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第十届世界华人鱼虾营养学术研讨会

作者：刘波张媛媛谢骏戈贤平宋长友任鸣春周群兰缪凌鸿中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

本试验采用单因子试验设计，以团头鲂(50.4±2.35g)为研究对象，旨在研究腹腔感染嗜水气单胞菌后大黄素对团头鲂的生理反应及相关抗氧化基因表达的影响.实验分为5组，第1组按体重1％腹腔注射生理盐水，其它4组按相同处理注射1×... 详细信息

本试验采用单因子试验设计，以团头鲂(50.4±2.35g)为研究对象，旨在研究腹腔感染嗜水气单胞菌后大黄素对团头鲂的生理反应及相关抗氧化基因表达的影响.实验分为5组，第1组按体重1％腹腔注射生理盐水，其它4组按相同处理注射1×106 CFU/mL菌悬液;第1、2组饲喂基础日粮(0 mg/kg)，其它3组分别饲喂30、100和150 mg/kg大黄素日粮;养殖周期14天，并在12、24、36、48和96 h采样.

关键词：团头鲂大黄素嗜水气单孢菌感染生长非特异性免疫

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大黄素对团头鲂代谢、免疫及抗氧化调控的差异蛋白质组学研究

大黄素对团头鲂代谢、免疫及抗氧化调控的差异蛋白质组学研究

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第十届世界华人鱼虾营养学术研讨会

作者：宋长友刘波张媛媛徐跑谢骏戈贤平任鸣春周群兰缪凌鸿赵振新中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

为探明大黄素对团头鲂代谢、免疫及抗氧化调节作用的分子机制，本研究以团头鲂(3.94±0.15g)为研究对象，用不同大黄素水平日粮(0、15、30、60和120 mg kg-1)进行8周养殖实验，并利用蛋白质组学的方法对团头鲂肝脏进行研究.

关键词：差异蛋白质组学大黄素团头鲂肝脏基因表达抗氧化

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不同温度预热应激对大黄素处理草鱼肝细胞的影响

不同温度预热应激对大黄素处理草鱼肝细胞的影响

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第十届世界华人鱼虾营养学术研讨会

作者：刘波崔彦婷谢骏戈贤平徐跑任鸣春周群兰缪凌鸿中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

为了研究不同温度预热应激对大黄素处理草鱼肝细胞,细胞活力、释放LDH、SOD活性、T-AOC、ROS、△Ψm和HSPs(HSP60、70和90)相对mRNA表达的影响.培养的细胞在高温30、32或34℃ 暴露0.5 h,然后立即放回27℃恢复12h,接着用不同浓度大黄素(0... 详细信息

为了研究不同温度预热应激对大黄素处理草鱼肝细胞,细胞活力、释放LDH、SOD活性、T-AOC、ROS、△Ψm和HSPs(HSP60、70和90)相对mRNA表达的影响.培养的细胞在高温30、32或34℃ 暴露0.5 h,然后立即放回27℃恢复12h,接着用不同浓度大黄素(0.04-25 ug mL-1)处理细胞24 h.试验结果显示,30℃预处理组显著增加高浓度大黄素组(1、5、25 ug mL-1)细胞活力(P＜0.05),降低LDH释放(P＜0.05),提高细胞膜电位(P＜0.05),说明30℃高温预处理可以减轻大黄素对细胞产生的损伤;30℃高温预处理组的ROS最低,和大黄素对照组之间差异显著(P＜0.05),这表明草鱼肝细胞在大黄处理后,机体正在经历氧化应激诱导的损伤,细胞有可能引起生理功能紊乱甚至丧失;30℃高温预处理组SOD活性和T-AOC显著增加(P＜0.05),说明30℃温和热应激能够产生细胞内的抗氧化酶保护细胞不受ROS的损伤;3种高温预处理(30、32和34℃)都能显著增加HSPs的表达(P＜0.05),由此推断出高温预处理可诱导草鱼肝细胞产生HSPs保护氧自由基损伤,抑制细胞凋亡,对高浓度大黄素产生的细胞损伤产生保护作用.

