检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2001年第15期46卷 1300-1303页

作者：刘秉胜吴宁华沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为研究ｃＡＭＰ应答元件（ＣＲＥ）在人热休克蛋白ｈｓｐ９０β基因表达中的作用，构建了数个受ｈｓｐ９０β基因不同长度调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒．分别转染Ｊｕｒｋａｔ细胞并检测４２℃１ｈ热诱导前... 详细信息

为研究ｃＡＭＰ应答元件（ＣＲＥ）在人热休克蛋白ｈｓｐ９０β基因表达中的作用，构建了数个受ｈｓｐ９０β基因不同长度调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒．分别转染Ｊｕｒｋａｔ细胞并检测４２℃１ｈ热诱导前后ＣＡＴ活性．结果发现删除ｈｓｐ９０β基因上游含ＣＲＥ片段（－１７３／－９１ｂｐ）后，ＣＡＴ的热诱导表达活性降低了６７％．电泳迁移率变更分析（ＥＭＳＡ）显示热休克后Ｊｕｒｋａｔ细胞的核抽提物中磷酸化的ＣＲＥＢ与该片段呈特异性结合．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验及ＰＫＡ活性检测发现ＣＲＥＢ的磷酸化程度及ＰＫＡ活性均随热诱导时间的延长而增加．以上结果表明：磷酸化的ＣＲＥＢ通过与ｈｓｐ９０β因上游的ＣＲＥ结合参与该基因的热诱导表达，并可能与ＰＫＡ传导途径有关．

关键词： hsp90β基因 CREB 环腺苷酸应答元件结合蛋白热诱导表达人热体克蛋白

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利用PCR构建多拷贝HIV-1 TAR序列的串联体

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基础医学与临床 2001年第1期21卷 85-87页

作者：阴彬白龙川袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

建立“自身引物—模板”PCR方法 ,并应用此方法成功地扩增了多拷贝HIV 1TAR片段的同向串联体。此方法简便 ,省力 ,可用于多拷贝基因探针、多拷贝反义基因片段、多拷贝抗原表位的扩增和克隆。

关键词：自身引物-模板串联板聚合梅链反应 HIV-1TAR 多拷贝基因探针

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小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 158-162页

作者：李永海苏华何维崔莲仙越智宏伦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室国家医学分子生物学重点实验室北京100005 日本老化制御研究所

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从... 详细信息

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达克隆

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温筋通对糖尿病大鼠心血管组织糖基化终产物的形成及其受体和ICAM-1表达的影响

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中国病理生理杂志 2001年第11期17卷 1067-1071页

作者：张建伟孙仁宇唐代屹梁晓春中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理研究室北京100005 北京协和医院中医科北京100730

目的 :研究中药复方温筋通 (WJT)对糖尿病大鼠心血管糖基化终产物 (AGEs)的形成以及AGEs受体(RAGE)和细胞间粘附因子 - 1(ICAM - 1)表达的影响。方法 :用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型。采用荧光法、RT-PCR和原位杂交的方法对心血管组织... 详细信息

目的 :研究中药复方温筋通 (WJT)对糖尿病大鼠心血管糖基化终产物 (AGEs)的形成以及AGEs受体(RAGE)和细胞间粘附因子 - 1(ICAM - 1)表达的影响。方法 :用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型。采用荧光法、RT-PCR和原位杂交的方法对心血管组织AGEs的沉积以及RAGE和ICAM - 1的表达进行检测。结果 :WJT治疗组AGEs形成量明显低于糖尿病模型组 (P <0 0 1) ,其治疗作用与AG相当 ;RAGE和ICAM - 1主要在内皮细胞表达 ,其表达量与AGEs的沉积量呈明显正相关 (P <0 0 1)。结论 :WJT可明显降低糖尿病大鼠主动脉和心肌组织AGEs的形成量以及RAGE和ICAM - 1的表达。

关键词：糖基化终产物细胞间粘着分子糖尿病心血管组织温筋通 ICAM-1 中医药治疗大鼠

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转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

