检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：展小过乔传玲杨焕良陈艳孔维辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转... 详细信息

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒rAd-H3HA-EGFF。将重组病毒rAd-H3HA-EGFP以10～8TCID两次接种6周龄的BALB/c小鼠,时间间隔为3周,通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重组病毒的免疫原性。结果HA基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。重组腺病毒rAd-H3HA-EGFP以1×10～8TCID的剂量免疫小鼠后,能够诱导产生高水平的特异性抗体,并对H3亚型SIV的攻击提供完全保护。

关键词：猪流感病毒 HA基因重组腺病毒小鼠免疫原性

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表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨黑龙江 150001

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒p... 详细信息

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Westem-blot鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。

关键词：猪流感病毒 NP基因重组腺病毒生物活性

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抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：孔维乔传玲陈艳杨焕良展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨黑龙江 150001

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)作为免疫原免疫6-8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10... 详细信息

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)作为免疫原免疫6-8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1：105、1：106.1：104、1：105、1：106、1：105、1：106;其中1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG1,而4E8、5C7、5D12则是IgG2a,所有的单抗轻链均为K型。Wstern-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。该亚型单克隆抗体的制备,为SIV鉴别诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：猪流感病毒血凝素单克隆抗体鉴别诊断间接免疫荧光试验

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河南省部分地区猪流感血清学调查

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河南畜牧兽医（综合版） 2009年第7期30卷 23-24页

作者：韩庆功张智勇乔传玲河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.1... 详细信息

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.16%,H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5+H9亚型SIV抗体阳性率为0。表明在所调查的猪群中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1亚型感染,部分猪群有多种亚型混合感染存在。

关键词：猪流感血清血凝抑制试验

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流感病毒反向遗传学技术研究进展

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生物化学与生物物理进展 2008年第8期35卷 867-874页

作者：刘大飞刘春国刘明刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站莱阳265200

流感病毒亚型众多,且极易发生变异,给防控带来很大困难,所以当务之急应加强其在致病机理、传播机制等方面的研究和加快新型流感疫苗的开发.近年来,反向遗传学技术的发展为流感病毒基因功能研究和疫苗制备方面开辟了新思路.

关键词：流感病毒反向遗传学技术功能研究标记疫苗

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H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

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微生物学报 2008年第2期48卷 220-225页

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛刘大飞陈浩齐金龙乔传玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物,扩增出HA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得... 详细信息

根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物,扩增出HA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得重组转座子(rBacmid-H1),在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBV-H1),再感染细胞,收获目的蛋白。通过血凝试验、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物学活性。利用表达的蛋白作为猪流感间接ELISA的抗原,初步建立H1亚型猪流感的间接ELISA检测方法,并对内蒙古、辽宁和黑龙江等地送检的93份猪血清进行了检测,阳性率为31.18%,为研制开发快速、准确、简便的H1亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定基础。

关键词： H1亚型猪流感病毒血凝素基因昆虫细胞杆状病毒表达间接ELISA

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A型流感病毒逃避免疫应答的策略

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生物化学与生物物理进展 2008年第10期35卷 1137-1141页

作者：赵朴郑玉姝乔传玲贾贝贝刘兴友河南科技学院动物科学学院新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

综述了IAV逃避抗病毒免疫策略的最新进展.A型流感病毒(IAV)感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略.越来越多的证据表明,IAV已... 详细信息

综述了IAV逃避抗病毒免疫策略的最新进展.A型流感病毒(IAV)感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略.越来越多的证据表明,IAV已经进化出高超的策略克服宿主的抗病毒信号,如抗原变异和编码辅助蛋白(NS1和PB1-F2).深入理解IAV逃避宿主免疫的策略,有助于揭示IAV感染的机制和发现针对IAV的抗病毒药物的靶标.

