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RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

首都医科大学学报 2008年第3期29卷 295-299页

作者：张莉张澍田于中麟李鹏宗晔许彩民华方圆韩兵社首都医科大学附属北京友谊医院消化科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所国家分子生物学实验室

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA... 详细信息

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。

关键词：食管鳞状上皮癌环氧化酶-2 阿司匹林凋亡 RNA干扰

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ω-3多不饱和脂肪酸单用及联合表阿霉素对胃癌作用动物实验研究

ω-3多不饱和脂肪酸单用及联合表阿霉素对胃癌作用动物实验研究

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中华医学会第十一届全国营养支持学术会议

作者：郭卫东于健春康维明刘玉琴青岛大学医学院附属医院肝胆外科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞培养中心

研究背景和目的:在目前以手术为主要手段的胃癌综合治疗中,化疗仍然是必不可少的手段之一,但是化疗对机体的毒副作用,比如骨髓抑制、免疫抑制、胃肠道反应等也是显而易见的。许多病人因为耐受不了而放弃治疗,更有一些身体状况不佳的病... 详细信息

研究背景和目的:在目前以手术为主要手段的胃癌综合治疗中,化疗仍然是必不可少的手段之一,但是化疗对机体的毒副作用,比如骨髓抑制、免疫抑制、胃肠道反应等也是显而易见的。许多病人因为耐受不了而放弃治疗,更有一些身体状况不佳的病人因化疗而加速死亡的报道。因此,减少化疗药的毒副作用显得尤为必要。

关键词： ?-3多不饱和脂肪酸表阿霉素药物疗法联合体内研究

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SIRT1通过上调MnSOD的表达保护糖尿病导致的内皮细胞损伤

SIRT1通过上调MnSOD的表达保护糖尿病导致的内皮细胞损伤

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：周爽李莉张慧娜陈厚早刘德培中国医学科学院中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

SIRT1是Ⅲ类的组蛋白去乙酰化酶,在代谢调节和抵抗不良环境因素损伤方面发挥重要作用。高糖对内皮细胞造成的损伤与糖尿病的心血管并发症密切相关。本研究旨在探讨SIRT1是否对糖尿病导致的内皮细胞损伤具有保护作用及其机制。将SIRT1 c... 详细信息

SIRT1是Ⅲ类的组蛋白去乙酰化酶,在代谢调节和抵抗不良环境因素损伤方面发挥重要作用。高糖对内皮细胞造成的损伤与糖尿病的心血管并发症密切相关。本研究旨在探讨SIRT1是否对糖尿病导致的内皮细胞损伤具有保护作用及其机制。将SIRT1 cDNA与VE-Cadherin启动子连接,通过显微注射受精卵的方法制备了内皮细胞特异表达SIRT1的转基因小鼠,经过RT-PCR、Western blot和免疫荧光三种方法证明SIRT1在小鼠的血管内皮细胞特异性高表达。将转基因阳性雄鼠和同窝阴性雄鼠随机分为两个组(每组均含阳性鼠和阴性鼠),一组腹腔注射STZ制备Ⅰ型糖尿病模型,另一组腹腔注射柠檬酸缓冲液作为对照组。8周后取小鼠的整根主动脉提取蛋白,用Western blot检测发现,正常的转基因阴性鼠和阳性鼠MnSOD的蛋白水平无明显差异,但糖尿病转基因阴性小鼠与正常对照阴性小鼠相比MnSOD的蛋白水平降低约6倍,而糖尿病转基因阳性小鼠与正常对照相比MnSOD水平无明显降低。糖尿病小鼠的内皮细胞依赖的血管舒张功能较正常小鼠有显著降低,但是糖尿病转基因阳性小鼠的内皮细胞依赖的血管舒张功能与糖尿病转基因阴性小鼠相比,得到了显著改善。用SiRNA干扰人脐静脉内皮细胞内SIRT1蛋白的表达,干扰48 h后用Western blot检测发现干扰SIRT1能降低MnSOD的蛋白水平约2倍。染色质免疫共沉淀(chip)发现SIRT1结合在MnSOD启动子上,荧光素酶报告基因系统检测发现过表达SIRT1和它的激活剂Resveratrol都可以上调MnSOD启动子活性,且呈现剂量-效应关系。说明SIRT1可以通过上调MnSOD表达改善糖尿病导致的内皮细胞损伤。

