检索结果-内蒙古大学图书馆

动物学杂志 2014年第1期49卷 51-56页

作者：唐永凯李建林李红霞俞菊华中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081

使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点,设计引物扩增建鲤(Cyprinus carpio ***)leptin基因(jlLEP-A1,jlLEP-B)不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a(+)和pGex-4T-1原核表达载体,构建重组质粒,测序验证插入位点的正确性。... 详细信息

使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点,设计引物扩增建鲤(Cyprinus carpio ***)leptin基因(jlLEP-A1,jlLEP-B)不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a(+)和pGex-4T-1原核表达载体,构建重组质粒,测序验证插入位点的正确性。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白pET-32a(+)/jlLEP-A1,pET-32a(+)/jlLEP-B和pGex-4T-1/jlLEP-A1,pGex-4T-1/jlLEP-B。结果表明,在37℃和1 mmol/L IPTG的条件下诱导5 h,重组蛋白表达量最大。SDS-PAGE电泳显示重组蛋白主要以可溶蛋白形式存在。这一结果为后续的建鲤leptin基因功能研究奠定了基础。

关键词：建鲤 Leptin 载体原核表达

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建鲤ODC1基因型与增重的相关性分析

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水生生物学报 2014年第3期38卷 414-421页

作者：李红霞李建林唐永凯俞菊华中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081

构建了建鲤(Cyprinus carpio ***)鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)jlODC1a基因上6个和jlODC1b基因上4个SNP位点的PCR-RFLP方法,检测了这10个位点在12个家系约900尾建鲤选育群体中的基因型,各位点的基因型频率存在差异,最小... 详细信息

构建了建鲤(Cyprinus carpio ***)鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)jlODC1a基因上6个和jlODC1b基因上4个SNP位点的PCR-RFLP方法,检测了这10个位点在12个家系约900尾建鲤选育群体中的基因型,各位点的基因型频率存在差异,最小等位基因频率(MAF)为0.14—0.48。各位点不同基因型与增重相关分析结果,其中7个SNPs与建鲤增重显性相关的位点,ODC1s基因上与雌鱼增重相关的SNP位点(7个)较雄鱼(4个)多。标记富集结果表明富集与建鲤增重相关的优势基因型的SNP个数越多的个体增重速度越快SNP个数越多的个体增重速度越快,富集4个的平均增重显著快于富集0—3的个体增重,且比0标记的快约14%,这反映出生长为数量性状。进一步对所检测位点进行双倍型分析,结果显示具有四个优势基因型且全部杂合优势基因型的4567(XXXXXXACCTCTCT)组的增重最快,比0优势基因型的增重快达26.6%,可以考虑用于今后的快增长建鲤的选育计划中。此外,双倍型分析结果还表明,不同位点之间可能存在或颉抗或协同的互作,如1和4之间存在拮抗关系,因此在今后的选育计划中,在考虑标记富集的情况下还应考虑标记之间的关系。宜在选择互为协同作用优势基因型的前提下,富集尽可能多的SNP标记。

关键词：建鲤鸟氨酸脱羧酶基因型 SNP-增重相关分析

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青鱼病原嗜水气单胞菌分离鉴定、毒力因子检测及药敏试验

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生态学杂志 2013年第12期32卷 3236-3242页

作者：梁利国谢骏中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

2011年8月江苏常州市武进区前黄镇某养殖场养殖的青鱼出现大量死亡,症状主要表现为病鱼口腔、头部、眼眶、鳃盖边缘、鳍条基部及鱼体尾柄处充血,肛门红肿。解剖后,可见肠道内无食物,并充血发红,腹腔内有的有淡黄色积液,肝胰脏呈紫红色... 详细信息

2011年8月江苏常州市武进区前黄镇某养殖场养殖的青鱼出现大量死亡,症状主要表现为病鱼口腔、头部、眼眶、鳃盖边缘、鳍条基部及鱼体尾柄处充血,肛门红肿。解剖后,可见肠道内无食物,并充血发红,腹腔内有的有淡黄色积液,肝胰脏呈紫红色、胆囊肿大。从患病青鱼肝脏、血液中分离到大量优势生长的细菌。人工感染试验证实分离菌(WJ110801-1)对健康青鱼具有很强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等表型生物学特征检验、毒力因子检测、胞外酶分析及药敏试验,同时应用分子生物学方法测定了代表菌株的16S rRNA基因序列。结果显示,病原菌进化树与嗜水气单胞菌同源性最高,在99%以上;结合分离菌的表型及分子生物学分析,判定该菌为气单胞菌属(Aeromonas)的嗜水气单胞菌(***)。气溶素Aer和不耐热性细胞肠毒素alt是嗜水气单胞菌主要的毒力相关因子,利用设计的两对特异性引物对进行Aer和alt基因的PCR扩增,分离菌可以扩增出大小分别为280 bp的和250 bp的基因片段,表明本次分离的病原嗜水气单胞菌具有气溶素和细胞肠毒素毒力因子;胞外酶分析显示,分离菌具有淀粉酶、DNA酶、脲酶、明胶酶活性。分离菌进行药敏试验结果表明,供试37种抗生素中,氨曲南、氟苯尼考、庆大霉素等12种抗生素抑菌效果显著。文章报道了病原嗜水气单胞菌引起常州青鱼大量死亡,并针对病原做了详细的研究,对青鱼的疾病防控和健康养殖具有重要的参考意义。

