检索结果-内蒙古大学图书馆

南方水产科学 2021年第6期17卷 66-73页

作者：潘厚军康佳磊张德锋常藕琴任燕王亚军蒋俊贤王琳石存斌中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380

利用Hoechst 33258荧光染色、活细胞计数、CCK-8细胞活力测定、抗氧化酶活力测定等技术,研究了青蒿素、大黄素、芦荟大黄素、小檗碱(又名黄连素)等4种中草药单体对嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)生长和凋亡的影响,为应用嗜热四膜... 详细信息

利用Hoechst 33258荧光染色、活细胞计数、CCK-8细胞活力测定、抗氧化酶活力测定等技术,研究了青蒿素、大黄素、芦荟大黄素、小檗碱(又名黄连素)等4种中草药单体对嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)生长和凋亡的影响,为应用嗜热四膜虫筛选抗鱼寄生虫中草药提供参考。结果表明,采用Hoechst荧光染色,4种单体在高浓度(20~200 mg·L^(−1))作用下均可使嗜热四膜虫凋亡,显著着色发亮。4种单体对嗜热四膜虫的半抑制浓度(IC50)和95%置信区间(95%confidence interval,95%CI),用细胞计数法测定依次为21.23(16.71~28.23)mg·L^(−1)、3.77(1.91~5.54)mg·L^(−1)、1.70(0.18~3.82)mg·L^(−1)和44.56(29.82~98.66)mg·L^(−1),CCK-8细胞活力测定法依次为20.03(13.02~28.45)mg·L^(−1)、6.07(4.39~7.65)mg·L^(−1)、3.67(2.61~4.72)mg·L^(−1)和107.39(66.78~267.17)mg·L^(−1),CCK-8法与细胞计数法所呈现的趋势较为一致。在单体质量浓度为1.25~50.0 mg·L^(−1),随着药物浓度的增加,过氧化氢酶(CAT)活力有升高趋势,而丙二醛(MDA)呈下降趋势,超氧化物歧化酶(SOD)活力先升高后降低。上述结果表明,4种中草药单体对嗜热四膜虫的生长和凋亡有剂量效应关系,凋亡的产生可能与细胞氧化应激状态改变有关。

关键词：中草药单体嗜热四膜虫细胞凋亡半抑制浓度氧化应激

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一株新型大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

引用

水产学报 2021年第9期45卷 1584-1591页

作者：罗明菊李宁求林强牛银杰刘礼辉梁红茹罗霞付小哲上海海洋大学水产与生命学院中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

为有效预防大口黑鲈双RNA病毒（largemouth bass birnavirus, LBBV）,实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方... 详细信息

为有效预防大口黑鲈双RNA病毒（largemouth bass birnavirus, LBBV）,实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测。结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10-12mol,最佳退火温度分别为64.1℃和61.5℃,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为10～2 PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10 000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60%,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21%;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控。

关键词：大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR 检测方法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鱼源气单胞菌的毒力基因检测、分型及致病力

引用

水产学报 2021年第3期45卷 462-471页

作者：刘小芳任燕张德锋巩华石存斌常藕琴潘厚军中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室农业农村部渔用药物创制重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为调查鱼源气单胞菌毒力基因与其致病力的相关性,以2009—2018年从不同患病鱼分离的173株气单胞菌为研究对象,通过检测毒力相关基因、测定溶血活性、腹腔注射感染异育银鲫等方法开展评价。通过管家基因gyrB分子鉴定结果显示,173株气单... 详细信息