关键词：热应激草鱼肝细胞大黄素保护

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建鲤ODC1基因型与增重的相关性分析

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水生生物学报 2014年第3期38卷 414-421页

作者：李红霞李建林唐永凯俞菊华中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081

构建了建鲤(Cyprinus carpio ***)鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)jlODC1a基因上6个和jlODC1b基因上4个SNP位点的PCR-RFLP方法,检测了这10个位点在12个家系约900尾建鲤选育群体中的基因型,各位点的基因型频率存在差异,最小... 详细信息

构建了建鲤(Cyprinus carpio ***)鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)jlODC1a基因上6个和jlODC1b基因上4个SNP位点的PCR-RFLP方法,检测了这10个位点在12个家系约900尾建鲤选育群体中的基因型,各位点的基因型频率存在差异,最小等位基因频率(MAF)为0.14—0.48。各位点不同基因型与增重相关分析结果,其中7个SNPs与建鲤增重显性相关的位点,ODC1s基因上与雌鱼增重相关的SNP位点(7个)较雄鱼(4个)多。标记富集结果表明富集与建鲤增重相关的优势基因型的SNP个数越多的个体增重速度越快SNP个数越多的个体增重速度越快,富集4个的平均增重显著快于富集0—3的个体增重,且比0标记的快约14%,这反映出生长为数量性状。进一步对所检测位点进行双倍型分析,结果显示具有四个优势基因型且全部杂合优势基因型的4567(XXXXXXACCTCTCT)组的增重最快,比0优势基因型的增重快达26.6%,可以考虑用于今后的快增长建鲤的选育计划中。此外,双倍型分析结果还表明,不同位点之间可能存在或颉抗或协同的互作,如1和4之间存在拮抗关系,因此在今后的选育计划中,在考虑标记富集的情况下还应考虑标记之间的关系。宜在选择互为协同作用优势基因型的前提下,富集尽可能多的SNP标记。

关键词：建鲤鸟氨酸脱羧酶基因型 SNP-增重相关分析

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建鲤leptin两种原核表达载体的构建和表达

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动物学杂志 2014年第1期49卷 51-56页

作者：唐永凯李建林李红霞俞菊华中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081

使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点,设计引物扩增建鲤(Cyprinus carpio ***)leptin基因(jlLEP-A1,jlLEP-B)不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a(+)和pGex-4T-1原核表达载体,构建重组质粒,测序验证插入位点的正确性。... 详细信息

使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点,设计引物扩增建鲤(Cyprinus carpio ***)leptin基因(jlLEP-A1,jlLEP-B)不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a(+)和pGex-4T-1原核表达载体,构建重组质粒,测序验证插入位点的正确性。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白pET-32a(+)/jlLEP-A1,pET-32a(+)/jlLEP-B和pGex-4T-1/jlLEP-A1,pGex-4T-1/jlLEP-B。结果表明,在37℃和1 mmol/L IPTG的条件下诱导5 h,重组蛋白表达量最大。SDS-PAGE电泳显示重组蛋白主要以可溶蛋白形式存在。这一结果为后续的建鲤leptin基因功能研究奠定了基础。

关键词：建鲤 Leptin 载体原核表达

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低温驯化下4种不同品系罗非鱼血清皮质醇与免疫相关指标的变化

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中国水产科学 2014年第2期21卷 266-274页

作者：何杰强俊徐跑朱志祥中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

选取4种不同品系罗非鱼,分别为吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)、奥尼罗非鱼(***×***)、红罗非鱼(***♂×***♀)和奥利亚罗非鱼(***)。在26℃水温下饲养3周后,选取规格基本一致的罗非鱼(体质量50.73 g±4.23 g)进行低... 详细信息

