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西南农业学报 2021年第5期34卷 1008-1014页

作者：陆英贺春萍吴伟怀梁艳琼郑金龙黄兴习金根谭施北易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

【目的】明确我国咖啡炭疽病病原菌种类组成、分布及其致病力分化情况,为咖啡炭疽病的有效防治和抗病育种奠定基础。【方法】采用形态学结合ApMat基因序列比对和系统发育进化分析方法,对从我国咖啡种植区典型炭疽病的叶片、枝条、浆果... 详细信息

【目的】明确我国咖啡炭疽病病原菌种类组成、分布及其致病力分化情况,为咖啡炭疽病的有效防治和抗病育种奠定基础。【方法】采用形态学结合ApMat基因序列比对和系统发育进化分析方法,对从我国咖啡种植区典型炭疽病的叶片、枝条、浆果上分离获得的74株炭疽菌病原菌进行鉴定,并采用离体叶片接种法,对所获得的菌株进行致病力测定,分析菌株的致病力差异。【结果】通过形态学及ApMat基因序列比对分析,55个菌株被鉴定为胶孢复合种群,且归为3个种:Colletotrichum siamense、Colletotrichum nupharicola、Colletotrichum theobromicola。致病力试验表明,不同菌种之间的致病力存在差异,Colletotrichum theobromicola的致病力最强,其次是Colletotrichum siamense,最后是Colletotrichum nupharicola。其中,来自海南白沙咖啡种植基地和农业农村部云南瑞丽咖啡种质资源圃的大部分炭疽病菌株致病力属中等以上水平。【结论】我国主要咖啡种植区的55株咖啡炭疽病病原菌均能致病,但致病力分化明显,且与地理来源具有相关性。

关键词：咖啡炭疽病病原菌 ApMat基因序列分析致病力

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杀菌剂对王草草茎点霉叶斑病病原菌的室内毒力测定

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热带农业工程 2021年第4期45卷 11-14页

作者：陆英林培群粱艳琼贺春萍黄兴吴伟怀易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

采用生长速率法测定王草草茎点霉11种常用杀菌剂室内毒力。结果表明,95%苯醚甲环唑原药的EC50值最小,仅为0.3176 mg/L;其次为咪鲜胺原药,80%多菌灵WP,95%腈菌唑原药、50%嘧菌酯WDG、96%戊唑醇原药、40%腈菌唑WP的EC50值均小于10 mg/L,75... 详细信息

采用生长速率法测定王草草茎点霉11种常用杀菌剂室内毒力。结果表明,95%苯醚甲环唑原药的EC50值最小,仅为0.3176 mg/L;其次为咪鲜胺原药,80%多菌灵WP,95%腈菌唑原药、50%嘧菌酯WDG、96%戊唑醇原药、40%腈菌唑WP的EC50值均小于10 mg/L,75%百菌清WP的EC50值为160.3404,50%异菌脲WP的EC50值为258.2931,抑菌效果较差。因此,建议生产上使用苯醚甲环唑、咪鲜胺、多菌灵、晴菌唑、戊唑醇和嘧菌酯等抑菌效果较好的药剂防治王草草茎点霉。

关键词：王草草茎点霉杀菌剂室内毒力测定

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聚乙二醇介导咖啡炭疽菌遗传转化体系的建立

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南方农业学报 2020年第11期51卷 2706-2712页

作者：陆英贺春萍吴伟怀梁艳琼黄兴郑金龙李锐易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海口571101

【目的】建立高效制备咖啡炭疽菌原生质体及聚乙二醇(PEG)介导的遗传转化体系的方法,为开展咖啡炭疽菌的致病分子机理研究打下基础。【方法】以咖啡炭疽菌野生型菌株BSC2-2为试验材料,通过PEG介导原生质体转化法将含有氯嘧磺隆标记和绿... 详细信息

【目的】建立高效制备咖啡炭疽菌原生质体及聚乙二醇(PEG)介导的遗传转化体系的方法,为开展咖啡炭疽菌的致病分子机理研究打下基础。【方法】以咖啡炭疽菌野生型菌株BSC2-2为试验材料,通过PEG介导原生质体转化法将含有氯嘧磺隆标记和绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的质粒pCB1532-G转入BSC2-2原生质体中,对获得的转化子进行遗传稳定检测、PCR分子检测和激光共聚焦显微观察。【结果】BSC2-2对氯嘧磺隆的耐受浓度为200.0 mg/L。最佳遗传转化体系为:28℃下用2.5%裂解酶酶解BSC2-2菌丝2 h,收集原生质体,再经MTC缓冲液冲洗重悬后将质粒pCB1532-G转入原生质体,在RM培养基中混匀再生,获得转化子。GFP基因的PCR扩增和分生孢子荧光观察结果表明,GFP基因已成功插入并整合到咖啡炭疽菌BSC2-2基因组中。转化子与野生型菌株在菌落形态、生长速率及致病力上无明显差别,表明GFP基因在咖啡炭疽菌BSC2-2基因组中稳定遗传。【结论】成功建立了PEG介导的咖啡炭疽菌遗传转化体系,获得与野生型菌株在菌落形态、生长速率及致病性上无明显差别的转化子,为后续研究咖啡炭疽菌的基因功能和致病机理提供技术支持。