为调查鱼源气单胞菌毒力基因与其致病力的相关性,以2009—2018年从不同患病鱼分离的173株气单胞菌为研究对象,通过检测毒力相关基因、测定溶血活性、腹腔注射感染异育银鲫等方法开展评价。通过管家基因gyrB分子鉴定结果显示,173株气单胞菌中维氏气单胞菌(119/173,68.9%)和嗜水气单胞菌(50/173,28.9%)是主要流行的菌株。10个毒力基因aer(162/173,93.64%)、act(131/173,75.72%)、ast(55/173,31.79%)、alt(58/173,33.53%)、lip(152/173,87.86%)、exu(154/173,89.02%)、fla(143/173,82.66%)、gcaT(148/173, 85.55%)、 eprCAI(41/173, 23.70%)和ahyB(51/173, 29.48%)普遍存在于173株气单胞菌中。依据检测到的毒力基因数量从多到少分布情况,这些菌株可分为7大类(Ⅰ～Ⅶ)53个毒力基因型。大部分嗜水气单胞菌检测到8～10个毒力基因,主要分布于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类基因型;维氏气单胞菌的eprCAI、ahyB、 ast和alt等4个毒力基因检测率低,主要分布于Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ类基因型。大部分气单胞菌(94.22%,163/173)具有溶血活性。代表性毒力基因型的38株维氏气单胞菌和20株嗜水气单胞菌腹腔注射异育银鲫攻毒结果显示,3.0×106 CFU/尾的剂量下,3株维氏气单胞菌使鲫死亡率达80%～100%,16株嗜水气单胞菌使鲫死亡率达90%～100%。研究表明,维氏气单胞菌是目前最主要流行的气单胞菌,但其检测到的毒力基因普遍少于嗜水气单胞菌,且对异育银鲫的致病力普遍弱于嗜水气单胞菌。本研究能够为气单胞菌败血症的流行病学调查和疫苗研究提供理论依据。

关键词：气单胞菌毒力基因致病性患病鱼

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大口黑鲈蛙病毒分子流行病学及组织病理分析

引用

水产学报 2022年第6期46卷 1063-1073页

作者：杨展展林强付小哲罗霞刘礼辉梁红茹牛银杰左绍志张晓婷李宁求上海海洋大学水产与生命学院中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

为探讨大口黑鲈蛙病毒(LMBV)的分子流行规律及在感染后的组织病理变化，实验对2019—2021年采集的723份患病大口黑鲈样品进行荧光定量PCR (qPCR)检测。结果显示，LMBV的阳性率为63.62%，挑选阳性样品接种鳜脑细胞(Chinese perch brain c... 详细信息

为探讨大口黑鲈蛙病毒(LMBV)的分子流行规律及在感染后的组织病理变化，实验对2019—2021年采集的723份患病大口黑鲈样品进行荧光定量PCR (qPCR)检测。结果显示，LMBV的阳性率为63.62%，挑选阳性样品接种鳜脑细胞(Chinese perch brain cells,CPB)，共获得93株LMBV。通过对分离株MCP、ATP酶、DNA聚合酶和甲基转移酶基因进行PCR扩增与测序分析，发现上述基因在LMBV分离株中均保守，其中MCP、ATP酶基因一致性均为100.0%、甲基转移酶基因一致性为99.7%～100.0%、DNA聚合酶基因一致性为99.8%～100.0%。选取1株LMBV毒株感染健康大口黑鲈，采用qPCR方法对不同组织中的病毒载量进行检测，结果显示，大口黑鲈蛙病毒在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃、肠和脑等组织中均有分布，人工感染LMBV后的前5天病毒载量逐步升高；感染后第5天，心脏中病毒载量最高(9.5×10～5个/mg拷贝)，脑组织中病毒载量最低(2.9×10～2个/mg拷贝)。组织病理结果表明，LMBV可导致大口黑鲈多种组织坏死，其中肝脏、肾脏和心脏病变较为严重，典型病理特征包括肝细胞排列紊乱、肝窦扩张、核质疏散；肾组织细胞疏散、巨噬细胞破裂；心室外膜纤维坏死等。实验结果可为大口黑鲈蛙病毒病防控提供参考。

关键词：大口黑鲈蛙病毒分子流行病学组织病理荧光定量PCR (qPCR)

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

草鱼肾中性粒细胞的分离鉴定与活性检测

引用

中国水产科学 2021年第12期28卷 1515-1522页

作者：常藕琴霍礼霞罗满林石存斌张德峰潘厚军任燕中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380 华南农业大学广东广州510225