选取4种不同品系罗非鱼,分别为吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)、奥尼罗非鱼(***×***)、红罗非鱼(***♂×***♀)和奥利亚罗非鱼(***)。在26℃水温下饲养3周后,选取规格基本一致的罗非鱼(体质量50.73 g±4.23 g)进行低温驯化实验。水温以3℃/d的速度从26℃降至8℃,分别于水温为26℃、20℃、14℃和8℃时进行采样,比较不同驯化阶段4种不同品系罗非鱼血清皮质醇和免疫相关指标的变化规律。结果表明,与26℃时的免疫指标相比,水温降至8℃时,吉富与红罗非鱼血清皮质醇水平显著升高;然而血清C3、C4、IgM以及头肾C型溶菌酶mRNA水平显著下降(P<0.05),血清中高皮质醇水平对鱼体的免疫产生了抑制作用。水温为8℃时,奥尼罗非鱼血清皮质醇、IgM和补体C3以及头肾抗菌肽mRNA水平显著升高;奥利亚血清皮质醇、C4和IgM以及头肾C型溶菌酶mRNA水平与26℃时相比无显著差异,然而血清溶菌酶与C3水平降低。驯化实验结束后,比较了4种不同品系罗非鱼在8℃水温下48 h内的累积死亡率。吉富与红罗非鱼组累积死亡率较高,分别达到43.3%和40.0%;奥尼罗非鱼其次,为23.3%;奥利亚罗非鱼最低,为20.0%。较高的血清IgM和头肾溶菌酶和抗菌肽mRNA水平可能有助于提高奥尼和奥利亚罗非鱼的抗低温应激能力,增加低温时的成活率。本研究通过分析4种品系罗非鱼不同驯化阶段血清皮质醇和免疫相关指标,探讨不同品系罗非鱼在低温驯化过程中的免疫保护机制,旨在为下一步抗低温新品系罗非鱼的选育提供理论依据。

关键词：罗非鱼低温驯化皮质醇免疫指标死亡率

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铜对刀鲚幼鱼的急性毒性及对肝抗氧化酶活性与组织结构的影响

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中国水产科学 2014年第1期21卷 161-168页

作者：聂志娟徐钢春张守领徐跑顾若波中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

采用静水生物测试法研究铜(Cu2+)对刀鲚(Coilia nasus)幼鱼的急性毒性并进行安全性评价。根据预实验结果,设定0.3、0.54、0.96、1.68和3 mg/L 5个CuSO4浓度梯度进行急性暴露实验,以肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性为指... 详细信息

采用静水生物测试法研究铜(Cu2+)对刀鲚(Coilia nasus)幼鱼的急性毒性并进行安全性评价。根据预实验结果,设定0.3、0.54、0.96、1.68和3 mg/L 5个CuSO4浓度梯度进行急性暴露实验,以肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性为指标,并通过观察肝、鳃组织病理变化来研究Cu2+污染对刀鲚幼鱼的毒性效应。结果表明,刀鲚幼鱼随Cu2+浓度升高毒性效应逐渐增强,24、48、72和96 h LC50分别为1.087、1.062、1.042和0.967 mg/L,安全质量浓度为0.009 67 mg/L。刀鲚幼鱼暴露24 h之后,各Cu2+浓度处理组(0.1,0.2,0.3 mg/L)CAT活性、SOD活性显著提高(P<0.05);暴露48 h后,各组CAT活性下降,CAT活性均低于对照组,下降幅度与Cu2+质量浓度呈正相关,SOD活性提高显著(P<0.05);暴露72 h后,SOD活性有所下降,SOD活性均低于对照组(P<0.05)。1.68 mg/L和3mg/L的Cu2+浓度对刀鲚幼鱼的鳃和肝都造成严重的损伤,暴露在高浓度组(3 mg/L)中的刀鲚,其鳃上皮细胞肿大变性,鳃小片几乎全部脱落;肝呈黄色,超微结构发现肝细胞明显增大,线粒体空泡化,胞质中出现空泡和大量脂滴,表明Cu2+可诱发刀鲚出现脂肪肝综合征。SOD、CAT活性变化以及鳃、肝结构变化都反映刀鲚幼鱼受伤害的程度,可用作安全性风险评价的参考依据。

关键词：刀鲚幼鱼铜安全浓度抗氧化酶组织病理

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刀鲚MSTN基因的克隆及其组织表达

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中国水产科学 2014年第4期21卷 684-692页

作者：杜富宽聂志娟徐钢春徐跑顾若波中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,... 详细信息

运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,编码374氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚MSTN具有MSTN家族的典型结构域,包含Pfam和TGFB结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达。结果显示,MSTN基因在健康刀鲚肌肉和脑中呈高表达,鳃、肝、脾、肠、肾和头肾中微量表达。根据以上研究结果认为,刀鲚MSTN基因的序列具有高度保守性,组织表达模式相似,推测该基因的功能也具有高度保守性。本研究旨为MSTN基因在刀鲚后续育种工作提供基础依据。

关键词：刀鲚 MSTN基因克隆组织表达

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水飞蓟素对建鲤肝细胞DNA损伤的保护作用及相关细胞因子的影响

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水产学报 2014年第12期38卷 2039-2048页