关键词：咖啡炭疽菌 PEG介导遗传转化转化子鉴定生长致病性

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16种杀菌剂对‘热研4号’王草草茎点霉菌的室内毒力测定

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中国热带农业 2021年第6期 63-67页

作者：何宝霞陆英黄兴林培群贺春萍吴伟怀易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101 南京农业大学植物保护学院江苏南京210000

由草茎点霉(Phoma herbarum)引起的王草叶斑病,在热带地区普遍发生,导致‘热研4号’王草生长量减少、产量降低、经济效益降低。为筛选对王草叶斑病病原菌高效低毒的杀菌剂,本研究采用菌丝生长速率法分别测定16种杀菌剂对草茎点霉菌的毒... 详细信息

由草茎点霉(Phoma herbarum)引起的王草叶斑病,在热带地区普遍发生,导致‘热研4号’王草生长量减少、产量降低、经济效益降低。为筛选对王草叶斑病病原菌高效低毒的杀菌剂,本研究采用菌丝生长速率法分别测定16种杀菌剂对草茎点霉菌的毒力。结果表明:25%吡唑醚菌酯EC的EC_(50)值最小,仅为0.1379mg/L,对王草草茎点霉的毒力最强;10%苯醚甲环唑WGD、325g/L苯甲·嘧菌酯SC、125g/L氟环唑SC、22.5%啶氧菌酯SC、50%咪鲜胺锰盐WP、400g/L嘧霉胺SC和430g/L戊唑醇SC的EC50值均小于1mg/L,分别为:0.3064mg/L、0.3260mg/L、0.3548mg/L、0.4657mg/L、0.5272mg/L、0.6743mg/L和0.9974mg/L,对王草草茎点霉的毒力较强;24%腈苯唑SC、25%丙环唑EC、50%多菌灵WP、50%嘧菌酯WGD、80%代森锰锌WP和50%异菌脲WP的EC_(50)值介于1~10mg/L,分别为:1.0939mg/L、1.4405mg/L、1.6659mg/L、1.9023mg/L、7.1811mg/L和9.4764mg/L,对王草草茎点霉的毒力相对较强;70%甲基硫菌灵WP的EC50值为72.4466mg/L,对王草草茎点霉的毒力较弱。75%百菌清WP的EC50值高达985.3153mg/L,对草茎点霉的菌丝生长几乎没有抑制作用。该研究结果可为王草叶斑病进一步的田间防治提供依据。

关键词：王草叶斑病草茎点霉杀菌剂室内毒力测定

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解淀粉芽胞杆菌JNC2摇瓶发酵条件优化

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草业科学 2019年第8期36卷 2159-2167页

作者：梁艳琼吴伟怀习金根李锐郑金龙黄兴贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室

以菌体量和发酵滤液抑制柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)活性为指标,通过单因素和正交试验方法对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JNC2菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明:JNC2菌株最佳... 详细信息

以菌体量和发酵滤液抑制柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)活性为指标,通过单因素和正交试验方法对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JNC2菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明:JNC2菌株最佳培养基为木糖2%,蛋白胨0.4%,酵母粉0.8%,氯化铵0.6%,硫酸镁0.2%;最佳发酵条件为初始pH 6.0,250 mL三角瓶装液量为60 mL,接种量体积分数7%,发酵温度34℃,转速200 r·min^–1,发酵时间72 h,优化后发酵滤液的抑菌活性显著提高了32.61%。

关键词：解淀粉芽孢杆菌发酵条件优化抑菌活性 Colletotrichum gloeosporioides

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不同地区橡胶树红根病菌的生物学特性及室内毒力测定

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热带作物学报 2019年第3期40卷 522-529页

作者：贺春萍李锐梁艳琼吴伟怀黄兴习金根郑金龙易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

橡胶树红根病是我国分布最广、危害最重的橡胶树根部病害。为明确我国海南和云南地区橡胶红根病菌的生物学特性及对杀菌剂的敏感性,采用十字交叉法研究了不同培养条件对病菌菌丝生长的影响,并测定了10种不同杀菌剂对病菌的抑制作用。结... 详细信息