关键词： SIRT1 MnSOD 糖尿病内皮细胞

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一种简单而有效的检测胃癌微小RNA表达水平的方法

一种简单而有效的检测胃癌微小RNA表达水平的方法

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙淼张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系中国医科大学医学基因组学研究室

目的胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24%。近年来,表观遗传学与肿瘤发生的... 详细信息

目的胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24%。近年来,表观遗传学与肿瘤发生的相关性研究已成为肿瘤遗传学的重要内容。其中,微小RNA(miRNA)所介导的基因转录后调节被证明与肿瘤的发生密切相关。本研究旨在通过建立一种简单而有效的实验技术来检测胃癌中miRNA的表达情况,从而为胃癌的早期诊断和分子病理学提供miRNA水平的分析工具和实验依据。

关键词：胃癌组织 RNA

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应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的改变

应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙森张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系中国医科大学医学基因组学研究室

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.... 详细信息

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.易于操作等优点.使其在临床检验中具有良好的应用前景。本研究旨在通过MLPA技术对中国胃癌病人样本进行全基因组范围的DNA拷贝数改变的分析.以进一步探明胃癌的分子遗传学机理和发现与病人临床表现高度相关的基因标记物.为胃癌的早期诊断和分子分型提供实用的临床检验技术基础。方法:将经显微切割获得的50例胃癌患者肿瘤样本(肿瘤细胞>90%)和4例正常胃组织通过TaKaRa基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。通过MLPA的预制探针和样本基因组DNA进行杂交.经过对相邻位点片断的连接后进行多重PCR反应.对扩增产物进行毛细管电泳.使用GeneMarker软件对经ABI 3730毛细管电泳仪所获得的荧光电泳图谱进行定量分析.获得样本的基因组DNA拷贝数相对值,并利用HCluster软件对结果进行聚类分析。使用SPSS软件对基因位点的拷贝数与胃癌组织的临床病理参数进行统计学分析。结果:HCluster聚类分析显示:50例胃癌组织和4例正常胃组织被成功的分成两大类.其中50例胃组织根据其基因组DNA拷贝数的改变幅度而分成高、中、低、极低四组。对GeneMarker所计算的DNA拷贝数相对值进行定义:小于0.75为拷贝数缺失.大于1.3为拷贝数扩增.介于0.75和1.3之间为拷贝数正常。根据以上定义.在全部检测的112个基因位点中.拷贝数扩增的频率大于30%的基因位点有28个.占全部位点的25%.拷贝数缺失的频率大于30%的基因位点有26个,占全部位点的23.2%。拷贝数扩增频率最高的基因位点的前3位分别为:PTK2(8q24.3),72%;MYC(8q24.21),70%;EHF(11p13),66%。拷贝数缺失频率最高的基因位点的前3位分别为:CDKN2A(9p21.3),90%;MIF(22q11.23),86%;THBD (20p11.21).78%。在淋巴结转移阴性和阳性的两组病例之间.Mann- Whitney U test结果表明VEGF(p=0.044)和MYC(p=0.018)的拷贝数相对值具有显著性差别。结论:本研究结果证明通过MLPA技术对胃癌标本进行基因拷贝数的检测切实可行.同时具有高通量、低成本、操作简单等优点,因此可以在临床检验中推广使用;同时我们的实验结果为胃癌的基因诊断分型提供了有力的科学依据。

关键词：胃癌组织基因位点多重连接依赖探针扩增拷贝数 DNA 基因组

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人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 684-687页

作者：刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室呼和浩特010018 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市药品不良反应监测中心北京100024

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。

关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体

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核因子кB受体激动子配体在慢性根尖周炎病损组织中的表达

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口腔医学研究 2008年第2期24卷 166-169页

作者：杨文东李志新郭颖孙建军高学军中国医学科学院·中国协和医科大学北京协和医院口腔科北京100730 北京大学医学部基础医学院中西医结合教研室北京大学口腔医学院口腔医院牙体牙髓科

目的:探讨核因子кB受体激动子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)在慢性根尖周炎发病中的作用。方法:采用RT-PCR法,从mRNA水平检测RANKL在10例慢性根尖肉芽肿及3例根尖囊肿中的表达,分析RANKLmRNA的表达与慢... 详细信息

