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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第6期21卷 594-599页

作者：史耕先刘音李琳朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室北京100005

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包... 详细信息

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包装后转导淋巴细胞 ,经G418筛选 ,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞。Northern杂交和RT PCR检测转导基因的mRNA表达水平。ConA结合试验检测细胞在转导基因后 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变。结果　pAGX 反义6A8DNA及pAGX 正义 6A8DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒 ,藉助rAAV成功地把 6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB。Northern杂交结果显示 ,转导的正义或反义 6A8DNA获得表达。经 1年余传代培养 ,RT PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义 6A8DNA的mRNA表达增加 ,新霉素抗性基因 (neoR)也获得表达 ,表明转导基因获得了长期表达。ConA结合强度在转导反义 6A8DNA的细胞升高 ,提示转导反义 6A8DNA可影响 6A8α 甘露糖苷酶的表达。结论　用AAV载体成功地把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB ,转导的基因获得长期表达 ,并干扰 6A8α 甘露糖苷酶的表达。

关键词：重组腺相关病病毒 EB病毒转化 B淋巴细胞外源基因转导

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肿瘤休眠

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中华病理学杂志 1997年第3期26卷 187-189页

作者：刘玉琴高进中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理研究室

肿瘤休眠刘玉琴高进一、肿瘤休眠的概念及历史肿瘤休眠（ｔｕｍｏｒｄｏｒｍａｎｃｙ）最早是临床上观察到的一种现象。早在１９５４年，Ｈａｄｆｉｅｌｄ就指出乳腺癌、黑色素瘤、直肠癌等实体瘤在原发肿瘤被切除以后，继发瘤的出现超... 详细信息

肿瘤休眠刘玉琴高进一、肿瘤休眠的概念及历史肿瘤休眠（ｔｕｍｏｒｄｏｒｍａｎｃｙ）最早是临床上观察到的一种现象。早在１９５４年，Ｈａｄｆｉｅｌｄ就指出乳腺癌、黑色素瘤、直肠癌等实体瘤在原发肿瘤被切除以后，继发瘤的出现超过２年以上，甚至在４年、１４年或４...

关键词：肿瘤休眠动物模型

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延髓腹外侧区微量注射L－NNA和SNP对大鼠血压、心率和肾交感神经活动的影响

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生理学报 1996年第4期48卷 368-376页

作者：杨丽明何瑞荣河北医科大学基础医学研究所生理室北京中国协和医科大学北京中国医学科学院北京基础医学研究所病理生理研究室

在麻醉大鼠观察了向延髓腹外侧区微量注射ＮＯ合成酶抑制剂Ｎ－硝基左旋精氨酸（ＬＮＮＡ）和硝普钢（ＳＮＰ）对血压、心率和肾交感神经活动的影响，旨在探讨中枢左旋精氨酸－ＮＯ通路在动脉血压调节中的作用及其机制。实验结果如下：... 详细信息

在麻醉大鼠观察了向延髓腹外侧区微量注射ＮＯ合成酶抑制剂Ｎ－硝基左旋精氨酸（ＬＮＮＡ）和硝普钢（ＳＮＰ）对血压、心率和肾交感神经活动的影响，旨在探讨中枢左旋精氨酸－ＮＯ通路在动脉血压调节中的作用及其机制。实验结果如下：（１）向延髓腹外侧头端区（ＲＶＬＭ）注射Ｌ－ＮＮＡ后，平均动脉压（ＭＡＰ）升高，肾交感神经活动（ＲＳＮＡ）增强；心率（ＨＲ）减慢，但无统计学意义。ＭＡＰ和ＲＳＮＡ的变化持续３０ｍｉｎ以上；此效应可被预先静注左旋精氨酸所逆转。（２）向ＲＶＬＭ微量注射ＳＮＰ，ＭＡＰ降低，ＲＳＮＡ减弱；但ＨＲ的变化无统计学意义。（３）向延髓腹外侧尾端区（ＣＶＬＭ）注射Ｌ－ＮＮＡ，ＭＡＰ降低，ＨＲ减慢，ＲＳＮＡ减弱。（４）向ＣＶＬＭ微量注射ＳＮＰ，ＭＡＰ升高，ＲＳＮＡ增强，而心率无明显变化。以上结果表明，中枢左旋精氨酸－ＮＯ通路对延髓腹外侧部的神经元活动有调变作用。

