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氧化低密度脂蛋白诱导人载脂蛋白AI转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因的研究

中华医学杂志 2003年第6期83卷 494-497页

作者：于淼谷素敏周礼赵高峰余立清张华佘铭鹏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

目的　为研究人载脂蛋白AI(h ApoA I)抗氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制 ,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h apoA I转基因小鼠血管平滑肌细胞 (vSMC)抗ox LDL所致AS过程中... 详细信息

目的　为研究人载脂蛋白AI(h ApoA I)抗氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制 ,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h apoA I转基因小鼠血管平滑肌细胞 (vSMC)抗ox LDL所致AS过程中表达的相关基因。方法　以ox LDL为刺激物作用于培养的转基因小鼠vSMC ,应用抑制性差减杂交方法构建减除文库 ,筛选、克隆差异表达基因 ,并进行序列测定及同源性比较。同时用SMART技术构建了ox LDL诱导的转基因小鼠vSMC全长噬菌体文库。结果　从 5 7个差异克隆中随机选取 15个克隆测序并分析 ,得到 3个表达序列标签 (EST) ,均为与免疫系统有关的功能基因片段 ,即 :补体C1 抑制物 (C1 INH)、植物凝集素及T细胞受体 β(TCRβ)。有明显抗内膜脂质沉积能力的h apoA I转基因小鼠的vSMC在被ox LDL诱导后 ,筛选出的 3个EST均与免疫系统有关 ,其中C1 INH及植物凝集素与补体系统密切相关。结论　ox LDL致AS及h ApoA I抗AS可能有免疫机制参与 ,且与补体活化及其调控密切相关。其中C1 INH作为抗AS的潜在靶点值得关注。

关键词：氧化低密度脂蛋白诱导载脂蛋白AI 转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因动脉粥样硬化

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红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 947-951页

作者：李兴国严皓珩刘德培郝德龙梁植权北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺... 详细信息

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。

关键词：染色体整合位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因基因沉默

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波比宁对鼠的镇痛及抗炎作用

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基础医学与临床 2003年第5期23卷 570-571页

作者：叶菜英李娟杨惠芬于晓丽陆久怡张德昌中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室

寻找无成瘾而又具有镇痛作用的化合物受到普遍关注，据国外有关报道，一种富马酸异哌丙吡胺（波比宁 Probne）化合物在临床上具有强的镇痛作用，并且起效迅速，而无成瘾性，与同类镇痛药相比，副作用小，具有独特的疗效。目前国内已有... 详细信息

寻找无成瘾而又具有镇痛作用的化合物受到普遍关注，据国外有关报道，一种富马酸异哌丙吡胺（波比宁 Probne）化合物在临床上具有强的镇痛作用，并且起效迅速，而无成瘾性，与同类镇痛药相比，副作用小，具有独特的疗效。目前国内已有生产，但波比宁的镇痛及抗炎作用，国内未见报道。为此本文观察波比宁对鼠的镇痛及抗炎作用。

关键词：波比宁鼠镇痛抗炎实验

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雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及胶原合成的影响

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解剖学报 2003年第6期34卷 638-641页

作者：刘敬许增禄仇文颖王计奎钱晓菁徐园园中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院

目的　研究雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及I型胶原代谢的影响。　方法　分离大鼠胚胎头盖骨成骨细胞 ,分别给予不同浓度雌激素培养 ;观察细胞增殖情况和ALP活性变化 ;苦味酸天狼星红及I型胶原免疫组织化学染色 ,从蛋白质水平观察成骨... 详细信息

目的　研究雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及I型胶原代谢的影响。　方法　分离大鼠胚胎头盖骨成骨细胞 ,分别给予不同浓度雌激素培养 ;观察细胞增殖情况和ALP活性变化 ;苦味酸天狼星红及I型胶原免疫组织化学染色 ,从蛋白质水平观察成骨细胞中I型胶原的变化 ;地高辛标记的I型胶原基因探针进行原位杂交 ,从mRNA水平观察I型胶原的变化。　结果　雌激素可降低大鼠胚胎成骨细胞增殖水平而使ALP活性以及I型胶原蛋白质和mRNA水平均升高。　结论　雌激素可促进成骨细胞分化 ,而抑制增殖。

关键词：雌激素成骨细胞细胞增殖 I型胶原骨质疏松

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人乳头瘤病毒16型E6E7基因协同共激活分子B7-1基因免疫诱导的特异性免疫反应

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中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 301-306页

