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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 403-406页

作者：李文辉张云隋建华杨帆郭彩云王树蕙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原生物学研究室北京100005

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的... 详细信息

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的表达 ;以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫 ,以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫 ;ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体 ,快速荧光灶抑制试验 (RFFIT)检测狂犬病毒中和抗体。结果　间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1 CVS N2cGP能有效地表达GP于转染的细胞膜上 ,ELISA试验表明小鼠接受基因枪核酸免疫后 ,仅诱导产生低水平的特异性抗体 ,而用重组腺病毒进行加强免疫后 ,特异性抗体水平显著提高。结论　联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点 ,能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫。

关键词：糖蛋白核酸疫苗重组腺病毒联合免疫狂犬病毒狂犬病特异免疫

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脊肌萎缩症的产前基因诊断

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中华医学遗传学杂志 1999年第6期16卷 400-401页

作者：袁丽芳刘天慈马素参周文敏杨涛吴沪生孙念怙赵时敏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室北京100005 首都医科大学附属儿童医院北京协和医院

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阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立

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中国药理学通报 2004年第5期20卷 508-511页

作者：梁平潘扬杏赵雪梅杜洪震张冀民中国医学科学院基础医学研究所病理室中国协和医科大学基础医学院北京100005 美国哈佛大学医学院神经疾病研究中心

目的　构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法　从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,... 详细信息

目的　构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法　从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,并重组克隆到PCI neo质粒 ,用脂质体 (Lipo fectAmine)法将野生型和突变型 (M14 6L)PS 1转染至含APP751表达基因的CHO细胞 ,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株。用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物。结果　建立了数株能表达Aβ和PS 1的CHO细胞。在转染细胞株中高表达的SP 1为全长 4 5kd的PS 1蛋白 ;野生型PS 1和突变型PS 1(M14 6L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽 ,且突变型PS 1(M14 6L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1～ 42 比其它细胞株增加了近两倍。结论　突变型PS 1(M14 6L)的高表达可促使Aβ1～ 42 的分泌增加。我们建立的PS 1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型 ,可用于 β 分泌酶或γ

关键词： β-淀粉样变多肽早老素-1 β-或γ-分泌酶基因转染

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方兴未艾的古代DNA的研究

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遗传 2000年第1期22卷 41-46页

作者：蔡胜和杨焕明中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005 中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005 中国科学院遗传研究所人类基因组中心北京100810

保留在古代生物遗骸中的遗传物质DNA是一种重要的遗传资源.古代DNA的研究对于了解包括人类在内的各种生物的起源、进化和迁徙有重要意义.古代DNA的研究有其自身的特点,并且已经取得一系列重要成就.本文综述古代DNA研究的历史、方法和进展.

关键词：古代DNA PCR 可靠性

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p38MAPK——控制阿尔采末病进程的新靶点

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中国药理学通报 2004年第5期20卷 595-598页

作者：王抒孙兰杜冠华中国医学科学院.中国协和医科大学基础医学院药理室北京100005 中国医学科学院.中国协和医科大学药物研究所国家药物筛选中心北京100050

阿尔采末病 (AD)是严重威胁老龄人的一类神经退行性疾病 ,其病理学特征包括 :淀粉样斑块沉积、神经元纤维缠结形成、突触和神经元的丢失以及脑内炎症。促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)家族的成员之一 p38MAPK在AD发病和进展中有多重作用 ,... 详细信息

阿尔采末病 (AD)是严重威胁老龄人的一类神经退行性疾病 ,其病理学特征包括 :淀粉样斑块沉积、神经元纤维缠结形成、突触和神经元的丢失以及脑内炎症。促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)家族的成员之一 p38MAPK在AD发病和进展中有多重作用 ,包括p38在AD模型中激活的证据、p38与AD各项病理标志和炎症、神经元凋亡、tau过磷酸化等重要病理生理过程的联系 ,由此阐明了 p38作为AD治疗干预靶点的基础和根据。

关键词：阿尔采末病 MAPK p38MAPK 神经退行性变 tau 神经元纤维缠结

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SmaRT──一种简便、有效的PCR产物直接克隆技术

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基础医学与临床 1996年第6期16卷 473-475页

作者：宋莉李明月张秀清但美霞刘国仰杨焕明中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室

ＳｍａＲＴ──一种简便、有效的ＰＣＲ产物直接克隆技术宋莉，李明月，张秀清，但美霞，刘国仰，杨焕明（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学遗传室，北京１００００５）ＰＣＲ已成为医学与生物学、特别是... 详细信息

ＳｍａＲＴ──一种简便、有效的ＰＣＲ产物直接克隆技术宋莉，李明月，张秀清，但美霞，刘国仰，杨焕明（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学遗传室，北京１００００５）ＰＣＲ已成为医学与生物学、特别是医学遗传学领域中最重要的技术。在序...