关键词：延髓腹外侧区血压硝基左旋精氨酸硝普钠

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mm-LDL激活ECV304 BK_(Ca)及丹参与川芎嗪的干预作用

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 386-389页

作者：林琳郑永芳屈金河鲍光宏中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理研究室北京100005

目的观察轻度氧化低密度脂蛋白（mm-LDL）对人脐静脉内皮细胞株ECV304的大电导钙激活钾通道（BK_(Ca)）活动的影响，以及丹参(radix salviae miltiorrhizae)水溶提取物764-3和川芎嗪对其效应的干预。方法细胞贴附式膜片箝技术。结果 m... 详细信息

目的观察轻度氧化低密度脂蛋白（mm-LDL）对人脐静脉内皮细胞株ECV304的大电导钙激活钾通道（BK_(Ca)）活动的影响，以及丹参(radix salviae miltiorrhizae)水溶提取物764-3和川芎嗪对其效应的干预。方法细胞贴附式膜片箝技术。结果 mm-LDL(100μg/ml) 可增强ECV304 BK_(Ca)的活动；764-3(30μg/ml)和川芎嗪(200μg/ml)可削弱mm-LDL的激活效应。结论 mm-LDL激活BK_(Ca)的活动，从而增大静息钙内流的电化学驱动力，升高胞内钙浓度，致内皮细胞功能障碍。764-3和川芎嗪通过削弱这一作用而对内皮细胞起到保护作用。

关键词：钙激活钾通道轻度氧化低密度脂蛋白血管内皮细胞丹参川芎嗪

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儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

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中华儿科杂志 1997年第12期35卷 631-634页

作者：袁丽芳刘天慈杨涛周文敏牛静波霍亮吴沪生赵时敏孙念怙马素参林振兴中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室首都医科大学附属北京儿童医院中国协和医科大学北京协和医院

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ... 详细信息

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。

关键词：肌萎缩脊髓性产前诊断序列分析基因诊断

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L－NNA及NO供体对延髓腹外侧头端区神经元自发放电的影响

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生理学报 1996年第4期48卷 320-328页

作者：杨丽明何瑞荣河北医科大学基础医学研究所生理室北京中国协和医科大学北京中国医学科学院北京基础医学研究所病理生理研究室

在麻醉大鼠观察了静注ＮＯ合成酶抑制剂Ｎ－硝基左旋精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）和ＮＯ供体──硝普钠（ＳＮＰ）和ＳＩＮ－Ｉ对血压、心率和延髓腹外侧头端区（ＲＶＬＭ）神经元自发放电活动的影响，旨在探讨Ｌ－ａｒｇ：ＮＯ通路对动脉血压... 详细信息

在麻醉大鼠观察了静注ＮＯ合成酶抑制剂Ｎ－硝基左旋精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）和ＮＯ供体──硝普钠（ＳＮＰ）和ＳＩＮ－Ｉ对血压、心率和延髓腹外侧头端区（ＲＶＬＭ）神经元自发放电活动的影响，旨在探讨Ｌ－ａｒｇ：ＮＯ通路对动脉血压调节的中枢作用部位。所得结果如下：（１）静注Ｌ－ＮＮＡ后，平均动脉压（ＭＡＰ）升高，心率（ＨＲ）加快，１１个ＲＶＬＭ神经元自发放电频率增加。这些变化发生于给药后５ｍｉｎ，持续时间达３０ｍｉｎ以上。（２）静注ＳＮＰ后，ＭＡＰ降低，ＨＲ加快，２３个ＲＶＬＭ神经元自发放电频率降低，且有剂量依赖性。ＳＮＰ作用发生快，持续时间短。为了排除脑缺血的影响，还特意向一侧颈动脉内注射相同剂量ＳＮＰ，结果引起ＭＡＰ轻度降低，而ＨＲ无明显改变，但ＲＶＬＭ神经元自发放电频率仍显著降低。（３）静注另一ＮＯ供体ＳＩＮ－Ｉ后，ＭＡＰ降低，１１个ＲＶＬＭ神经元自发放电频率降低．与ＳＮＰ的效应基本一致。以上结果提示，ＲＶＬＭ是Ｌ－ａｒｇ：ＮＯ通路实现动脉血压调节的一个中枢作用部位。

