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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 312-316页

作者：林岚许琪张焱尹斌范钰罗一菁韩少梅张正国吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和... 详细信息

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和外显子 2 1、2 2选择性剪接对该基因功能可能产生的影响。结果　成年小鼠肝组织中大部分 Dnm t3b转录本保留外显子 10 ,而其它组织的大部分转录本中此序列被剪切掉。成年小鼠肺组织主要表达缺失外显子 10的 Dnmt3b转录本 ,而新生小鼠肺组织则表达保留外显子 10的转录本。亲水性及二级结构分析表明 ,选择性剪接区域编码的肽段均位于 Dnmt3b蛋白分子的表面。结论　小鼠 Dnm t3b基因的选择性剪接具有组织及发育阶段特异性 ,其选择性剪接区域编码的肽段可能与蛋白分子的调控或酶分子的靶序列识别有关。

关键词：甲基转移酶选择性剪接毛细管电泳 DNA

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丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达中的作用

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 327-331页

作者：李江伟吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun... 详细信息

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun N-末端蛋白激酶 (JNK)的底物 c- Jun的磷酸化程度 ;分别用 JNK1的显性负突变质粒 DN- JNK1、p38c DNA反义表达质粒 anti- p38及 ERK激酶的特异性抑制剂 PD980 5 9瞬时转染或处理Jurkat细胞 ,再行 RT- PCR检测 hsp90 α和 hsp90 β基因的表达水平。分别以转染空载体 (p CDNA3)及未经任何处理的 Jurkat细胞作为相应对照组。结果　 45℃热休克 15 min后 ,Jurkat细胞中 JNK1和 p38激酶的磷酸化程度与热休克前相比明显增强 ,ERK的磷酸化较热休克前有所增强。转染 DN- JNK1的细胞中 hsp90 α和 hsp90 β基因的组成性和热诱导表达均较转染空载体的对照组降低 ,尤其对 hsp90 α基因的热诱导表达的影响更为明显 (仅为对照组的6 8% ) ;转染 anti- p38后 ,hsp90 α基因的组成性表达和 hsp90 β基因热诱导表达分别比转染空载体的对照组增加2 6 %和 2 2 % ;经 PD980 5 9处理的 Jurkat细胞中 ,hsp90 α基因的组成性表达比未处理的细胞增加 46 % ,但 PD980 5 9处理对 hsp90 α和

关键词：丝裂原活化蛋白酶信号途径热休克蛋白90

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热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 264-268页

作者：李晓燕路程吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-M... 详细信息

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化?

关键词： Rac-MEKK-JNK信号通路 Rac蛋白丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶 C-junN端蛋白激酶 hsp90β基因基因表达调控

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逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 15-20页

作者：臧梦维沈琦汪青刘景生彭学贤中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室中国科学院微生物研究所

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８... 详细信息

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８１５神经细胞，获得Ｇ４１８抗性克隆，命名为ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交、ＰＣＲ扩增及ＲＴＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析，证实ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合、转录和表达；ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨｄｉａｐｈｏｒａｓｅ，ＮＡＤＰＨｄ）组化和免疫组化染色表明，胞质中有ｉＮＯＳ基因功能表达；酶催化活性和ＮＯ－２含量均明显升高；重组酶具有天然酶生化和药理特性，即ＮＡＤＰＨ依赖性，Ｃａ２＋非依赖性和Ｃａ２＋螯合剂抗性以及ＮＯＳ抑制剂使酶活性降低，呈剂量相关性；ｉＮＯＳ基因表达使ＮＯｃＧＭＰ系统上调。成功地建立ｉＮＯＳ基因修饰神经细胞株，为寻找治疗阿片耐受和依赖的新药创造了条件。

关键词：一氧化氮合酶逆转录病毒环磷酸鸟苷神经母细胞瘤细胞株

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中国汉族人群Ⅱ型糖尿病家系1号染色体易感基因的精细定位

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 234-237页

作者：杜玮南孙红霞王姮强伯勤姚志建顾军熊墨淼黄薇陈竺左瑾华秀峰高伟孙琦方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过增加微卫星位点密度、扩大样本量,对以前定位到1号染色体上的中国北方汉族人群2型糖尿病相关易感基因研究结果进行验证。方法运用基因组扫描的方法,经多重PCR、电泳、GeneScan及Genotyper程序分析获取位点信息,最后经参数及非... 详细信息

