检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 580-584页

作者：楼蓉梅品超贡金英朱宁寇朝辉吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对... 详细信息

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位。结果(1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆。序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合。结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子。Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控。这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能。

关键词：酵母双杂交体系脆性X智力低下蛋白人胚海马文库脆性X综合征遗传性疾病

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树胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

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中华医学杂志 2001年第21期81卷 1316-1320页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢薛红中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的... 详细信息

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果　获得的树CETPcDNA(在GenBank中的注册号为AF334 0 33)长 16 36bp ,编码 485个氨基酸 ,其成熟蛋白由 477个氨基酸组成 ,比人多一个氨基酸 (Gly318) ,该蛋白与人、家兔的同源性分别为 88%和 82 %。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守 ,但在Asn34 2位的N 糖基化位点缺失 ,可能使其转运胆固醇酯的活性增加 ,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较 ,初步分析了树CETP蛋白与功能相关的结构特点。

关键词：树Qu 动脉硬化胆固醇酯类序列分析 DNA 转运蛋白蛋白质结构分析

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STAT1对hsp90α基因表达的负调控作用

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 356-360页

作者：陈雪松吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转... 详细信息

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因质粒，利用定量RT-PCR检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析方法检测42℃ 1 h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态，用电泳迁移率变更分析（EMSA）检测STAT1与hsp90α 5′基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度。结果 STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90α基因的表达，又能抑制hsp90α基因5′上游调控区驱动的CAT报告基因活性。热激以前Jurkat细胞中的STAT1 701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化，热激以后其磷酸化程度明显升高，而且STAT1与hsp90α基因 5′上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合。结论 STAT1对hsp90α基因的表达具有负调控作用。

关键词： STA1 hsp90∝ 基因表达调控

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神经营养素-4(NT-4)在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 141-144页

作者：马晓骊黄秉仁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生化室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过昆虫杆状病毒表达系统的优势，表达出具有生物学活性的神经营养素-4（ hNT-4）蛋白。方法通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因，将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上，在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生... 详细信息

目的通过昆虫杆状病毒表达系统的优势，表达出具有生物学活性的神经营养素-4（ hNT-4）蛋白。方法通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因，将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上，在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果获得 hNT-4蛋白的表达产物， SDS-PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 15 000。经 Western-blot验证，表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人 NT-4抗体发生特异性免疫反应的条带。经 PC12细胞测定，表达上清中的 rNT-4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT-4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究 hNT-4的功能及其在临床中的应用提供了条件。

关键词：神经营养素-4 载体PacGP67B Sf 细胞昆虫杆状病毒表达系统克隆表达

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热休克诱导基因表达谱的变化

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 361-364页

作者：王太宇吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中... 详细信息

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中有40个基因的mRNA表达升高，16个基因的mRNA表达降低。其中除热休克基因表达显著增加外，原癌基因c-Jun、cdc 样激酶CLK-1基因表达明显增加。整合素integrin α-4基因，转化生长因子TGF-β基因表达显著降低。Northern 印迹证明c-Jun及hsp90α基因表达升高。结论在热应激条件下Jurkat细胞热休克基因、c-Jun、CLK-1基因表达增加，integrin α-4基因、TGF-β基因表达减少。

关键词：人cDNA表达点阵热休克基因表达

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应用荧光原位杂交技术检测人β~E珠蛋白基因在转基因小鼠染色体上的整合状态

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遗传 2001年第5期23卷 397-400页

作者：夏薇刘德培董文吉李斌郭志晨王晶李铁昌梁植权中国医学科学院基础医学研究医学所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠... 详细信息

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态。检测结果表明 ,外源人 βE 珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上。FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态 ,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合后进行染色体定位检测。

关键词：荧光原位杂交技术人β^E珠蛋白基因转基因小鼠整合位点染色体

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人突变载脂蛋白E(apoE4,apoE7)转基因小鼠模型

