检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 852-854页

作者：阳洪波袁建刚彭小忠中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

哺乳动物中枢神经系统中 D 构象丝氨酸的区域性高浓度分布与N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体相一致 .它主要由丝氨酸消旋酶将 L 丝氨酸直接消旋而来 ,也可能通过肠道菌群产生后吸收至体内 ,最终被 D 构象氨基酸氧化酶氧化 .这种从胶质细... 详细信息

哺乳动物中枢神经系统中 D 构象丝氨酸的区域性高浓度分布与N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体相一致 .它主要由丝氨酸消旋酶将 L 丝氨酸直接消旋而来 ,也可能通过肠道菌群产生后吸收至体内 ,最终被 D 构象氨基酸氧化酶氧化 .这种从胶质细胞而非神经元来源的“异常”构象氨基酸作为一种新型神经递质 ,不仅更新了传统“神经递质”的定义。

关键词： D构象丝氨酸丝氨酸消旋酶 NMDA受体中枢神经系统功能

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新合成的阿片受体配基对稳定转染μ阿片受体的CHO细胞的受体结合特性

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中国医学科学院学报 2003年第1期25卷 79-82页

作者：胡萍叶菜英仇缀佰杨惠芬张德昌中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

目的研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基犤3H犦diprenorphine(3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结... 详细信息

目的研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基犤3H犦diprenorphine(3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结合特征及一系列新合成阿片配基的竞争性结合特征。结果(3H-dip)结合μ阿片受体的平衡解离常数Kd值为1.06nmol/L;受体最大容量Bmax为930fmol/mg蛋白。竞争性结合实验表明3#和12#配基对μ阿片受体的亲和力高于DAMGO和吗啡。2#、6#、8#和9#配基对μ受体的亲和力低于DAMGO和吗啡。结论新配基3#和12#对μ亚型的阿片受体有良好的亲和力。2#、6#、8#和9#配基对μ受体的亲和力较低。

关键词：阿片受体配基受体结合 μ阿片受体

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表达狂犬病毒糖蛋白基因复制缺陷型重组腺病毒的构建及其特性

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中国医学科学院学报 2003年第6期25卷 650-654页

作者：李文辉张云王树惠刘力杨帆中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原室北京100005

目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病... 详细信息

目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病毒具有典型的病毒形态;病毒基因组稳定;GP基因可被转录;重组病毒表达的GP蛋白相对分子质量为66000,与天然GP相对分子质量相符表达的GP蛋白可被兔抗狂犬病毒免疫血清特异性识别;小鼠免疫-攻击试验可保护87.5%～100%动物。结论成功地构建了表达狂犬病毒CVS-N2C毒株GP基因的复制缺陷型重组腺病毒,并表现了良好的免疫效果。

关键词：重组腺病毒狂犬病毒 CVS-N2C 复制缺陷型

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G蛋白对阿片受体调节延迟整流钾通道的影响

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中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 297-300页

作者：叶菜英李庆霞于晓丽齐京京李娟张德昌中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

目的观察G蛋白在阿片受体激动剂对钾通道的双相调节中所起的作用。方法利用膜片钳技术(patchclamp),采用全细胞记录方式,观察在电极液中分别加入G蛋白稳定抑制剂(GDPβS)、百日咳毒素(PTX)、二磷酸核苷酸激酶(NDPK)及环磷酸腺苷(cAMP)后... 详细信息