分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏... 详细信息

分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红G(KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态,使用多功能酶标仪检测经MPA刺激的细胞活性,台盼蓝染色法和CCK-8检测细胞存活率。结果显示,获得的细胞大小均一,细胞核圆形或肾形,胞质有A、B型颗粒,表面有皱褶,具有中性粒细胞的形态特征;细胞纯度达(99.3±0.53)%,细胞活力达(97.70±0.76)%,在体外培养24h内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%;在PMA刺激下检测到细胞表达MPO、ROS、NO和NETs的量显著提高(P<0.05),与刺激时间呈正相关。结果证实,分离的细胞具有很好的活力,具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法,细胞具有很好的活力,可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。

关键词：草鱼中性粒细胞分离鉴定活性检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鳜鱼传染性脾肾坏死病和弹状病毒病二联灭活疫苗毒种及种子批的研究

引用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第1期50卷 1-9页

作者：罗霞付小哲林强刘礼辉牛银杰梁红茹李宁求中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380

【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10)后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对... 详细信息

【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10)后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力。PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因、RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性。对F1、F5和F10代ISKNV、SCRV毒种进行细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性。分别将F1、F5和F10代ISKNV、SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率(RPS)。将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期。【结果】各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为10^(8.58)~10^(8.875) TCID_(50)/mL,ISKNV滴度为10^(7.38)~10^(7.625) TCID_(50)/mL。F1、F5和F10代ISKNV按10^(4) TCID_(50)/mL、SCRV按10^(6.5) TCID_(50)/mL对鳜鱼攻毒(每尾0.1 mL),致死率均超过90%。ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1300 bp的MCP基因和1500 bp的G基因,特异性良好。ISKNV、SCRV毒种无细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染。各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92%以上,SCRV可达84%以上;湿毒-80℃保存,保存期为36个月。【结论】10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验。

关键词：鳜鱼病毒病传染性脾肾坏死病毒(ISKNV) 弹状病毒(SCRV) 毒种库种子批二联灭活疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鳜SIRT3蛋白在传染性脾肾坏死病毒感染中的作用

引用

中国水产科学 2021年第5期28卷 550-560页

作者：李科瑾付小哲林强刘礼辉牛银杰梁红茹罗霞李宁求上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380

沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(silent mating type information regulation 2 homolog 3,SIRT3)是一种去乙酰化酶,可调节线粒体氧化代谢。为探讨鳜(Siniperca chuatsi)SIRT3在传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)感染中的作用,本研究克隆分析了鳜SIRT3基因,采用qRT-PCR和western blotting方法检测了病毒感染后SIRT3基因的表达,并探讨了SIRT3对细胞代谢酶基因的表达和病毒增殖的影响。结果显示,鳜SIRT3基因的开放阅读框全长1350 bp,编码449个氨基酸,在鳜各组织均表达,其中后肾中表达量最高,脾脏中表达量较低;ISKNV感染鳜脑细胞系和鱼体后,SIRT3表达量均显著升高;使用SIRT3抑制剂3-TYP(10μmol/L)和siRNA处理细胞后,谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)和谷氨酸脱氢酶(glutamatedehy drogenase,GDH)的表达量以及ISKNV产量均显著降低;使用SIRT3激动剂honokiol(7μmol/L)处理细胞后,代谢酶表达量和ISKNV产量均显著升高。结果表明,ISKNV感染可通过SIRT3诱导宿主细胞谷氨酰胺代谢重编程,进而促进自身增殖。

关键词：鳜沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(SIRT3) 传染性脾肾坏死病毒(ISKNV) 谷氨酰胺代谢