目的:探讨核因子кB受体激动子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)在慢性根尖周炎发病中的作用。方法:采用RT-PCR法,从mRNA水平检测RANKL在10例慢性根尖肉芽肿及3例根尖囊肿中的表达,分析RANKLmRNA的表达与慢性根尖周炎病损的病理学表现(包括病损的病理分型、炎症细胞浸润程度)之间的关系,采用免疫组化的方法,对RANKL的表达进行细胞定位。结果:RANKLmRNA在根尖肉芽肿病损组和根尖囊肿组明显增高,但根尖肉芽肿和根尖囊肿组之间差异无显著性。RANKL mRNA在轻、重度炎症细胞浸润组较中度炎症细胞浸润组明显增高(P<0.05)。RANKL mRNA水平与病损大小无关。免疫组化结果显示,RANKL主要表达于浸润的炎症细胞中及增生的上皮细胞中。结论:RANKL在慢性根尖周炎的发病中具有重要的作用,但也提示存在其它细胞因子的协同作用。

关键词：核因子кB受体激动子配体根尖周疾病免疫组织化学

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应用MLPA技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的改变

应用MLPA技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的改变

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第八届北京生命科学领域学术年会

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙淼张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系北京100005 中国医科大学医学基因组学研究室沈阳110001

多重连接依赖探针扩增(称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术,可以在单一反应中检测45个核苷酸序列，本研究旨在通过MLPA技术对中国胃癌病人样本进行全基因组范围的DNA拷贝数改变的分析,以进一步探明胃癌的分子遗传学机理... 详细信息

多重连接依赖探针扩增(称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术,可以在单一反应中检测45个核苷酸序列，本研究旨在通过MLPA技术对中国胃癌病人样本进行全基因组范围的DNA拷贝数改变的分析,以进一步探明胃癌的分子遗传学机理和发现与病人临床表现高度相关的基因标记物,为胃癌的早期诊断和基因分型提供实用的临床检验技术基础及分子生物学依据。

关键词：胃癌基因组DNA 基因拷贝数 MLPA 早期诊断分子遗传学

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胃癌的微小RNA表达谱研究

胃癌的微小RNA表达谱研究

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第八届北京生命科学领域学术年会

胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24％.近年来,表观遗传学与肿瘤发生的相关... 详细信息

胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24％.近年来,表观遗传学与肿瘤发生的相关性研究已成为肿瘤遗传学的重要内容。其中,微小RNA(miRNA)所介导的基因转录后调节被证明与肿瘤的发生密切相关，本研究旨在通过建立一种简单而有效的实验技术来研究胃癌中miRNA的表达谱情况,从而进一步分析miRNA在胃癌发生中的相关分子机理。

关键词：胃癌表观遗传学肿瘤发生微小RNA 表达谱

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SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响

SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：张慧娜鲁云彪刘德培中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

糖尿病导致心血管系统各种疾患的易感性增强,如冠心病、高血压等都会随着糖尿病的加重而更加严重。糖尿病所致的各种损伤细胞的通路中终末糖基化产物(AGE)及其受体(RAGE)通路的激活会导致血管内皮细胞ROS增高,炎性反应加重。有报道用RAG... 详细信息

糖尿病导致心血管系统各种疾患的易感性增强,如冠心病、高血压等都会随着糖尿病的加重而更加严重。糖尿病所致的各种损伤细胞的通路中终末糖基化产物(AGE)及其受体(RAGE)通路的激活会导致血管内皮细胞ROS增高,炎性反应加重。有报道用RAGE的抗体或可溶性RAGE(sRAGE)与RAGE结合,竞争性抑制这条通路可以减少动脉粥样硬化斑块的产生。三类去乙酰化酶SIRT1有抗炎、抗凋亡的作用,本研究的日的是考察在人原代血管内皮细胞(HUVECs)中SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响。我们用表达野生型SIRT1的腺病毒感染HUVECs,再用TNFα处理后,通过RT-PCR和Western blot技术,观察到SIRT1可以降低TNFα诱导下RAGE的表达,而感染SIRT1干扰的腺病毒及用SIRT1的抑制剂sirtinol处理后会得到相反的结果。荧光素酶报告系统检测分析也显示SIRT1可以降低RAGE-promoter介导的荧光素酶活性,而突变RAGE启动子区的NF-κB结合位点后这种效应减弱,考虑到SIRT1可以通过去乙酰化NF-κB的亚基P65来影响NF-κB的活性,我们用chip实验证实SIRT1可以结合到RAGE启动子区NF-κB的结合元件处。通过CO-IP和IP检测发现在内皮细胞中SIRT1的确可以和P65作用,并且去乙酰化P65。证明SIRT1通过抑制NF-κB活性米降低HUVECs中RAGE的表达。

关键词： SIRT1 RAGE TNFα

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