目的观察G蛋白在阿片受体激动剂对钾通道的双相调节中所起的作用。方法利用膜片钳技术(patchclamp),采用全细胞记录方式,观察在电极液中分别加入G蛋白稳定抑制剂(GDPβS)、百日咳毒素(PTX)、二磷酸核苷酸激酶(NDPK)及环磷酸腺苷(cAMP)后,对阿片受体激动剂调节NG108-15细胞膜延迟整流钾通道作用的影响。结果(1)GDPβS能够阻断高浓度δ-阿片受体选择性激动剂(DPDPE)对钾电流的兴奋作用及低浓度DPDPE对钾电流的抑制作用(P<0.05)。(2)高浓度DPDPE对钾电流的兴奋性调节作用完全被PTX阻断(P<0.05),而霍乱毒素CTX对DPDPE对钾电流的双相调节作用无影响。(3)尿苷二磷酸(UDP)能够阻断NDPK对高浓度阿片受体激动剂对细胞膜钾通道兴奋性调节作用,而UDP对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。(4)cAMP对高浓度阿片受体激动剂具有调节作用(P<0.05),而对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。结论阿片受体对NG108-15细胞膜上延迟整流钾通道具有双相调节作用,其中高浓度激动剂引起的兴奋作用可能由Gi/o介导,并与cAMP有关,而其抑制作用可能是由G蛋白βγ亚单位直接作用。

关键词：膜片钳延迟整流钾通道 G蛋白

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茶儿茶素抗大鼠脑缺血再灌注损伤与对脑细胞内Ca^(2+)的作用

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中国药学杂志 2003年第12期38卷 917-919页

作者：方芳崔志清韩永晶中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所北京100050 天津医科大学基础医学院药理教研室天津300070

目的　本研究观察茶儿茶素对脑缺血再灌注大鼠脑细胞内钙离子浓度和海马组织细胞的作用 ,进一步阐明其对缺血再灌注损伤的保护机制。方法　采用钳夹双侧颈总动脉和迷走神经缺血 6 0min再灌注 30min的动物模型 ,荧光分光光度法测定脑细... 详细信息

目的　本研究观察茶儿茶素对脑缺血再灌注大鼠脑细胞内钙离子浓度和海马组织细胞的作用 ,进一步阐明其对缺血再灌注损伤的保护机制。方法　采用钳夹双侧颈总动脉和迷走神经缺血 6 0min再灌注 30min的动物模型 ,荧光分光光度法测定脑细胞内钙离子浓度并观察神经细胞损伤程度。结果　模型组脑细胞内钙离子浓度显著高于正常组 (P <0 .0 1) ,海马组织呈明显的损伤 ,茶儿茶素 (5 0mg·kg-1,ip ,qd× 7)组显著降低脑缺血再灌注后脑细胞内钙离子浓度 ,损伤程度也较模型组轻。结论　茶儿茶素可能通过降低脑细胞内钙离子浓度 ,保护脑组织对抗缺血再灌注损伤。

关键词：茶儿茶素脑缺血再灌注损伤脑细胞 Ca^2+ 海马组织

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A类清道夫受体I型的过量表达对转基因小鼠血脂水平的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第2期35卷 117-121页

作者：高俊刘德培黄粤董文吉吴敏冯东晓梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室

清道夫受体能结合带负电荷的大分子 ,特别是经过修饰的脂蛋白颗粒 ,与血浆脂质代谢有密切关系。为研究A类清道夫受体的过量表达对血脂代谢的影响 ,首先从小鼠巨噬细胞中经RT PCR获得鼠清道夫受体A类I型 (MSR AI)的表达序列 ,插入到含人... 详细信息

清道夫受体能结合带负电荷的大分子 ,特别是经过修饰的脂蛋白颗粒 ,与血浆脂质代谢有密切关系。为研究A类清道夫受体的过量表达对血脂代谢的影响 ,首先从小鼠巨噬细胞中经RT PCR获得鼠清道夫受体A类I型 (MSR AI)的表达序列 ,插入到含人清道夫受体基因增强子和金属硫蛋白启动子的真核表达载体中。选择Km×ICR杂交一代为实验小鼠 ,显微注射、移卵后 ,获得转基因小鼠 ,经PCR、Southern杂交鉴定 ,获得完整整合外源DNA序列的首建鼠 4只 ,拷贝数分别为 15、6、2和 4。Northern杂交实验显示A类清道夫受体基因主要在脾脏中表达 ;在金属锌诱导下 ,MSR AI表达有所增高 ,同时血清中甘油三酯水平显著升高 ,胆固醇浓度下降。结果表明A类清道夫受体的过量表达能显著影响血脂水平 ,具体机制需进一步研究。