关键词：青鱼嗜水气单胞菌 16S rRNA Aer alt 药敏试验

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虎杖提取物对CCl_4诱导建鲤损伤肝细胞生化指标的影响

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2013年第4期39卷 413-418页

作者：杜金梁贾睿曹丽萍殷国俊中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

为探明虎杖对鱼类损伤肝细胞是否具有修复作用,分离建鲤肝细胞,设6个试验组:I组(空白对照组);II组(CCl4模型组);III组(800μg/mL虎杖提取物对照组);IV组(造模前200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组);V组(造模后200、400、800μg/mL虎... 详细信息

为探明虎杖对鱼类损伤肝细胞是否具有修复作用,分离建鲤肝细胞,设6个试验组:I组(空白对照组);II组(CCl4模型组);III组(800μg/mL虎杖提取物对照组);IV组(造模前200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组);V组(造模后200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组);VI组(造模前、后200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组)。各组细胞经处理后继续培养12 h,收集肝细胞培养液,检测上清培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性,丙二醛(MDA)含量及肝细胞的存活率。结果表明:III组肝细胞培养液中GOT、GPT、LDH、SOD、MDA值及细胞存活率与I组相比无明显变化(P>0.05),说明800μg/mL虎杖提取物没有细胞毒性,可用于后续试验;与II组相比,IV组中800μg/mL虎杖提取物处理组的效果优于其他2个浓度组,可以极显著降低培养液中GOT值(P<0.01),显著降低培养液中GPT、LDH值(P<0.05),显著提高肝细胞的存活率(P<0.05),而MDA含量和SOD值差异无统计学意义(P>0.05);与II组相比,V组中400μg/mL虎杖提取物效果优于其他2个浓度组,可以极显著降低培养液中GOT值(P<0.01),显著降低培养液中LDH值(P<0.05),显著提高肝细胞的存活率(P<0.05),但GPT值、MDA含量、SOD的差异无统计学意义(P>0.05);与II组相比,VI组中800μg/mL虎杖提取物效果优于其他2个浓度组,能极显著降低培养液中GOT、GPT、LDH在肝细胞中的释放(P<0.01),显著降低培养液中MDA含量(P<0.05),显著提高肝细胞的存活率(P<0.05)。综合以上结果,以VI组中800μg/mL的虎杖提取物效果最好,能有效抑制CCl4所造成的肝细胞损伤,其机制可能与其抗氧化作用有关。

关键词：建鲤虎杖提取物肝细胞四氯化碳

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越冬期体色变异红罗非鱼差异表达miRNA的鉴定

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水产学报 2023年第4期47卷 16-26页

作者：王兰梅朱文彬傅建军罗明坤董在杰中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室南京农业大学无锡渔业学院

为了探究红罗非鱼越冬期体色变异的分子机制，实验构建了其2种体色(正常粉红体色和变黑体色)皮肤组织的小RNA文库，每组4个重复，组装后平均每组分别获得12 190 544和11 891 890条过滤后的读长(clean reads)，获得miRNA成熟序列669个，... 详细信息

为了探究红罗非鱼越冬期体色变异的分子机制，实验构建了其2种体色(正常粉红体色和变黑体色)皮肤组织的小RNA文库，每组4个重复，组装后平均每组分别获得12 190 544和11 891 890条过滤后的读长(clean reads)，获得miRNA成熟序列669个，其中337个是已知的miRNAs。鉴定出越冬期变黑体色相对于正常粉红体色鱼的差异表达miRNAs 26个，其中上调11个，下调15个，且12个为已知的miRNAs，可能在红罗非鱼越冬期体色变异过程中发挥重要作用。富集分析发现了大量代谢和体色调控相关的通路。研究表明，红罗非鱼越冬期的体色变异可能是色素细胞的增殖和迁移形成的，与代谢相关的调控通路在其中发挥重要作用，为解析红罗非鱼越冬期体色变异的机制奠定了基础。

