检索结果-内蒙古大学图书馆

生理科学进展 2005年第3期36卷 215-219页

作者：杜延顺黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

G蛋白信号调节因子是能够直接与激活的Gα亚基结合,显著刺激Gα亚基上的GTP酶活性,加速GTP水解,从而灭活或终止G蛋白信号的一组分子大小各异的多功能蛋白质家族。它们都共同拥有一个130个氨基酸的保守的RGS结构域,其功能是结合激活的G... 详细信息

G蛋白信号调节因子是能够直接与激活的Gα亚基结合,显著刺激Gα亚基上的GTP酶活性,加速GTP水解,从而灭活或终止G蛋白信号的一组分子大小各异的多功能蛋白质家族。它们都共同拥有一个130个氨基酸的保守的RGS结构域,其功能是结合激活的Gα亚基,负调节G蛋白信号。许多RGS蛋白还拥有非RGS结构域,能够结合其它信号蛋白,从而整合和调节G蛋白信号之间以及G蛋白和其它信号系统之间的关系。

关键词： G蛋白 RGS蛋白 RGS结构域蛋白-蛋白相互作用

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8-氯腺苷增强肿瘤细胞对TRAIL杀伤作用敏感性的研究

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中华肿瘤杂志 2005年第10期27卷 586-590页

作者：王明婕刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究8-氯腺苷(8-Cl-Ado)增强肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TARIL)杀伤作用的敏感性及其分子机制。方法以重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)和(或)8-Cl-Ado处理乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402,以... 详细信息

目的研究8-氯腺苷(8-Cl-Ado)增强肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TARIL)杀伤作用的敏感性及其分子机制。方法以重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)和(或)8-Cl-Ado处理乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402,以MTT比色法测定细胞存活率,分析药物处理对细胞凋亡的影响;构建NF-κBDNA结合序列虫荧光素酶报告质粒,并转染适当的细胞株,测定NF-κB的转录活性;以不同胱天蛋白酶的抑制剂预处理所试细胞株,再加入rsTRAIL处理,测定胱天蛋白酶抑制剂对细胞凋亡的影响。结果8-Cl-Ado显著增强了乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402对rsTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性;8-Cl-Ado与rsTRAIL联合可使肝癌细胞株BEL-7402内NF-κB活性下降,从而促进细胞凋亡,而在乳腺癌细胞株MCF-7中未观察到相同的现象;胱天蛋白酶家族抑制剂对BEL-7402细胞的凋亡无影响,但可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,但胱天蛋白酶-3、-9和-8的特异性抑制剂对MCF-7细胞株的生长均无影响。结论8-Cl-Ado可显著增强乳腺癌和肝癌细胞对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性,在此两种细胞中,8-Cl-Ado与rsTRAIL联合作用可分别激活胱天蛋白酶依赖的和非依赖的细胞凋亡信号途径。

关键词： 8-氯腺苷 rsTRAIL 肝癌细胞乳腺癌细胞

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肌营养不良致病基因及发病机制

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中国医学科学院学报 2005年第3期27卷 394-400页

作者：张勇朱大海中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

肌营养不良(MD)是以进行性骨骼肌萎缩和无力为特征的遗传病,根据临床特征和遗传方式分为很多类型.随着家系连锁分析和定位候选策略在鉴定遗传病致病基因中的应用,现已陆续克隆了各种类型MD的致病基因.MD相关蛋白的功能研究增进了人们对M... 详细信息

肌营养不良(MD)是以进行性骨骼肌萎缩和无力为特征的遗传病,根据临床特征和遗传方式分为很多类型.随着家系连锁分析和定位候选策略在鉴定遗传病致病基因中的应用,现已陆续克隆了各种类型MD的致病基因.MD相关蛋白的功能研究增进了人们对MD病理发生机制的认识.本文总结了MD致病基因的克隆、功能研究及其在MD发病中的作用机理.

关键词：肌营养不良基因发病机理

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重组人色素上皮衍生因子显著抑制血管内皮细胞增殖

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中国医学科学院学报 2005年第3期27卷 295-299页

作者：阴彬邱飞蝉文中伟朱圣韬袁建刚强伯勤彭小忠中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过原核表达,获得具有生物活性的人重组色素上皮衍生因子(PEDF)。方法将PEDF基因构建到GST原核表达系统中,经过表达纯化,获得重组蛋白,采用Westernblot和质谱分析确证该重组蛋白,采用MTT法检测所获得的重组蛋白对人脐静脉内皮细胞... 详细信息