关键词： SmaRT 聚合酶链反应克隆技术

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瞬态诱发耳声发射的识别

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 321-325页

作者：李丽明林金森张正国中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物医学工程研究室北京100005

目的为准确检测耳蜗功能，寻求在记录到的信号中正确识别瞬态诱发耳声发射（ＴＥＯＡＥ）信号的新方法。方法采用时－频域识别方法，根据ＴＥＯＡＥ与刺激伪迹不同的短时谱特征来有效识别两者。结果刺激伪迹的短时谱显示其在空气中以简... 详细信息

目的为准确检测耳蜗功能，寻求在记录到的信号中正确识别瞬态诱发耳声发射（ＴＥＯＡＥ）信号的新方法。方法采用时－频域识别方法，根据ＴＥＯＡＥ与刺激伪迹不同的短时谱特征来有效识别两者。结果刺激伪迹的短时谱显示其在空气中以简单的指数规律快速衰减的特征。ＴＥＯＡＥ的短时谱显示其频率分布与刺激声基本一致，但各频率成分在潜伏期和转化过程上表现出多种模式。刺激伪迹和ＴＥＯＡＥ的短时谱有明显的区别。结论短时谱识别方法能有效地将ＴＥＯＡＥ与刺激伪迹区分开，可提高ＴＥＯＡＥ识别的准确性。

关键词：瞬态诱发耳声发射识别相关系数 TEOAE

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应用双色荧光原位杂交技术检测一例49,XXXXY性染色体异常

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生殖与避孕 2002年第5期22卷 287-291,I003页

作者：刘永章曾瑄温州医学院生物教研室温州325027 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础遗传室北京100005

目的:探讨用双色荧光原位杂交技术(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)检测性染色体数目异常的实验方法及其应用价值。方法:以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重... 详细信息

目的:探讨用双色荧光原位杂交技术(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)检测性染色体数目异常的实验方法及其应用价值。方法:以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重复顺序(pY3.4)探针与经处理的标本同时进行外周血染色体及间期细胞核的原位杂交,分别用Avidin-FITC和Rhodamine-FITC及其Anti-avidin进行信号的检测与放大,DAPI复染。于Olympus AX-70型荧光显微镜下,分别通过WIB、WIG及其WU滤光镜观察杂交信号及其染色体或间期核背景,并统计外周血中期染色体和间期细胞核的杂交信号颗粒数。结果:在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示4个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号,染色体或细胞质背景经DAPI复染显示兰色;统计350个中期染色体和间期细胞核,X染色体杂交信号阳性率分别为91.43％和92.57％;Y染色体杂交信号阳性率分别为99.5％和99.8％。结论:双色荧光原位杂交技术是检测49,XXXXY性染色体异常以及其他性染色体数目异常患者的一种十分有价值的技术,具有高效、灵敏、可靠等特点,可为临床提供良好的辅助诊断。

关键词：双色荧光原位杂交技术检测 49,XXXXY性染色体异常 DNA特异性探针

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病毒载体与造血干细胞基因治疗

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Acta Genetica Sinica 2003年第4期30卷 383-388页

作者：董文吉祖振响刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干... 详细信息

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移 ,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体 ,结合优化的造血干细胞转导条件 ,其介导的腺苷脱氨酶缺陷引起的严重联合免疫缺陷和X染色体连锁的严重联合免疫缺陷的基因治疗已经获得初步成功 ;其他整合型病毒载体如慢病毒和腺相关病毒载体 ,也在临床前造血干细胞基因治疗研究中得到广泛应用。从病毒载体。

关键词：造血干细胞反转录病毒载体慢病毒载体腺相关病毒载体基因治疗

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疟疾DNA疫苗免疫接种方法对小鼠体液免疫应答的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第1期21卷 50-54页

作者：石宁董敏阴彬徐蓓何湘云李晋芳刘宝丰王恒中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原学室北京100005 山西医科大学

目的　探讨DNA疫苗免疫接种方法对抗体水平及辅助性T细胞极化的影响。方法　利用DNA重组技术构建恶性疟原虫红内期多表位DNA疫苗 ,通过基因枪、肌肉注射、皮内注射等接种方法免疫小鼠 ,经ELISA测定该疫苗诱导产生特异性抗体的总量、亚... 详细信息

目的　探讨DNA疫苗免疫接种方法对抗体水平及辅助性T细胞极化的影响。方法　利用DNA重组技术构建恶性疟原虫红内期多表位DNA疫苗 ,通过基因枪、肌肉注射、皮内注射等接种方法免疫小鼠 ,经ELISA测定该疫苗诱导产生特异性抗体的总量、亚型及表位特异性 ,比较不同免疫接种方法对DNA疫苗诱导产生抗体及辅助性T细胞极化的影响。结果　接种DNA疫苗的小鼠经 3次免疫后都产生了较高滴度的抗重组蛋白抗体。基因枪组单位DNA诱导抗体滴度是肌注组的 12 0倍。基因枪组小鼠血清抗体以IgG1升高为主 ,而肌注和皮内注射组小鼠血清抗体均以IgG2a升高为主。各免疫接种组诱导产生的抗表位多肽抗体特异性相同。结论　不同免疫接种方法不但会影响血清总免疫球蛋白水平 ,还能使辅助性T细胞向不同方向极化。肌注和皮内注射诱导产生以IgG2a为主的TH1型免疫应答 ,基因枪接种诱导产生以IgG1为主的TH2型免疫应答。DNA疫苗的摄取方式可明显影响辅助性T细胞的极化。

关键词： DNA疫苗辅助性T细胞抗体亚类基因枪疟疾

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