橡胶树红根病是我国分布最广、危害最重的橡胶树根部病害。为明确我国海南和云南地区橡胶红根病菌的生物学特性及对杀菌剂的敏感性,采用十字交叉法研究了不同培养条件对病菌菌丝生长的影响,并测定了10种不同杀菌剂对病菌的抑制作用。结果表明,病原菌在玉米+橡胶根的培养基上生长最快,对温度、pH等适应范围广,温度在13～31℃,pH在3～10均能生长,最适生长温度为28℃,多数菌株最佳pH为7～9,且能利用多种碳氮源;不同的碳源中,果糖、半乳糖、麦芽糖、葡萄糖和甘露糖较适合该菌的生长;在供试氮源中,菌丝在酪氨酸、牛肉浸膏的基础培养基上生长最快,在色氨酸和尿素的基础培养基上生长最慢;光照对病菌有抑制作用,黑暗有利于菌丝生长;菌丝的致死温度为47℃,10 min。不同地区的病原菌株间药剂敏感性存在一定差异,戊唑醇抑菌效果最好,其EC_(50)为0.0312μg/mL,其次为嘧菌酯、十三吗啉、咪鲜胺和腈菌唑,EC_(50)分别为0.5581、0.6759、1.3763和1.5603μg/mL。

关键词：橡胶树红根病橡胶灵芝菌生物学特性室内毒力

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枯草芽孢杆菌Czk1全基因组测序研究

枯草芽孢杆菌Czk1全基因组测序研究

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中国植物病理学会2019年学术年会

作者：梁艳琼吴伟怀谭施北习金根李锐郑金龙陆英黄兴贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种能够产生很多抗菌谱广、可用于农业和药物的具有抗菌活性物质(包括聚酮化合物和脂肽类等次级代谢天然产物)的微生物。枯草芽孢杆菌Czk1是本实验室前期在橡胶树根木质部分离到的一株细菌,对橡胶树... 详细信息

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种能够产生很多抗菌谱广、可用于农业和药物的具有抗菌活性物质(包括聚酮化合物和脂肽类等次级代谢天然产物)的微生物。枯草芽孢杆菌Czk1是本实验室前期在橡胶树根木质部分离到的一株细菌,对橡胶树根病、炭疽病以及西瓜枯萎病等有良好的抑制作用,其可产生脂肽类抗生素对病原菌产生拮抗作用。为进一步研究枯草芽孢杆菌Czk1的代谢机理,深入探明其抑菌机制,进而为今后对该菌株进行改造提供理论基础,因此利用Illumina测序技术对Czk1菌株的基因组进行扫描测序,构建了Illumina PE文库,使用ABySS拼接软件和GapCloser软件组装,使用GeneMarkS软件进行编码基因预测,将预测基因的蛋白序列分别与Nr、Genes、eggNOG和GO数据库进行blastp比对,从而获得预测基因的注释信息。结果发现,Czk1菌株基因总长度为3 648 858,获得4 251个蛋白序列,其中Nr数据库为4 078个,GO数据库为1 651个,eggNOG为3 399个,KEGG为2 121个,注释功能涉及次级代谢产物的合成、转运和代谢,氨基酸的转运、合成和代谢,ATP的产生与转换,信号传导机制,DNA模板复制和转录调控等,涉及的代谢产物为Bacillibactin、Fengycin、Bacillaene、Surfactin、Bacilysin、Subtilosin等。通过在线软件anti SMASH对Czk1全基因组中的可能产生的次级代谢产物合成基因簇进行挖掘,结果共注释到7种,18个次级代谢基因簇,注释到的基因簇有7个微菌素(Microcin)、5个Nrps (nonribosomal peptides)、2个萜烯(Terpene)、2个第三类聚酮类化合物(T3pks)、1个Transatpks-Nrps-Otherks、1个Sactipeptide和一个尚不明确的基因簇。

关键词：枯草芽孢杆菌 Czk1 测序基因

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生防菌Czk1挥发性物质的抑菌活性及其组分分析

生防菌Czk1挥发性物质的抑菌活性及其组分分析

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中国植物保护学会2019年学术年会

作者：梁艳琼唐文董文敏翟纯鑫吴伟怀李锐习金根谭施北郑金龙黄兴陆英贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室南京农业大学植物保护学院

利用双皿对扣法和菌丝生长速率法评定不同营养条件下Czk1挥发性物质的作用活性强弱,筛选产抑菌挥发物质的最优培养基。通过双皿对扣法测定Czk1挥发性物质对橡胶树五种根病菌（红根病菌Ganoderma pseudoferreum、褐根病菌Phellinus noxiu... 详细信息