作者：许雪梅朱明昭张明策司静懿李昆宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室北京100005

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PC... 详细信息

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PCR法扩增获得fmE6E7基因插入真核表达质粒pVR1012中获得pVR1012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光组织化学法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠肌肉内进行pVR1012-fmE6E7单独免疫,或与小鼠共激活分子B7-1基因真核表达质粒(pcDNA3.1-B7-1)联合免疫。51Cr释放法分析免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)活性,间接ELISA法检测小鼠血清中E7特异性抗体。用5×105个C3细胞皮下接种C57BL/6小鼠,分析小鼠体内诱发的特异性抗瘤免疫水平。结果修饰后的E6E7基因免疫可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,小鼠B7-1基因与fmE6E7联合免疫可显著提高特异性CTL活性,并可保护33%(2/6)的小鼠免受C3肿瘤细胞的攻击,而单独fmE6E7基因免疫则不能抑制C3瘤细胞的生长,联合B7-1基因免疫对诱发的抗体水平无加强作用。结论中国山东地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的构建,B7-1基因协同免疫可提高疫苗的细胞免疫水平,利用B7-1基因作为HPV16DNA疫苗的协同因子具有重要价值。

关键词：人乳头瘤病毒 E6基因 E7基因 DNA疫苗细胞毒性T淋巴细胞

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新合成的阿片受体配基对稳定转染μ阿片受体的CHO细胞的受体结合特性

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中国医学科学院学报 2003年第1期25卷 79-82页

作者：胡萍叶菜英仇缀佰杨惠芬张德昌中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

目的研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基犤3H犦diprenorphine(3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结... 详细信息

目的研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基犤3H犦diprenorphine(3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结合特征及一系列新合成阿片配基的竞争性结合特征。结果(3H-dip)结合μ阿片受体的平衡解离常数Kd值为1.06nmol/L;受体最大容量Bmax为930fmol/mg蛋白。竞争性结合实验表明3#和12#配基对μ阿片受体的亲和力高于DAMGO和吗啡。2#、6#、8#和9#配基对μ受体的亲和力低于DAMGO和吗啡。结论新配基3#和12#对μ亚型的阿片受体有良好的亲和力。2#、6#、8#和9#配基对μ受体的亲和力较低。

关键词：阿片受体配基受体结合 μ阿片受体

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人U937细胞吞噬IgA免疫复合物的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第6期23卷 464-467页

作者：郭彩云崔薇张伟中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院北京协和医院

目的　对IgAFc受体 (FcαRⅠ )介导的U937细胞吞噬IgA免疫复合物进行研究。方法以异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的 8.9NIP BSA为抗原 ,与抗NIP的IgA或IgG抗体结合 ,分别形成IgA免疫复合物 (IgAIC)和IgG免疫复合物 (IgGIC) ,再与经佛波醇乙... 详细信息

目的　对IgAFc受体 (FcαRⅠ )介导的U937细胞吞噬IgA免疫复合物进行研究。方法以异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的 8.9NIP BSA为抗原 ,与抗NIP的IgA或IgG抗体结合 ,分别形成IgA免疫复合物 (IgAIC)和IgG免疫复合物 (IgGIC) ,再与经佛波醇乙酯 (PMA)刺激分化为单核细胞样的U937细胞孵育 ,流式细胞仪分析U937细胞吞噬IgAIC和IgGIC的情况。结果U937细胞表面FcαRⅠ表达量高于 3种IgGFc受体 (FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ )。PMA刺激后细胞表面FcαRⅠ上调明显 ,吞噬IgAIC能力增加。FcαRⅠ介导的U937细胞对IgAIC的吞噬作用高于FcγRⅠ和FcγRⅡ介导的对IgGIC的吞噬作用 ,且这种吞噬作用是特异性的。在补体受体CR1和CR3作用下 ,U937细胞对IgAIC的吞噬作用有所增强。结论　FcαRⅠ介导单核细胞非常强的吞噬IgAIC的作用。

关键词： U937细胞单核细胞 Fc受体免疫复合物免疫球蛋白A

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表达狂犬病毒糖蛋白基因复制缺陷型重组腺病毒的构建及其特性

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中国医学科学院学报 2003年第6期25卷 650-654页

作者：李文辉张云王树惠刘力杨帆中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原室北京100005

目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病... 详细信息

目的构建表达狂犬病毒CVS-N2C毒株糖蛋白(GP)基因的复制缺陷型重组腺病毒,作为筛选狂犬病毒基因工程疫苗的基础。方法用大肠杆菌细胞内同源重组技术构建重组病毒;NorthernblotWesternblot和免疫荧光抗体等方法鉴定重组病毒。结果重组病毒具有典型的病毒形态;病毒基因组稳定;GP基因可被转录;重组病毒表达的GP蛋白相对分子质量为66000,与天然GP相对分子质量相符表达的GP蛋白可被兔抗狂犬病毒免疫血清特异性识别;小鼠免疫-攻击试验可保护87.5%～100%动物。结论成功地构建了表达狂犬病毒CVS-N2C毒株GP基因的复制缺陷型重组腺病毒,并表现了良好的免疫效果。

