检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张文亮张曦朱占松谭丹崔鹏飞施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫... 详细信息

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫情监测过程中分离到多株H4亚型禽流感病毒(AIV),发现H4亚型禽流感病毒的分离率逐渐提高。本研究对2009年至2011年间分离的55株病毒进行RNA提取、基因组扩增、序列分析、相关抗原性分析以及对小鼠的感染能力评估,以了解我国当前南方地区H4亚型AIV的遗传进化关系,抗原

关键词：禽流感病毒生物学特性研究中国南方

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禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明... 详细信息

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明，该方法对M-AIV RNA的最小检测限为10．6，灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍；全部反应可在1．5h内完成；在反应体系中添加Fluorescent Detection Reagent染料后，可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明，该方法灵敏度高、特异性好，能够作为A型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词：禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增病毒检测性能评价

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H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈艳孔维乔传玲杨焕良辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg... 详细信息

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg／孔，酶标抗体1：5000稀释;单抗37 4℃作用***，酶标抗体37℃作用1.0h。并对此方法的特异性和敏感性进行了分析。同时，应用建立的抗原捕捉ELISA方法对84份H3亚型SIV实验室感染猪的拭子和肺脏样品进行检测。结果显示该方法具有良好的特异性和敏感性，可用于H3亚型SIV的临床检测。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体病毒检测性能评价

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重组腺病毒载体禽流感疫苗的研究进展

重组腺病毒载体禽流感疫苗的研究进展

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第三届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛

作者：王寿山刘春国石薇琳张超林刘彦云王伟刘明天津瑞普生物技术股份有限公司 300308 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽用药物与兽医生物技术重点实验室农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室 OIE 禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

应用复制缺陷型腺病毒作为载体制备新一代禽流感疫苗可以克服在疫苗生产过程中，流感病毒大量增殖的弊端，且它非常安全，可以在无血清悬浮细胞中迅速产生，具有稳定性好、免疫途径简单、可高水平介导外源基因表达、表达宿主细胞范围广... 详细信息

应用复制缺陷型腺病毒作为载体制备新一代禽流感疫苗可以克服在疫苗生产过程中，流感病毒大量增殖的弊端，且它非常安全，可以在无血清悬浮细胞中迅速产生，具有稳定性好、免疫途径简单、可高水平介导外源基因表达、表达宿主细胞范围广泛、没有致癌和致突变的危险、可插入大片段的外源基因、既参与细胞免疫也参与体液免疫等优点。

关键词：禽流感疫苗缺陷型腺病毒基因重组表达载体

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H5N1亚型禽流感灭活疫苗种毒Re-6株的生物学特性及免疫原性研究

H5N1亚型禽流感灭活疫苗种毒Re-6株的生物学特性及免疫原性研究

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第三届(2012)中国黄羽肉鸡行业发展大会

作者：曾显营 ZENG Xianying TIAN Guobin 田国彬 FENG Huapeng 冯华朋 DENG Guohua 邓国华 SHI Jianzhong 施建忠 ZHANG Pantao 张盼涛 SU Wen 苏文 YANG Jing 杨婧 LIU Jingli 刘景利徐佳 XU Jia CHEN Hualan 陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室哈尔滨 150001 State Key Lab of Veterinary Biotechnology/Animal Influenza Laboratory of the Ministry of Agriculture Harbin Weike Biotechnologv Development Company Harbin 150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨 150001

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天... 详细信息

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re—6重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡和SPF鸭后,3周时平均HI抗体效价达8.310g2和8.4 log2;免疫鸡和免疫鸭对亲本强毒株GD1322攻击提供完全保护.以上结果表明禽流感灭活疫苗种毒Re—6株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,且该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是理想的疫苗种毒株.

关键词：家禽亚型禽流感灭活疫苗生物学特性免疫原性

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AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 141-145页

作者：王彦妮曾显营田国彬苏文陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本实验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和非免疫状态下外周血、胸腺和脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的... 详细信息

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本实验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和非免疫状态下外周血、胸腺和脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的增殖反应能力和诱导巨噬细胞NO分泌量的变化。结果表明,非免疫状态下,AA肉鸡外周血CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量在7日龄时均为最低,脾脏中CD4+T淋巴细胞相对百分含量在整个试验期一直呈下降趋势,免疫后外周血、脾脏和胸腺中CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量均明显高于非免疫组,且脾脏CD4+T淋巴细胞呈阶段性上升状态;各时期淋巴细胞刺激指数(SI)值和巨噬细胞NO分泌量检测结果表明,免疫组均高于同期对照组(p<0.05)。研究结果还表明:肉鸡在7日龄时细胞免疫水平最低,灭活疫苗可以激发肉鸡产生较强的细胞免疫应答。

关键词：灭活疫苗 T淋巴细胞亚群 AA肉鸡 MTT法 Griess法

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抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 711-716页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293... 详细信息

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达。将pCAGGS-HA以100μg.只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11。其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1∶8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应。该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础。

关键词：甲型H1N1猪流感病毒 HA MAb

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流感病毒抗原表位的研究进展

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中国畜牧兽医 2011年第6期38卷 193-196页

作者：孙晓东熊永忠陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

流感病毒抗原表位的研究,不仅是对流感病毒致病机理和机体免疫系统反应的探究,还能很好地指导对流感的防治。作者从抗原表位的特点,流感病毒抗原表位的特点、研究进展及流感病毒抗原表位疫苗的应用几个方面进行了综述。

关键词：流感病毒抗原表位表位疫苗

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表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 313-315页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的... 详细信息

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。

关键词： IL-2 重组腺病毒基因表达

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甲型H1N1流感病毒株的分离鉴定以及PR8株的相关基因对重组病毒增殖能力的影响

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 517-520页

作者：李建辉刘春国张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1... 详细信息

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1流感病毒,并命名为A/Harbin/LM/2009(H1N1),简称LM株。由于LM分离株在鸡胚中增殖能力比较弱,为提高其在鸡胚中的增殖能力,我们利用反向遗传技术将LM株的HA和NA基因与高增殖特性的人流感病毒细胞高产株PR8的另外6个节段进行"6+2"重配,获得拯救病毒,但该重配病毒血凝价并未显著提高。为进一步鉴定影响病毒增殖能力的基因,本研究将LM株所有节段以"7+1"的方式逐一与PR8的7个片段搭配构成完整的流感病毒基因组,分别得到8个重配病毒。结果显示分离株的PB1、PA、HA基因显著降低了重配病毒在鸡胚细胞中的增殖能力。

关键词：甲型H1N1流感病毒反向遗传重配增殖能力

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