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解剖学报 2001年第1期32卷 55-60页

作者：张虹冯捷付天云叶雪章静波北京大学第二临床医学院妇科肿瘤中心北京100034 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式... 详细信息

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式细胞仪检测 Fas表达变化。以 Annexin- V和 MTT法检测转染反义 Fas基因对 Ju-rkat细胞凋亡的影响。采用 MTT体外杀伤实验观察 3AO对 Jurkat细胞杀伤变化。　结果　 6种卵巢癌细胞均表达Fas和 Fas L。pc DNA3-反义 Fas基因可以使 Jurkat细胞表达 Fas量下降并部分阻断 Fas单抗诱导的 Jurkat细胞凋亡 ,3AO对其杀伤减弱。　结论　卵巢癌细胞表达 Fas L可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一 ;应用反义技术阻断 Fas表达 ,可部分阻断 Fas单抗诱导 Jurkat细胞凋亡 ,可削弱肿瘤细胞对淋巴细胞的攻击。

关键词： T淋巴细胞卵巢癌细胞凋亡 FsaL Fas基因基因转染信号传递

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小鼠增龄相关性胸腺基因的克隆

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中国免疫学杂志 2001年第8期17卷 397-399,403页

作者：李永海苏华何维越智宏伦卢兴武崔莲仙中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点试验室北京100005 日本老化制御研究所

目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺c... 详细信息

目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺cDNA文库中筛选出一个 82 7bp的阳性克隆 ,并用PCR扩增延长为 140 6bp的cDNA片段 (mt2 2 140 6 )。结果 :同源性分析结果表明 ,mt2 2 140 6含一编码 438AA的开放阅读框 ,与人延伸因子 1γ(EF1γ)高度同源 ,其Genbank接收号为BE2 410 6 2。结论 :获得一个含完整开放阅读框与小鼠胸腺增龄相关的基因。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达增龄相关基因

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白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

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基础医学与临床 2001年第4期21卷 333-335页

作者：胡晶晶李宏帆程小款衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ... 详细信息

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL

关键词：白细胞介素2受体α亚基多聚二磷酸腺核糖聚合酶细胞凋亡 T淋巴细胞

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应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因

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中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 281-284页

作者：杜占文张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PC... 详细信息

目的应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PCR扩增，然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序，应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较。结果克隆并测序了30个扩增片段，22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的，并具有简便、高效等优点。此外，还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。

关键词：锌指蛋白简并引物 RT-PCR 基因克隆造血细胞分化

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从哺乳动物细胞中快速分离质粒

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基础医学与临床 2001年第4期21卷 383-384页

作者：唐开福阴彬金鉴张银辉丰竹中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

介绍一种从哺乳动物细胞中快速分离质粒的方法。哺乳动物细胞经裂解后 ,乙醇沉淀其上清 ,然后用沉淀下来的核酸转化大肠杆菌。

关键词：哺乳动物细胞质粒转染大肠杆菌

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精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质的结合及结合区域的确定

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中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 239-242页

作者：田新勇缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质（MIS）的结合作用, 并确定在MIS上的结合区域。方法将YWK-Ⅱ蛋白胞外区一段63个氨基酸的片段在大肠杆菌中表达并纯化，运用Pull-down实验研究纯化的蛋白质与MIS的作用，并采用酵母双杂交系统... 详细信息

目的验证精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质（MIS）的结合作用, 并确定在MIS上的结合区域。方法将YWK-Ⅱ蛋白胞外区一段63个氨基酸的片段在大肠杆菌中表达并纯化，运用Pull-down实验研究纯化的蛋白质与MIS的作用，并采用酵母双杂交系统确定YWK-Ⅱ蛋白在MIS上的结合区域。结果重组YWK-Ⅱ蛋白能与大鼠睾丸提取液中的MIS结合，结合部位位于MIS 的N肽段中一段较保守区域内。结论精子膜上的YWK-Ⅱ蛋白可能是卵巢分泌的MIS的受体。

关键词：精子膜蛋白 YWK-Ⅱ蛋白穆勒管抑制物质结合区域

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