关键词：红罗非鱼越冬体色变黑 microRNA (miRNA)

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甲基睾丸酮在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肌肉中的代谢和消除规律研究

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海洋与湖沼 2012年第5期43卷 1016-1022页

作者：祝璟琳邹芝英杨弘李大宇肖炜卫程亮中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081

在实验水温(28±2)℃条件下,以60mg/kg单剂量甲基睾丸酮对尼罗罗非鱼混饲口灌给药后,采用超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定尼罗罗非鱼肌肉中的药物水平,研究甲基睾丸酮在尼罗罗非鱼肌肉中的代谢及消除规律。结果表明... 详细信息

在实验水温(28±2)℃条件下,以60mg/kg单剂量甲基睾丸酮对尼罗罗非鱼混饲口灌给药后,采用超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定尼罗罗非鱼肌肉中的药物水平,研究甲基睾丸酮在尼罗罗非鱼肌肉中的代谢及消除规律。结果表明,肌肉中药物浓度时间数据符合一级吸收二室开放模型,主要药代动力学参数达峰时间T(peak)为3.04h,质量浓度C(max)为33.331ng/g,消除半衰期T(1/2)β为23.073h。肌肉中甲基睾丸酮浓度24h内呈指数型下降,具有较高的消除速率,其后消除得较缓慢,消除方程符合C=46.18e0.101t。29d后罗非鱼肌肉中甲基睾丸酮水平在美国FDA的检测限0.8ng/g以下,给药120d后肌肉中检测不到甲基睾丸酮残留。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS MS) 尼罗罗非鱼甲基睾丸酮代谢消除

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铜对刀鲚幼鱼的急性毒性及对肝抗氧化酶活性与组织结构的影响

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中国水产科学 2014年第1期21卷 161-168页

作者：聂志娟徐钢春张守领徐跑顾若波中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

采用静水生物测试法研究铜(Cu2+)对刀鲚(Coilia nasus)幼鱼的急性毒性并进行安全性评价。根据预实验结果,设定0.3、0.54、0.96、1.68和3 mg/L 5个CuSO4浓度梯度进行急性暴露实验,以肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性为指... 详细信息

采用静水生物测试法研究铜(Cu2+)对刀鲚(Coilia nasus)幼鱼的急性毒性并进行安全性评价。根据预实验结果,设定0.3、0.54、0.96、1.68和3 mg/L 5个CuSO4浓度梯度进行急性暴露实验,以肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性为指标,并通过观察肝、鳃组织病理变化来研究Cu2+污染对刀鲚幼鱼的毒性效应。结果表明,刀鲚幼鱼随Cu2+浓度升高毒性效应逐渐增强,24、48、72和96 h LC50分别为1.087、1.062、1.042和0.967 mg/L,安全质量浓度为0.009 67 mg/L。刀鲚幼鱼暴露24 h之后,各Cu2+浓度处理组(0.1,0.2,0.3 mg/L)CAT活性、SOD活性显著提高(P<0.05);暴露48 h后,各组CAT活性下降,CAT活性均低于对照组,下降幅度与Cu2+质量浓度呈正相关,SOD活性提高显著(P<0.05);暴露72 h后,SOD活性有所下降,SOD活性均低于对照组(P<0.05)。1.68 mg/L和3mg/L的Cu2+浓度对刀鲚幼鱼的鳃和肝都造成严重的损伤,暴露在高浓度组(3 mg/L)中的刀鲚,其鳃上皮细胞肿大变性,鳃小片几乎全部脱落;肝呈黄色,超微结构发现肝细胞明显增大,线粒体空泡化,胞质中出现空泡和大量脂滴,表明Cu2+可诱发刀鲚出现脂肪肝综合征。SOD、CAT活性变化以及鳃、肝结构变化都反映刀鲚幼鱼受伤害的程度,可用作安全性风险评价的参考依据。

关键词：刀鲚幼鱼铜安全浓度抗氧化酶组织病理

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刀鲚MSTN基因的克隆及其组织表达

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中国水产科学 2014年第4期21卷 684-692页

作者：杜富宽聂志娟徐钢春徐跑顾若波中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,... 详细信息

运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,编码374氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚MSTN具有MSTN家族的典型结构域,包含Pfam和TGFB结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达。结果显示,MSTN基因在健康刀鲚肌肉和脑中呈高表达,鳃、肝、脾、肠、肾和头肾中微量表达。根据以上研究结果认为,刀鲚MSTN基因的序列具有高度保守性,组织表达模式相似,推测该基因的功能也具有高度保守性。本研究旨为MSTN基因在刀鲚后续育种工作提供基础依据。