关键词：清道夫受体金属硫蛋白启动子转基因小鼠过量表达血脂

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波比宁对鼠的镇痛及抗炎作用

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基础医学与临床 2003年第5期23卷 570-571页

作者：叶菜英李娟杨惠芬于晓丽陆久怡张德昌中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室

寻找无成瘾而又具有镇痛作用的化合物受到普遍关注，据国外有关报道，一种富马酸异哌丙吡胺（波比宁 Probne）化合物在临床上具有强的镇痛作用，并且起效迅速，而无成瘾性，与同类镇痛药相比，副作用小，具有独特的疗效。目前国内已有... 详细信息

寻找无成瘾而又具有镇痛作用的化合物受到普遍关注，据国外有关报道，一种富马酸异哌丙吡胺（波比宁 Probne）化合物在临床上具有强的镇痛作用，并且起效迅速，而无成瘾性，与同类镇痛药相比，副作用小，具有独特的疗效。目前国内已有生产，但波比宁的镇痛及抗炎作用，国内未见报道。为此本文观察波比宁对鼠的镇痛及抗炎作用。

关键词：波比宁鼠镇痛抗炎实验

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一种简便的染色质免疫沉淀法的建立

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生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 634-638页

作者：傅湘辉刘德培辛立郝德龙董文吉黄粤梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

染色质结构和基因表达调节是当前国际前沿研究的热点 .染色质免疫沉淀法是研究染色质结构的首选方法 ,它不仅可用来研究体内反式因子与DNA的相互作用 ,也可以用来研究组蛋白修饰与基因表达的关系 .综合国外相关文献 ,建立了一种简便的... 详细信息

染色质结构和基因表达调节是当前国际前沿研究的热点 .染色质免疫沉淀法是研究染色质结构的首选方法 ,它不仅可用来研究体内反式因子与DNA的相互作用 ,也可以用来研究组蛋白修饰与基因表达的关系 .综合国外相关文献 ,建立了一种简便的染色质免疫沉淀法 ,并通过对诱导前后的MEL细胞中 β 珠蛋白基因簇组蛋白H3乙酰化的研究 ,证实了其可操作性 .结果表明 :高敏位点HS2和活跃基因 βmaj的启动子区域存在较高的组蛋白乙酰化水平 ,且诱导前后变化显著 ,而不活跃基因Ey的启动子区域则几乎检测不到组蛋白的乙酰化 ,且诱导前后无明显变化 .

关键词：染色质免疫沉淀法染色质 MEL细胞组蛋白乙酰化基因表达调节

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AP-1在血管内皮细胞PAI-1表达中的作用

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中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 307-311页

作者：李晓冬祖淑玉王雯朱广瑾中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京100005

目的研究核转录因子激活蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)在肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα,TNF-α)、弱氧化修饰低密度脂蛋白(minimalmodifiedlowdensitylipoprotein,mmLDL)诱导血管内皮细胞PAI-1基因表达中的转录调控机制。方法进行人脐静脉内皮细胞(humanvascularendothelialcells,HUVECs)的培养和鉴定。采用基因重组技术,构建4个含人PAI-1基因不同长度5'上游序列的荧光素酶报告基因质粒,并结合瞬时转染分析实验,初步确定PAI-1基因上游具有调控作用的是位于-823到-553之间的AP-1元件。为进一步确证AP-1元件的调控作用,采用PCR法对该元件进行定点突变。结果TNF-α能明显诱导构建质粒pGL3-PAI-1-823/+90荧光素酶的表达,但对质粒pGL3-PAI-1-823/+90的3个突变体诱导作用明显降低;mmLDL也能明显诱导质粒pGL3-PAI-1-823/+90荧光素酶表达,但对质粒pGL3-PAI-1-823/+90的3个突变体的诱导作用不明显。结论在TNF-α、mmLDL作用下,内皮细胞转录表达PAI-1基因过程中,3个AP-1元件起着重要的作用。

关键词：纤溶酶原激活物抑制剂内皮细胞激活蛋白-1元件

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CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

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中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

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