关键词：延髓腹外侧头端区一氧化氮硝基左旋精氨酸

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血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF-κB的激活机制及其对血小板源生长因子B链基因转录的影响

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中华病理学杂志 2001年第4期30卷 276-280页

作者：李皓尹鸿操张华王宗立佘铭鹏中国协和医科大学基础医学研究所病理研究室北京中国医学科学院100005

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV3 0 4细胞中转录因子NF κB的作用和对血小板源生长因子B链 (PDGF B)基因表达的影响。方法　采用电泳迁移率移动分析法 (EMSA) ,免疫组织化学方法 ,共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术 ;荧光素酶报告基... 详细信息

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV3 0 4细胞中转录因子NF κB的作用和对血小板源生长因子B链 (PDGF B)基因表达的影响。方法　采用电泳迁移率移动分析法 (EMSA) ,免疫组织化学方法 ,共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术 ;荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活ECV3 0 4细胞NF κB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后ECV3 0 4细胞PDGF BmRNA的表达水平。结果　血管紧张素Ⅱ刺激后 ,在ECV3 0 4细胞内有NF κB的激活及核易位过程 ,应用免疫荧光共聚焦显微镜 ,免疫电镜及Northern印迹等方法均可观察到PDGF B或其基因表达增高。变异型激酶质粒IKKα KM ,IKKβ KM及NIK Km可抑制经血管紧张素Ⅱ刺激的转染细胞内与NF κB启动相连的荧光素酶的表达。结论　血管紧张素Ⅱ可激活胞质内NF κB并出现核易位 ,激酶NIK、IKKα 和IKKβ 参与了此信号传递路径。血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF B链mRNA水平增高。

关键词：血管紧张素Ⅱ 内皮 NF-kB 血小板源生长因子

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oxLDL对转人apoAI基因小鼠动脉平滑肌细胞胆固醇摄取和清除的影响

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 328-332页

作者：曾莹赵高峰钱军王宗立佘铭鹏中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理研究室北京100005

目的明确氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对转人apoAI基因 C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞（tr-SMC）胆固醇清除与摄取的影响；转入的apoAI基因是否有助于减轻oxLDL引起的SMC胆固醇积聚和对细胞的损害；以及oxLDL的刺激，对细胞已转入的apoAI... 详细信息

目的明确氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对转人apoAI基因 C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞（tr-SMC）胆固醇清除与摄取的影响；转入的apoAI基因是否有助于减轻oxLDL引起的SMC胆固醇积聚和对细胞的损害；以及oxLDL的刺激，对细胞已转入的apoAI基因表达的影响。方法用已建立的含小鼠金属硫蛋白I（MT-I）启动子的人apoAI转基因C57BL/6 小鼠主动脉SMC，通过3H-胆固醇标记率和清除率测定，观察oxLDL对tr-SMC胆固醇摄取与清除的影响。通过RT-PCR及 Northern blot技术检测oxLDL对tr-SMC基因表达的影响。结果 30 μg／ml oxLDL明显促进小鼠SMC增生；未见tr-SMC与非转基因小鼠平滑肌细胞（n-SMC）在标记率间的差别，oxLDL刺激后标记率增加约100%；tr-SMC较n-SMC细胞内胆固醇清除率增加40% ～ 50%。oxLDL刺激后，n-SMC清除率下降28%，而 tr-SMC仅下降10%。RT-PCR 及Northern blot表明oxLDL刺激后tr-SMC 的h-apoAI基因表达明显增加。结论转人apoAI 基因小鼠SMC的基因表达有助于减轻oxLDL引起的SMC胆固醇积聚；oxLDL的刺激促进tr-SMC 的人apo AI基因表达，表达的 h-apo AI可抑制oxLDL对平滑肌细胞的损害。

关键词：氧化低密度脂蛋白载脂蛋白AI 转基因平滑肌细胞胆固醇动脉血管

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载脂蛋白AⅠ基因启动子G/A置换多态性和饮酒的联合作用对凉山地区彝汉人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响