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鳜弹状病毒调控谷氨酰胺还原性代谢途径促进自身增殖

引用

中国水产科学 2019年第5期26卷 993-1003页

作者：郭茜茜付小哲梁红茹林强刘礼辉牛银杰李宁求中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为探究鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)复制增殖与谷氨酰胺还原性代谢(reductive glutamine metabolism,RGM)途径的相互作用关系,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cells,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒拷贝数和RGM途径关键酶mRNA表达水平变化,并通过蛋白免疫印迹方法检测RGM途径关键酶蛋白表达水平变化。结果发现,当培养基缺失谷氨酰胺时SCRV拷贝数降低了99.5%,表明谷氨酰胺是SCRV增殖所必需;而SCRV感染上调CPB细胞RGM途径关键酶的表达,其中异柠檬酸脱氢酶2(isocitrate dehydrogenase 2,IDH2)上调倍数最大,表明SCRV感染上调了细胞RGM途径中关键酶基因的表达;同时,抑制细胞RGM途径关键酶的表达导致SCRV病毒产量显著下降,表明RGM途径有利于SCRV复制增殖;进一步敲降细胞IDH2基因表达可显著抑制SCRV N蛋白表达,而过表达细胞IDH2基因可显著促进SCRV N蛋白表达,表明IDH2在病毒增殖中具有重要作用。综上所述,SCRV感染可调控CPB细胞RGM通路以满足其自身增殖,其结果可为阐明鳜弹状病毒病致病机制和抗病毒治疗策略提供新的思路。

关键词：鳜脑细胞系鳜弹状病毒谷氨酰胺还原性代谢途径

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

贝莱斯芽孢杆菌的分类、拮抗功能及其应用研究进展

引用

微生物学通报 2020年第11期47卷 3634-3649页

作者：张德锋高艳侠王亚军刘春石存斌中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东广州510380 中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380

芽孢杆菌(Bacillusspp.)作为生防细菌,已广泛应用于农作物、畜、禽、水产动物的病害防控,也是当今微生物生态防控的研究热点。贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是芽孢杆菌属的一个新种,因其能够产生多种次级代谢产物,并且具有广谱... 详细信息

芽孢杆菌(Bacillusspp.)作为生防细菌,已广泛应用于农作物、畜、禽、水产动物的病害防控,也是当今微生物生态防控的研究热点。贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是芽孢杆菌属的一个新种,因其能够产生多种次级代谢产物,并且具有广谱抑菌活性和促生长作用,被广泛应用于动植物病害的生物防治。本文从贝莱斯芽孢杆菌的分类地位、鉴定方法、抑菌物质、拮抗功能基因、生防作用机制及其应用等方面进行了综述,对贝莱斯芽孢杆菌在工业、农业上的应用进行展望,并对存在的问题进行了探讨,以期为贝莱斯芽孢杆菌的深入研究和应用提供参考。

关键词：贝莱斯芽孢杆菌鉴定抑菌物质抑菌活性生物防治

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

双氢青蒿素对嗜热四膜虫的毒性效应

引用

水生生物学报 2022年第7期46卷 1038-1044页

作者：潘厚军邓美玲古欣婷郑巧银刘雨果中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广州510380 广东医科大学公共卫生学院东莞523808

以嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)为试验对象,双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)以终浓度为0(对照组)、40、80、160和320μmol/L分别加入到嗜热四膜虫细胞培养液中,探讨双氢青蒿素对嗜热四膜虫的毒性作用。采用CCK-8法检测嗜热... 详细信息

以嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)为试验对象,双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)以终浓度为0(对照组)、40、80、160和320μmol/L分别加入到嗜热四膜虫细胞培养液中,探讨双氢青蒿素对嗜热四膜虫的毒性作用。采用CCK-8法检测嗜热四膜虫细胞增殖,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态结构及运动,采用流式细胞术检测线粒体膜电位,检测细胞内抗氧化还原酶活力和线粒体酶活力。结果表明,DHA显著抑制嗜热四膜虫增殖(P<0.05),在一定暴露时间内增殖活力和浓度呈负相关。双氢青蒿素作用嗜热四膜虫48h后各暴露组细胞皱缩变圆,对照组细胞呈椭圆状。其中在160和320μmol/L DHA暴露下,嗜热四膜虫在培养基中的活动减弱,细胞核出现固缩和浓染等特征,线粒体膜电位显著下降(P<0.05)。随着DHA浓度增加,细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性先增强后下降。线粒体内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性逐渐降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明,双氢青蒿素对嗜热四膜虫具有毒性作用,抗氧化酶在一定程度上能抵抗双氢青蒿素暴露导致的氧化损伤。氧化应激和线粒体损伤可能是双氢青蒿素对嗜热四膜虫产生毒性效应的重要机制。

关键词：双氢青蒿素细胞形态线粒体损伤氧化应激毒性效应嗜热四膜虫

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：