技术 ,使用细胞刮刀 ,可相对简单获取有活力的成纤维细胞 ,并应用台盼蓝细胞活力染色排除法进行检... 详细信息

目的　在人成纤维细胞的生物学特性观察研究中 ,进行成纤维细胞的原代培养 ,以获得足够量的成纤维细胞。方法　我们采用整形外科断层取皮技术 ,使用细胞刮刀 ,可相对简单获取有活力的成纤维细胞 ,并应用台盼蓝细胞活力染色排除法进行检测。结果　该方法简单、经济可获取足够量的成纤维细胞 ,使得短期内即可获得大量的传代细胞。 1cm× 2cm的断层皮片可达到的细胞的数量级 10 6 左右。结论　断层皮片成纤维细胞培养方法 ,较胰酶消化法和组织块贴壁法有明显的优越性 ,在进行成纤维细胞移植方面 ,值得加以推广和应用。

关键词：断层皮片成纤维细胞原代培养法生物学特性断层取皮技术

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