关键词：刀鲚 MSTN基因克隆组织表达

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中国鲤育种的主要方法、遗传解析及展望

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水产学报 2023年第1期47卷 39-55页

作者：董在杰罗明坤中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室

水产种业是水产养殖业发展的基础，是渔业战略性、基础性核心产业，也是保障未来养殖业绿色、健康发展的核心竞争力。随着水产业全球化、市场化的发展，我国种业正面临着前所未有的机遇与挑战。特别是随着生物技术的快速发展，水产育种... 详细信息

水产种业是水产养殖业发展的基础，是渔业战略性、基础性核心产业，也是保障未来养殖业绿色、健康发展的核心竞争力。随着水产业全球化、市场化的发展，我国种业正面临着前所未有的机遇与挑战。特别是随着生物技术的快速发展，水产育种也由传统的选择育种和杂交育种，发展至细胞工程育种、分子标记辅助育种、全基因组选择育种、分子设计育种和基因组编辑等精准设计育种。水产动物重要经济性状的基础研究及其遗传改良技术的创建驱动着我国水产种业的蓬勃发展，截止2022年，通过全国水产原种和良种审定委员会审定并由农业农村部公告的水产新品种就有266个，其中鲤新品种数量最多，为31个，表明鲤育种工作卓有成效。本文重点回顾了我国鲤的种质和基因组资源现状，鲤的主要品种及其育种方法；简要介绍了鲤生长、抗病、体色、饲料转化率等经济性状关联的遗传研究进展，并由此提出了新时代背景下鲤种业的发展方向和措施建议，以期为我国鱼类育种提供借鉴。

关键词：鲤育种种质资源遗传解析展望

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鲤脂蛋白脂肪酶基因特性、表达分布、重组蛋白获得及酶活性比较

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水产学报 2023年第10期47卷 210-226页

作者：王钰婧冯文荣徐逾鑫李建林苏胜彦俞菊华唐永凯南京农业大学无锡渔业学院中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室

为研究鲤脂蛋白脂肪酶(Cc LPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性，实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征；通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析；采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白... 详细信息

为研究鲤脂蛋白脂肪酶(Cc LPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性，实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征；通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析；采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白，并使用对硝基苯酚法测定各重组蛋白的酶活性。结果显示，鲤基因组中挖掘到5个CcLPLs基因(CcLPLA1a、CcLPLA1b、CcLPLA2a、CcLPLA2b*和CcLPLBa)，经验证，CcLPLA2b*是假基因，共线性分析显示，鱼类特有基因组加倍过程中出现基因丢失的现象，而鲤特有的基因组加倍致使鲤存在5个CcLPLs。CcLPLA1a和CcLPLA1b核苷酸序列和氨基酸序列相同，同源性分析显示，CcLPLBa与CcLPLA1s的同源性为64%，与CcLPLA2a同源性为50.8%。qPCR结果显示，CcLPLs的表达量在肝脏、心脏、脂肪、肌肉、脑、肠道和脾脏中依次降低，在各个组织中，各基因表达量从高到底依次为CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa。鲤正常投喂、饥饿及再投喂状态下CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏、肌肉和脂肪组织中的表达结果显示，饥饿状态下，CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏中的表达量高于正常投喂组，而在肌肉和脂肪中低于正常投喂组；再投喂后，CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏中表达水平降至正常投喂组，而在肌肉和脂肪中表现为先升高后降低的趋势。通过构建具有促溶效果的原核表达载体，分别获得了原核表达重组蛋白Skp-CcLPLs和SlyDCcLPLs，酶活性测定结果显示，重组蛋白其脂蛋白脂肪酶活性从高到低依次为CcLPLA1a、CcLPLBa和CcLPLA2a，最适pH均为8.0，发挥最大活性的NaCl浓度为0.6 mol/L。本研究探讨了鲤CcLPLs同源基因在进化中的表现，对CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa的时空表达进行了分析，测定了投喂和饥饿对CcLPLA1s、CcLPLA2a表达的影响，揭示鲤饥饿胁迫下脂质代谢及响应对策，为控制鲤脂肪含量提供靶点，成功进行重组蛋白的原核表达并测定了其酶活性，为鱼类脂蛋白脂肪酶研究提供参考。

关键词：鲤脂蛋白脂肪酶基因表达原核表达脂蛋白脂肪酶活性

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