关键词：重组腺病毒狂犬病毒 CVS-N2C 复制缺陷型

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慢性肾功能衰竭大鼠下丘脑组织和血浆食欲素A及神经肽Y水平的变化及其意义

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中华医学杂志 2003年第11期83卷 992-995页

作者：李峻岭郑法雷谭会兵殷苏燕杨继红李艳卜玉芬中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学院解剖组织学教研室及神经生物学研究室

目的　探讨大鼠慢性肾功能衰竭 (CRF)动物模型的下丘脑组织和血浆食欲素A及神经肽Y(NPY)水平的变化及其意义。方法　将 41只 2 0 0～ 2 50 g雄性Wister大鼠分为 :正常组、假手术组和CRF组。术后 4、 8、 1 2周分批断头处死大鼠 ,取血浆... 详细信息

目的　探讨大鼠慢性肾功能衰竭 (CRF)动物模型的下丘脑组织和血浆食欲素A及神经肽Y(NPY)水平的变化及其意义。方法　将 41只 2 0 0～ 2 50 g雄性Wister大鼠分为 :正常组、假手术组和CRF组。术后 4、 8、 1 2周分批断头处死大鼠 ,取血浆和下丘脑组织标本。用放射免疫法测定血浆和下丘脑组织食欲素A和NPY。用生化自动分析仪测定血清肌酐。结果　CRF大鼠术后4、 8和 1 2周血肌酐水平均高于假手术组。其术后 1 2周的血浆食欲素A水平高于假手术组 (2 64pg/ml± 62pg/mlvs 1 83pg/ml± 56pg/ml,P =0 0 39)。CRF大鼠术后 1 2周的下丘脑食欲素A水平明显低于假手术组 (1 0 5fmol/mg± 2 7fmol/mg湿重vs 1 7 4fmol/mg± 3 9fmol/mg湿重 ,P =0 0 2 3)。CRF大鼠术后 8周 (7 1 pmol/ml± 1 7pmol/mlvs 5 0 pmol/ml± 0 5pmol/ml,P =0 0 1 )和1 2周 (7 9pmol/ml± 1 1pmol/mlvs 4 8pmol/ml± 1 1 pmol/ml,P =0 0 0 0 8)的血浆神经肽Y水平高于假手术组 ,其术后 1 2周的下丘脑神经肽Y水平明显低于假手术组 (70fmol/mg± 2 3fmol/mgvs1 1 3fmol/mg± 31fmol/mg湿重 ,P =0 0 33)。结论　 (1 )CRF大鼠血浆食欲素A和NPY水平有逐渐增高趋势 ,肾功能减退可能导致食欲素A和NPY排泄障碍。 (2 )

关键词：慢性肾功能衰竭大鼠下丘脑组织血浆食欲素A 神经肽Y 放射免疫法

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A类清道夫受体I型的过量表达对转基因小鼠血脂水平的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第2期35卷 117-121页

作者：高俊刘德培黄粤董文吉吴敏冯东晓梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室

清道夫受体能结合带负电荷的大分子 ,特别是经过修饰的脂蛋白颗粒 ,与血浆脂质代谢有密切关系。为研究A类清道夫受体的过量表达对血脂代谢的影响 ,首先从小鼠巨噬细胞中经RT PCR获得鼠清道夫受体A类I型 (MSR AI)的表达序列 ,插入到含人... 详细信息

清道夫受体能结合带负电荷的大分子 ,特别是经过修饰的脂蛋白颗粒 ,与血浆脂质代谢有密切关系。为研究A类清道夫受体的过量表达对血脂代谢的影响 ,首先从小鼠巨噬细胞中经RT PCR获得鼠清道夫受体A类I型 (MSR AI)的表达序列 ,插入到含人清道夫受体基因增强子和金属硫蛋白启动子的真核表达载体中。选择Km×ICR杂交一代为实验小鼠 ,显微注射、移卵后 ,获得转基因小鼠 ,经PCR、Southern杂交鉴定 ,获得完整整合外源DNA序列的首建鼠 4只 ,拷贝数分别为 15、6、2和 4。Northern杂交实验显示A类清道夫受体基因主要在脾脏中表达 ;在金属锌诱导下 ,MSR AI表达有所增高 ,同时血清中甘油三酯水平显著升高 ,胆固醇浓度下降。结果表明A类清道夫受体的过量表达能显著影响血脂水平 ,具体机制需进一步研究。

关键词：清道夫受体金属硫蛋白启动子转基因小鼠过量表达血脂

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