目的通过原核表达,获得具有生物活性的人重组色素上皮衍生因子(PEDF)。方法将PEDF基因构建到GST原核表达系统中,经过表达纯化,获得重组蛋白,采用Westernblot和质谱分析确证该重组蛋白,采用MTT法检测所获得的重组蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制活性。结果获得了相对分子质量为46000的重组人PEDF重组蛋白,该蛋白可显著抑制血管内皮细胞增殖。结论成功地经过原核表达获得了具有血管生成抑制活性的重组人色素上皮衍生因子。

关键词：色素上皮衍生因子抗血管生成增殖

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小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆

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中国医学科学院学报 2005年第2期27卷 194-198页

作者：陈等张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用... 详细信息

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总R NA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cD NA。结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cD NA片段,13条可能为新EST。对新EST进行N orthern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDN A,得到1个新的1382bp的cD NA序列,命名为Arzc,获得G enBank注册号A Y344585。该序列含有1个261bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性。结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因A rzc。

关键词：差异显示反转录多聚酶链反应小鼠衰老表达序列标签基因

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维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立

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药学学报 2005年第10期40卷 908-911页

作者：郭峰刘彦信郑德先蒋澄宇中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报... 详细信息

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

关键词：维甲酸受体高通量药物筛选细胞模型

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人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 227-233页

作者：狄旭刘长征陈松森张艳丽邓艳春孙兰杨京医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院北京100005

为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序... 详细信息

为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .

关键词： Gly—hPTH(1—34)衍生物融合表达羟胺切割纯化生物学活性

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人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第5期21卷 603-609页

作者：祝学卫吴刚曾武威薛红陈保生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体... 详细信息

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.

关键词：人载脂蛋白A—Ⅰ 半胱氨酸突变体 α螺旋含量二级结构稳定性脂质结合能力

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如何命名和书写基因——最新国际人类基因命名和书写规则

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中国医学科学院学报 2005年第1期27卷 128-134页

作者：方福德向若兰杨燕丽中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

在实际工作中我们注意到,国内刊物对基因、蛋白质等生物分子的命名和书写比较混乱,一些专业刊物的编辑也经常询问相关问题。实际上,国际上早就有专门机构负责制定统一的规则和指南。这里着重介绍人类基因的命名和书写的国际通用规则。... 详细信息

在实际工作中我们注意到,国内刊物对基因、蛋白质等生物分子的命名和书写比较混乱,一些专业刊物的编辑也经常询问相关问题。实际上,国际上早就有专门机构负责制定统一的规则和指南。这里着重介绍人类基因的命名和书写的国际通用规则。人类基因的命名由国际人类基因命名委员会(HumanGeneNomenclatureCommittee,HGNC)负责制定和发布。首次发布人类基因命名指南是在1979年,此后每隔几年就会发布新的指南,迄今已达4次,分别在1987、1995、1997和2002年。本文资料主要来源于2002年版本(WainHM,BrufordEA,LoveringRC,etal,Guidelinesf

关键词：基因命名书写

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携带人FL、GM-CSF基因的裸DNA的抑瘤作用

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基础医学与临床 2005年第10期25卷 914-919页

作者：王亚栋张艳丽杨克恭邓艳春苏林罗丝刘长征陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨可表达人FL和GM-CSF的裸DNA抑制小鼠移植肿瘤生长的作用.方法分别将带有信号肽序列的人FL和GM-CSF基因插入pcDNA3.1/zeo载体,构建分泌表达人FL和GM-CSF的治疗用表达载体,经Sephacryl S1000柱层析法纯化了重组表达质粒.用Western... 详细信息

目的探讨可表达人FL和GM-CSF的裸DNA抑制小鼠移植肿瘤生长的作用.方法分别将带有信号肽序列的人FL和GM-CSF基因插入pcDNA3.1/zeo载体,构建分泌表达人FL和GM-CSF的治疗用表达载体,经Sephacryl S1000柱层析法纯化了重组表达质粒.用Western 印迹和ELISA法检测目的基因在293细胞中的表达,并用TF1细胞验证293细胞表达的GM-CSF的生物学活性.重组表达质粒与脂质体孵育形成复合物,隔天肌肉注射小鼠共6次,每只小鼠接种T细胞淋巴瘤细胞EL-4 2×105后,观察不同基因组合条件下肿瘤的生长情况.结果人FL和GM-CSF在293细胞中表达量分别为50 μg/L和30 μg/L,单用FL或GM-CSF和两者联用对肿瘤生长均有一定抑制作用,在第17天抑制率为30%～40%.联合应用组较单用FL或GM-CSF组更为有效抑制肿瘤生长,但小鼠生存时间并无延长.结论人FL和GM-CSF在293细胞中均获表达,且对肿瘤的早期生长具有一定的抑制作用,两者联合应用效果更为明显,但对小鼠最终生存时间并无影响.

关键词：人FL 人GM-CSF 免疫基因治疗

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