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中国科学（C辑） 2001年第1期31卷 1-6页

作者：孙明增琦祖和中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为揭示人突变apoE基因表达在整体引起的异常反应并得到人类相关疾病的小鼠模型，用显微注射法制备了人apoE4与apoE7转基因小鼠, 用Southern印迹杂交及ELISA证明人apoE基因在首建鼠及其子代体内整合与表达良好, 具有遗传稳定性. 血清脂... 详细信息

为揭示人突变apoE基因表达在整体引起的异常反应并得到人类相关疾病的小鼠模型，用显微注射法制备了人apoE4与apoE7转基因小鼠, 用Southern印迹杂交及ELISA证明人apoE基因在首建鼠及其子代体内整合与表达良好, 具有遗传稳定性. 血清脂质与行为测定表明, 人apoE表达使小鼠患高脂血症并出现大脑学习与记忆功能衰退和寿命缩短, 高脂食物对正常鼠与转基鼠均可诱发高血脂, 但机制不同. 同时还证明, 氨基端与羧基端突变的apoE具有相同的致病作用.

关键词：转基因鼠人APOE7/E4 高脂血症学习记忆寿命载脂蛋白E

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用同源重组法修饰含人α类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体

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遗传 2001年第3期23卷 187-191页

作者：冯东晓刘德培黄粤梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

采用RecA蛋白介导的同源重组的方法 ,对本实验室筛选出的包含完整人α 类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 (BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法 ,分别在预删除的HS - 40增强子区域的上游和下游克隆长度约为 5 0 0bp的两段同源序列 ,... 详细信息

采用RecA蛋白介导的同源重组的方法 ,对本实验室筛选出的包含完整人α 类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 (BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法 ,分别在预删除的HS - 40增强子区域的上游和下游克隆长度约为 5 0 0bp的两段同源序列 ,并一起克隆到构建载体 pBV的XbaI和HindIII位点上 ,SalI酶切后回收 1kb左右的片段并克隆到温度敏感的穿梭质粒 pSV -RecA中 ,转化带有人α 类珠蛋白基因簇的BACDNA的感受态大肠杆菌DH10B ,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选 ,获得发生两次同源重组后只含BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株 ,经Southern杂交鉴定 ,获得了HS - 40被定位删除的BAC突变体克隆。

关键词：细菌人工染色体同源重组 α-珠蛋白修饰

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低密度脂蛋白降调节新基因cDNA的克隆及结构分析

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中华医学杂志 2001年第7期81卷 435-436页

作者：张文成陈保生吴刚曾武威薛红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种由多种环境因素与遗传因素相互作用所诱发的疾病。应用分子生物学技术，已经克隆了部分致AS和抗AS的基因［1］。低密度脂蛋白（low density protein，LDL）与 AS及冠心病的发生呈正相关［2］，... 详细信息

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种由多种环境因素与遗传因素相互作用所诱发的疾病。应用分子生物学技术，已经克隆了部分致AS和抗AS的基因［1］。低密度脂蛋白（low density protein，LDL）与 AS及冠心病的发生呈正相关［2］，血管内皮细胞是AS 斑块形成的始动环节，血浆高水平LDL可引起内皮细胞收缩、胞膜损伤、乳酸脱氢酶释放增加和前列环素合成减少［3］,为了克隆与AS相关的新基因,以LDL诱导内皮细胞，采用差异显示逆转录PCR技术［4］获得全新表达标签序列(expressed sequence tags, EST)，筛选人主动脉cDNA文库。克隆相应新基因的cDNA全长，并对其结构和功能进行初步分析。

关键词：低密度脂蛋白动脉粥样硬化 cDNA 克隆结构分析

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小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 158-162页

作者：李永海苏华何维崔莲仙越智宏伦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室国家医学分子生物学重点实验室北京100005 日本老化制御研究所

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从... 详细信息

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达克隆

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