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中华病理学杂志 2000年第5期29卷 343-346页

作者：赵庆伟申萍张华周梦玲佘铭鹏武警医学院病理学教研室 300162 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理研究室北京100005

目的　探讨载脂蛋白AⅠ (apoAⅠ )启动子 - 75bp处G/A嘌呤置换和少量饮酒对凉山地区彝族及汉族人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响。方法　现场调查随机抽样 742名凉山州 15周岁以上彝汉健康居民 ,包括 3个人群样本 :彝族农民、彝族移民、... 详细信息

目的　探讨载脂蛋白AⅠ (apoAⅠ )启动子 - 75bp处G/A嘌呤置换和少量饮酒对凉山地区彝族及汉族人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响。方法　现场调查随机抽样 742名凉山州 15周岁以上彝汉健康居民 ,包括 3个人群样本 :彝族农民、彝族移民、汉族居民。根据饮酒折合的乙醇量将两民族人群分为 4组 :不饮酒者、1～ 2 5g/d的饮酒者、2 6～ 75g/d的饮酒者、75g/d以上的饮酒者。采集每人清晨空腹血样 10ml作有关血脂和脂蛋白水平测定。此外 ,还自冷冻血凝块中抽提基因组DNA ,经PCR扩增 ,进行片段长度多态性分析。结果　随饮酒量的一定增加 ,血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL C)和apoAⅠ水平呈轻度升高。在彝族农民样本和汉族居民样本中差异有非常显著性意义。 3组人群样本间的A等位基因频率相似。在A等位基因携带者和GG基因型携带者的各项血脂水平间差异未见显著性意义。但在不饮酒人群中 ,A等位基因携带者的apoAⅠ水平明显高于GG基因型携带者 ;在饮酒人群中 ,A等位基因携带者的apoAⅠ和HDL C水平明显低于GG基因型携带者 ,这一差异在城镇居民中有显著性意义 (P <0 .0 5 )。在不饮酒的人群中 ,G/A置换可以解释 18%的个体间apoAⅠ水平变异 (F =8.94,P <0 .0 1)。结论　适量饮用低度酒

关键词：载脂蛋白AI 乙醇冠心病 G/A置换多态性启动子

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苯丙酮尿症突变基因的快速检测及产前诊断

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中华妇产科杂志 1996年第7期31卷 401-403页

作者：杨涛袁丽芳黄尚志方炳良王玫孙念怙赵时敏罗会元中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所遗传室北京协和医院

目的：建立苯丙酮尿症突变基因快速检测及产前基因诊断的方法，以提高产前诊断率。方法：应用聚合酶链反应合并单链构象多态性方法及银染技术筛查苯丙氨酸羟化酶基因的四个外显子（ｅｘｏｎ，Ｅ）：７、１２、１１和１０区域，并用已知... 详细信息

目的：建立苯丙酮尿症突变基因快速检测及产前基因诊断的方法，以提高产前诊断率。方法：应用聚合酶链反应合并单链构象多态性方法及银染技术筛查苯丙氨酸羟化酶基因的四个外显子（ｅｘｏｎ，Ｅ）：７、１２、１１和１０区域，并用已知阳性和阴性样品为对照。结果：确立了３种已知位点突变：Ｒ２４３Ｑ（Ｅ７）［ＣＧＡ（Ａｒｇ２４３）→ＣＡＡ（Ｇｌｎ）］，Ｒ４１３Ｐ（Ｅ１２）［ＣＧＣ（Ａｒｇ４１３）→ＣＣＣ（Ｐｒｏ）］，Ｙ３５６Ｘ（Ｅ１１）［ＴＡＣ（Ｔｙｒ３５６）→ＴＡＡ（Ｔｅｒ）］，以及Ｅ１０区域的３种ＤＮＡ带型改变的检测条件。检测出１３个苯丙酮尿症家系的突变位点并对５例进行了产前基因诊断。结论：单链构象多态性方法可用于苯丙酮尿症家系的突变基因检测和产前诊断。

关键词：苯丙酮尿症突变基因单链构象产前诊断

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