关键词： A犁流感病毒免疫逃避抗原变异 NS1 PB1-F2

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禽流感病毒等RNA病毒鉴别基因芯片的制备

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 685-690页

作者：田丽娜王秀荣杨忠苹石霖陶启蒙包红梅李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

将克隆和鉴定的AIV的HA、NA、M、NS、NP基因以及NDV、IBDV、IBV的保守基因片段作为探针，同时以克隆的GAPDH基因作为阳性对照，利用芯片点样系统spotArray TM24将探针与阳性对照、阴性对照和空白对照按照设计好的阵列点在基片上，制备了... 详细信息

将克隆和鉴定的AIV的HA、NA、M、NS、NP基因以及NDV、IBDV、IBV的保守基因片段作为探针，同时以克隆的GAPDH基因作为阳性对照，利用芯片点样系统spotArray TM24将探针与阳性对照、阴性对照和空白对照按照设计好的阵列点在基片上，制备了AIV等RNA病毒诊断芯片，并从点样条件和杂交条件两个方面进行了优化。结果显示，探针浓度在300～1200μg／mL时点样，Cy3-dUTP终浓度为0．05μmol／mL，杂交温度在42℃，杂交时间在8～12h时，杂交信号比较理想。该方法对20份已鉴定的H5N1亚型禽流感病毒的检出率为100％（20／20）；10份现地送检的疑似AIV样品的检出率为70％（7／10），检测结果与RT—PCR和鸡胚传代分离鉴定的符合率为100％。结果表明，制备的DNA芯片可有效诊断上述病毒。

关键词：禽流感病毒基因芯片鉴别诊断优化

来源：评论

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利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型

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微生物学报 2008年第7期48卷 935-940页

作者：杨忠苹王秀荣田丽娜王煜陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、农业部动物流感重点开放实验室、兽医生物国家重点开放实验室哈尔滨150001 重庆出入境检验检疫局重庆400020

【目的】研制可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。【方法】分别克隆了禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因以及看家基因GAPDH的重组质粒。以重组质粒为模板,用PCR方法扩... 详细信息

【目的】研制可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。【方法】分别克隆了禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因以及看家基因GAPDH的重组质粒。以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的片基上,制备基因芯片。在PCR过程中对待检样品进行标记,然后与芯片杂交,洗涤,扫描并进行结果分析。【结果】结果显示检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。同时用RT-PCR、鸡胚接种和基因芯片方法对H1-H15亚型AIV参考毒株、30份人工感染样品、21份现地疑似样品进行检测,结果发现,对人工感染样品芯片检测方法与鸡胚接种和RT-PCR的符合率分别为100%和96%,现地样品符合率为100%。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别部分主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。

关键词：基因芯片禽流感亚型区分

来源：评论

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不对称RT-PCR结合芯片技术鉴别4种禽病的初步研究

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 954-958页

作者：陶启蒙王秀荣武嘉男石霖李雁冰包红梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究结合非对称RT-PCR和基因芯片两种技术,构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型和N1、N2神经氨酸酶亚型以及鸡传染性支气管炎病、新城疫病、鸡传染性法氏囊病的基因芯片。分别T/A克隆部分禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因... 详细信息

本研究结合非对称RT-PCR和基因芯片两种技术,构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型和N1、N2神经氨酸酶亚型以及鸡传染性支气管炎病、新城疫病、鸡传染性法氏囊病的基因芯片。分别T/A克隆部分禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因,鸡传染性支气管炎病毒np基因、新城疫病np基因、鸡传染性法氏囊A基因,并构建重组质粒;以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;常规方法从待检样品中提取RNA,用Cy3标记引物进行RT-PCR,将荧光素引入PCR产物中;并对扩增条件进行优化。研究发现检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号;该方法可以准确进行4种主要禽病的鉴别诊断和禽流感主要流行亚型鉴定,对感染样品和现地样品检测结果与RT-PCR、鸡胚接种有较高一致性,符合率分别为100%和96%。结果显示该方法可用于同步鉴别禽流感、鸡传染性支气管炎、新城疫、鸡传染性法氏囊病,以及现地主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。

关键词：不对称PCR 基因芯片禽病禽流感亚型鉴别

来源：评论

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