目的通过增加微卫星位点密度、扩大样本量,对以前定位到1号染色体上的中国北方汉族人群2型糖尿病相关易感基因研究结果进行验证。方法运用基因组扫描的方法,经多重PCR、电泳、GeneScan及Genotyper程序分析获取位点信息,最后经参数及非参数连锁分析,得到相关的P值、NPL值(Z值)。结果共扫描了5个区域34个位点,检出约12000个基因型。经GENEHUNTER2.0软件分析,其中的8个位点可能与糖尿病相连锁(P<0.05,NPL值最大为2.17),它们分布于3个区域,尤其是第1个区域(1p36.3-1p36.23),其每一个位点都显示与糖尿病相连锁,前后分布于1个长达16.9cM的范围内。另外2个区域未检出阳性结果。结论证实了全基因组扫描所获得的结果。尤其是,在所研究的1P末端区域,所有研究位点都显示与疾病连锁,这些位点分布在一个很宽的范围内,提示该区域可能蛰伏着多个糖尿病易感基因。

关键词：中国汉族人群 2型糖尿病微卫星位点基因组扫描易感基因基因定位

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Fudenine———个新的与血糖调节相关的膜蛋白

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 63-64,F003页

作者：常永生左瑾张雪峰张明方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜... 详细信息

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜下观察。结果报告质粒 GFP表达产物定位于胞质中，而融合质粒产物定位于细胞膜上。结论 Fudenine是一种膜蛋白，它可能与其同源基因 prominin和 AC133抗原有相似的功能，在血糖调控和信号转导等方面发挥作用。

关键词： Fudenine 亚细胞定位细胞膜膜蛋白血糖调节

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蛋白激酶Cξ亚型基因及UrotensinⅡ基因中各有一个单核苷酸位点与中国北方汉族人群2型糖尿病相关

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 223-227页

作者：孙红霞杜玮南左瑾吴国栋史贵彬沈岩强伯勤姚志建杭建梅王姮黄薇陈竺方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的采用单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中... 详细信息

目的采用单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中的23个SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextension,SBE)法对北方汉族人群散发2型糖尿病患者(192例)及对照组(172例)进行分型及病例-对照关联分析。结果23个SNP位点中有8个为中国北方人群常见SNP位点;对病例组和对照组分型分析显示,位于蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因中的一个位点(rs436045)及urotensinⅡ(UTS2)基因中的一个位点(rs228648),其等位基因频率在两组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论上述两个SNP位点可能和中国北方汉族人群2型糖尿病相关,以上结果为进一步研究上述两个位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。

关键词：慢白激酶Cζ亚型基因 Urotensin Ⅱ基因中国北方汉族人群单核苷酸多态性标记 2型糖尿病病例-对照关联分析

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小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆

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中国医学科学院学报 2005年第2期27卷 194-198页

作者：陈等张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用... 详细信息

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总R NA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cD NA。结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cD NA片段,13条可能为新EST。对新EST进行N orthern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDN A,得到1个新的1382bp的cD NA序列,命名为Arzc,获得G enBank注册号A Y344585。该序列含有1个261bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性。结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因A rzc。

关键词：差异显示反转录多聚酶链反应小鼠衰老表达序列标签基因

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地塞米松对人白细胞介素2受体α链基因表达的影响

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中国医学科学院学报 1996年第2期18卷 89-94页

作者：关中晖吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医院

白细胞介素２／白细胞介素２受体（ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ）系统在免疫系统中起极重要作用，研究糖皮质激素对ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ系统的影响有助于了解糖皮质激素免疫调节作用的分子机理。通过荧光素酶报告基因的表达及狭缝杂交，发现... 详细信息

白细胞介素２／白细胞介素２受体（ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ）系统在免疫系统中起极重要作用，研究糖皮质激素对ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ系统的影响有助于了解糖皮质激素免疫调节作用的分子机理。通过荧光素酶报告基因的表达及狭缝杂交，发现在Ｊｕｒｋａｔ细胞中地塞米松对ＩＬ－２Ｒα链基因ｍＲＮＡ的基础表达及ＰＨＡ的诱导表达均有直接促进作用，这种正调节作用与ＩＬ－２Ｒα链基因５＇上游一４８２ｂｐ以内近端已知的诱导转录元件无关，且与ＰＨＡ的活化机制不同，两者间具有协同效应。

关键词：白细胞介素2 受体 α链地塞米松基因表达

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原发性高血压的易感基因

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中国医学科学院学报 2006年第2期28卷 284-288页

作者：邱长春周文郁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

原发性高血压(EH)是遗传因素和环境因素相互作用引发的复杂疾病,明显的家族聚集现象、同卵双生子发病一致性等研究结果,揭示了EH的多基因遗传性质。鉴定EH易感基因不仅有助于阐明其病因学,也有助于探索预防途径和研制新的治疗药物。本... 详细信息

原发性高血压(EH)是遗传因素和环境因素相互作用引发的复杂疾病,明显的家族聚集现象、同卵双生子发病一致性等研究结果,揭示了EH的多基因遗传性质。鉴定EH易感基因不仅有助于阐明其病因学,也有助于探索预防途径和研制新的治疗药物。本文主要介绍EH易感基因研究策略和已发现的基因变异;分析EH易感基因研究存在的问题和理想样本选择对成功鉴定EH易感基因的作用。

关键词：原发性高血压遗传力隔离人群易感基因

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