作者：曹丽萍杜金梁丁炜东贾睿殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室中国水产科学研究院淡水渔业研究中心鱼类免疫药理学国际联合实验室

为了评价水飞蓟素对建鲤肝组织损伤的保护作用,探索其可能的保肝机制,本研究用含水飞蓟素(0.1、0.5和1.0 g/kg)的饲料饲喂建鲤60 d,再腹腔注射30%四氯化碳(CCl4)植物油混合液,损伤72 h后采集肝组织,分别研究肝指数、肝细胞DNA损伤、肝... 详细信息

为了评价水飞蓟素对建鲤肝组织损伤的保护作用,探索其可能的保肝机制,本研究用含水飞蓟素(0.1、0.5和1.0 g/kg)的饲料饲喂建鲤60 d,再腹腔注射30%四氯化碳(CCl4)植物油混合液,损伤72 h后采集肝组织,分别研究肝指数、肝细胞DNA损伤、肝组织病理切片、核转录因子NF-κB/C-Rel及细胞因子i NOS和IL-1β的mRNA表达量的变化。结果显示,0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4导致的建鲤肝指数增大,同时能有效减少肝细胞DNA断片的产生,对肝细胞彗星的慧尾长、尾部DNA百分含量、尾矩及Olive尾矩等损伤指标均有显著改善作用;水飞蓟素能明显减轻CCl4作用导致的肝组织广泛性空泡变性、细胞轮廓不清、核固缩和核溶解等组织学病变;0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4诱导的NF-κB/C-Rel和i NOS表达量的增加,而低、中、高浓度的药物均能显著下调IL-1β的表达量;随着水飞蓟素浓度的增大,对肝指数、肝细胞DNA损伤、病理切片及细胞因子的mRNA表达的影响均表现出剂量效应。结果表明,水飞蓟素能有效改善肝细胞DNA的损伤程度,其保肝作用可能与抑制NF-κB活化及下调其下游细胞因子i NOS和IL-1β的表达有关。

关键词：建鲤水飞蓟素四氯化碳核转录因子免疫因子

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基于蜂群优化多核支持向量机的淡水鱼种类识别

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农业工程学报 2014年第16期30卷 312-319页

作者：吴一全殷骏戴一冕袁永明南京航空航天大学电子信息工程学院南京210016 农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室中国水产科学研究院淡水渔业研究中心无锡214081 农业部渔业装备与工程技术重点实验室上海200092

为了准确地进行淡水鱼种类自动识别,利用计算机视觉技术,提出了一种基于Krawtchouk矩、灰度共生矩阵、蜂群优化多核最小二乘支持向量机(least squares support vector machine,LS-SVM)的识别方法。首先获取淡水鱼样本的灰度图像,计算淡... 详细信息

为了准确地进行淡水鱼种类自动识别,利用计算机视觉技术,提出了一种基于Krawtchouk矩、灰度共生矩阵、蜂群优化多核最小二乘支持向量机(least squares support vector machine,LS-SVM)的识别方法。首先获取淡水鱼样本的灰度图像,计算淡水鱼鱼体的长宽比、鱼头鱼尾的Krawtchouk矩不变量形状特征,求得鱼身的灰度共生矩阵纹理特征,将上述形状与纹理特征组合成高维特征向量,并输入到多核LS-SVM,通过人工蜂群(artificial bee colony,ABC)算法对多核LS-SVM中的待定参数进行寻优,ABC算法中的适应度函数为测试样本的识别精度;最后输出识别精度达到最高时的最优参数。利用该方法对鳊鱼、鳙鱼、鲫鱼、草鱼、青鱼5种淡水鱼进行了分类识别,对鳊鱼、鳙鱼、鲫鱼、草鱼4种鱼识别时,各类鱼的识别精度均达到95.83%以上,对鳊鱼、鳙鱼、鲫鱼、青鱼4种鱼识别时,各类鱼的识别精度均达到91.67%以上,对鳊鱼、鳙鱼、鲫鱼、草鱼和青鱼5种鱼识别时,各类鱼的识别精度均达到83.33%以上;与近年来提出的淡水鱼识别方法、BP(back propagation)神经网络方法、单核LS-SVM方法相比,该方法的识别精度更高,从而可快速准确地识别淡水鱼的种类,提高水产养殖的自动化水平。

关键词：计算机视觉图像处理鱼淡水鱼识别灰度共生矩阵最小二乘支持向量机人工蜂群优化

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