利用双皿对扣法和菌丝生长速率法评定不同营养条件下Czk1挥发性物质的作用活性强弱,筛选产抑菌挥发物质的最优培养基。通过双皿对扣法测定Czk1挥发性物质对橡胶树五种根病菌（红根病菌Ganoderma pseudoferreum、褐根病菌Phellinus noxius、白根病菌Rigidoprus lignosus、紫根病菌Helicobasidium compactum、臭根病菌Sphaerostilbe repens）和橡胶树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporiodes）的抑菌活性。利用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法（HS-SPME-GC-MS）鉴定Czk1的挥发性物质组分。结果发现,Czk1菌株产抑菌挥发物的最优培养基为LB培养基。其挥发性物质对6种参试病原菌均表现出良好的抑制作用,在细菌浓度为10～5CFU/mL时,抑制率均达到50%以上,在浓度为10～8 CFU/mL时,抑制率高达90%以上;Czk1挥发性物质可影响橡胶树紫根病菌、褐根病菌、臭根病菌和炭疽病菌色素的产生,导致部分病菌菌丝畸形;其对橡胶树炭疽病菌孢子萌发抑制率高达71.30%;其在土壤中对橡胶树红根病菌及褐根病菌仍具有较好的抑菌效果,抑制率分别为63.37%和54.57%。利用HS-SPME-GC-MS对挥发性物质组分进行分析,共分离鉴定获得包括碳氢化合物、酸类、胺类、醇类、酚类、酯类、吡嗪类、醛类、酮类等33种挥发性物质。Czk1所产挥发性物质可作为生防资源应用于橡胶树病害防治上,这些天然的、非化学合成气体物质的开发和利用将是一种新防治策略。

关键词：枯草芽孢杆菌橡胶树病菌挥发性物质抑菌活性

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咖啡驼孢锈菌ITS序列特征及系统发育关系

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热带作物学报 2018年第11期39卷 2250-2258页

作者：吴伟怀刘宝慧李乐黄兴梁艳琼郑金龙汪全伟李锐贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101 南京农业大学植物保护学院江苏南京210095 中国热带农业科学院科技信息研究所海南海口571101

为了了解咖啡驼孢锈菌ITS序列特征及系统发育关系,本研究对来自中国咖啡栽培区的咖啡驼孢锈菌ITS序列进行了克隆。将克隆序列与来自不同咖啡种植区的咖啡驼孢锈菌菌株序列多样性进行了比较,并于NCBI数据库中下载其他锈菌菌株ITS序列进... 详细信息

为了了解咖啡驼孢锈菌ITS序列特征及系统发育关系,本研究对来自中国咖啡栽培区的咖啡驼孢锈菌ITS序列进行了克隆。将克隆序列与来自不同咖啡种植区的咖啡驼孢锈菌菌株序列多样性进行了比较,并于NCBI数据库中下载其他锈菌菌株ITS序列进行系统发育关系研究。结果表明,来自中国咖啡栽培区的咖啡驼孢锈菌ITS序列全长950 bp。其中ITS1长为224 bp,GC含量介于30.36%～31.25%之间;5.8S长为153 bp, GC含量为37.25%;ITS2长483～485 bp,GC含量介于24.12%～25.05%。来自不同咖啡种植区咖啡驼孢锈菌ITS核苷酸序列多态性虽然存在一定差异,但是其多样性十分低且不存在明显的区域分化。在系统发育关系方面,咖啡驼孢锈菌与其他锈菌ITS序列差异明显,能独立聚类成一个分支。

关键词：咖啡驼孢锈菌 ITS序列系统发育

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槟榔黄化病“该防”还是“该治”

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中国热带农业 2018年第5期 46-48页

作者：车海彦曹学仁禤哲罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

槟榔是海南省第二大特色经济作物,黄化病已成为海南省槟榔生产中最大的限制因素,但对黄化病"该防"还是"该治"一直存在争议,造成传染性的黄化病仍在海南不断发生蔓延。本文对如何正确识别传染性的槟榔黄化病、防控... 详细信息

槟榔是海南省第二大特色经济作物,黄化病已成为海南省槟榔生产中最大的限制因素,但对黄化病"该防"还是"该治"一直存在争议,造成传染性的黄化病仍在海南不断发生蔓延。本文对如何正确识别传染性的槟榔黄化病、防控过程中存在的问题及正确的防控方法进行阐述和分析,以期为更好的控制海南槟榔黄化病提供理论和技术指导。

关键词：槟榔黄化病防控手段

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